實驗三細菌的分布與外界因素對細菌的影響

實驗三細菌的分布與外界因素對細菌的影響第一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二實驗目的１.掌握皮膚消毒方法．２.掌握標準紙片擴散法（Ｋ－Ｂ）的原理、操作方法、結果的判讀與解釋及臨床意義．３.掌握紙片擴散法的質量控制方法．４.熟悉人體皮膚、咽喉部細菌檢查方法．５.熟悉紫外線滅菌方法．６.了解空氣、水中細菌的檢查方法．７.了解高壓蒸汽滅菌方法．第二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二試驗內容一、細菌的分布檢查１.空氣中細菌的檢查２.水中細菌的檢查３.皮膚消毒試驗４.飛沫中細菌的檢查二、外界因素對細菌的影響１.高壓蒸汽滅菌法２.紫外線殺菌試驗３.藥物敏感試驗第三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二一、細菌的分布檢查

了解微生物在自然界及正常人體的分布，對于在醫(yī)療實踐及某些科學實驗中樹立無菌觀念有著重要的意義。

第四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二材料

普通瓊脂平板血瓊脂平板

MH瓊脂平板３７℃溫箱無菌棉簽等普通瓊脂平板血瓊脂平板第五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二空氣中細菌的檢查（示教）

左邊培養(yǎng)皿菌落是未被過濾空氣中的細菌，右邊是經過濾空氣中留有的少量細菌第六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二水中細菌的檢查（示教）取水樣1ml

注入無菌空平皿內加15mL已融化并冷卻至約45℃的培養(yǎng)基混勻倒置于３７℃溫箱培養(yǎng)18-２４h后觀察結果第七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二

1.分區(qū)標記

2.接種

3.培養(yǎng)皮膚細菌的檢查：空白對照消毒后消毒前常用的皮膚消毒劑第八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二飛沫中細菌的檢查

用咳碟法將咽喉部細菌接種于血平板第九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二二、外界因素對細菌的影響當外界環(huán)境條件發(fā)生巨大改變，可導致微生物的主要代謝活動發(fā)生障礙，生長停頓，甚至死亡。第十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二1.高壓蒸汽滅菌法（示教）原理：利用密閉的金屬鍋，密閉加熱使鍋內蒸汽壓力增大，溫度隨之升高，殺菌力增強。第十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二高壓蒸汽滅菌器手提式高壓蒸汽滅菌器第十二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二高壓蒸汽滅菌器構造：高壓蒸汽滅菌器是一個雙層的金屬圓筒，兩層之間盛水，外層堅厚，其上方或前方有金屬厚蓋。蓋旁附有螺旋，借以緊閉蓋門，使蒸汽不能外溢，因而蒸汽壓力升高，其溫度亦相應的增高。

第十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二1.加水至外筒內，被滅菌物品放入內筒。2.蓋上滅菌器蓋，擰緊螺旋使之密閉。3.加熱，同時打開排氣閥門，排凈其中冷空氣，關閉排氣閥。繼續(xù)加熱，待壓力表漸漸升至所需壓力時(103.4kPa,121.3℃)，保持壓力和溫度維持15～30min。4.待壓力自行降至零時，慢慢打開排氣閥，排除余氣，開蓋取物。切不可在壓力尚未降低為零時突然打開排氣閥門，以免瓶內液體等沖出外溢。

使用方法第十四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二用途凡耐高溫和潮濕的物品，如培養(yǎng)基、生理鹽水、衣服、紗布、棉花、敷料、玻璃器材、傳染性污物等都可應用本法滅菌。

第十五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二2、紫外線殺菌試驗原理：通過紫外線的照射，破壞及改變微生物的DNA結構，使細菌當即死亡或不能繁殖后代，達到殺菌的目的。

第十六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二優(yōu)點簡單便捷、廣譜高效、無二次污染、便于治理和實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。缺點穿透能力弱特點第十七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二材料普通瓊脂平板18-24h細菌培養(yǎng)物紫外線燈等第十八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二方法細菌接種于普通瓊脂平板上

打開皿蓋，放置于紫外燈下約30cm處，用蓋子蓋住半邊做對照，照射半小時后蓋好蓋子。

培養(yǎng)第十九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二藥物敏感試驗目前臨床微生物實驗室進行藥敏試驗的方法主要有紙片擴散法、稀釋法、抗生素濃度法、自動化儀器等第二十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二標準紙片擴散法（Ｋ－Ｂ）原理：將含有定量抗生素的濾紙片貼在已接種了測試菌的瓊脂表面上，紙片中的藥物在瓊脂中擴散，隨著擴散距離的增加抗生素的濃度呈對數減少,在藥物濃度到達的范圍內對此藥敏感的細菌不能生長而形成透明的抑菌圈，不同細菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了測試菌對該藥的敏感程度，并與該藥物對測試菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負相關。第二十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二材料菌種：葡萄球菌、大腸桿菌菌液培養(yǎng)基：水解酪蛋白瓊脂（MH瓊脂）試劑：各種抗菌藥物紙片（PEN、GEN、STR、CHL)第二十二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二方法

用滅菌棉試蘸取試驗菌涂抹在MH培養(yǎng)基表面，要均勻涂抹3次，室溫下待干燥

以無菌鑷子(燒灼滅菌，注意鑷子要冷卻）取各抗生素紙片貼于表面

培養(yǎng)各紙片中心距>24mm,紙片距平板邊緣應>15mmPENGENSTRCHL第二十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二結果判斷

用毫米尺量取抑菌圈直徑，參考試驗指導表3-6的標準判讀結果，按敏感（S）、中介（I）、耐藥（R）報告。

第二十四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期二材料分配分組兩人一組菌種金葡菌、大腸桿菌各一支培養(yǎng)基2塊普通平板/組（皮膚細菌的檢查、紫外線殺菌試驗）2塊MH平板/組（藥物敏感試驗）1塊血平板/組（咽喉部細菌的檢查）第二十五頁，共二十六