胸腺激素課件

多肽與蛋白質(zhì)類藥物之

胸腺激素的制備吳冶紅/生技0912011/11/11大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院胸腺位于縱膈腔上部、胸骨的后方；胸腺發(fā)生于胚胎第二個(gè)月，到出生后兩年內(nèi)，生長(zhǎng)迅速，體積較大，到青春期仍然發(fā)育，青春期后萎縮。胸腺是一個(gè)激素分泌器官，對(duì)免疫功能有多方面影響。2011/11/12大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院1966年戈?duì)柎奶?Goldstein)和懷特(White)首先從小牛胸腺組織中提取得到一種具有生物活性的物質(zhì)，命名為胸腺素(thymocin)，隨后進(jìn)行了臨床應(yīng)用。由于小牛胸腺來(lái)源有限，難于大量生產(chǎn)，而我國(guó)豬源比較豐富，以豬胸腺為原料，參考牛胸腺組分5的提取、純化方法而制得的豬胸腺激素注射液，與國(guó)外的小牛激素作比較，活力相當(dāng)，無(wú)明顯不良反應(yīng)。2011/11/13大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院表4-1重要的胸腺激素制劑2011/11/14大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院1.胸腺激素1）結(jié)構(gòu)和性質(zhì)

胸腺激素組分5是由在80℃熱穩(wěn)定的40~50種多肽組成的混合物，Mr1000~15000，pI3.5~9.5。這些多肽共分三個(gè)區(qū)域：

分區(qū)pIΑ區(qū)低于5.0的組分β5.0~7.0間的組分γ7.0以上的組分(組分很少)2011/11/15大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院

對(duì)分離的多肽進(jìn)行免疫活性測(cè)定，有活性的稱為胸腺素，如胸腺素α1；無(wú)活性者則稱為多肽，如多肽β1。目前已經(jīng)研究清楚，胸腺素組分5中，胸腺素α1

、α5

、α7

、β3和β4等是具有調(diào)節(jié)胸腺依賴性淋巴細(xì)胞分化和體外免疫反應(yīng)的活性組分。它們的主要生物學(xué)功能表現(xiàn)在：連續(xù)誘導(dǎo)T細(xì)胞分化發(fā)育的各個(gè)階段，放大并增強(qiáng)成熟T細(xì)胞對(duì)抗原或其他刺激物的反應(yīng)，維持機(jī)體的免疫平衡狀態(tài)2011/11/16大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院沉淀上清冷卻至4℃，加入5倍體積的-10℃丙酮，過(guò)收集沉淀，干燥后得丙酮粉(組分3)。分段鹽析將丙酮粉溶于pH7.0的磷酸鹽緩沖液中，加硫酸銨至飽和度為0.25，離心除去沉淀，上清液(組分4)調(diào)pH為4.0，加硫酸銨至飽和度為0.50，得鹽析物。②工藝過(guò)程2011/11/19大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院超濾將鹽析物溶于pH8.0的10mmol/LTris-Hcl緩沖液中，超濾，取相對(duì)分子質(zhì)量在15000以下的超濾液。脫鹽、干燥超濾液經(jīng)SephadexG-25脫鹽后，冷凍干燥得胸腺素(組分5)。②工藝過(guò)程2011/11/110大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院3）檢驗(yàn)方法活力測(cè)定：E-玫瑰花結(jié)升高百分?jǐn)?shù)不得低于10%；相對(duì)分子質(zhì)量15000以下。4）作用與用途胸腺激素為免疫調(diào)節(jié)劑，臨床上主要用于以下方面的治療：①原發(fā)性和繼發(fā)性免疫缺陷病，如反復(fù)上呼吸道感染等；②自身免疫病，如肝炎、腎病、紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、重癥肌無(wú)力等；③變態(tài)反應(yīng)性疾病，如支氣管哮喘等；④細(xì)胞免疫功能減退的中老年人疾病，并可抗衰老；⑤腫瘤輔助治療。2011/11/111大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院2.胸腺肽1）結(jié)構(gòu)與性質(zhì)胸腺肽(thymus

peptides)是從冷凍的小牛(或豬、羊)胸腺中，經(jīng)提取、部分熱變性、超濾等工藝過(guò)程制備出的一種具高活力的混合肽類藥物制劑。胸腺肽中主要是Mr9600和7000左右的兩類蛋白質(zhì)或肽類，AA組成達(dá)15種，必須氨基酸含量高，還含有RNA0.2~0.3mg/mg制劑。對(duì)熱較穩(wěn)定，加溫80℃生物活性不降低。經(jīng)蛋白酶水解作用，生物活性消失。2011/11/112大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院2）生產(chǎn)工藝①工藝路線2011/11/113大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院原料處理取-20℃冷藏小牛胸腺，用無(wú)菌剪刀剪去脂肪、筋膜等非胸腺組織，再用冷無(wú)菌蒸餾水沖洗，置于滅菌絞肉機(jī)中絞碎。部分熱變性、離心、過(guò)濾將凍結(jié)的胸腺勻漿融化后，置水浴上加熱攪拌至80℃,保持5min，迅速降溫，放置-20℃下冷藏2~3d。然后取出融化，以5000r/min,離心40min，溫度2℃，收集上清，出去沉渣，用濾紙漿或微孔濾膜(0.22μm)減壓抽濾，得澄清濾液。②工藝過(guò)程2011/11/114大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院超濾、提純、分裝、凍干將濾液用Mr截流值為10000以下的超濾膜進(jìn)行超濾，收取Mr在10000以下的活性多肽，得精制液，置-20℃冷藏。經(jīng)檢驗(yàn)合格，加入3℅甘露醇作賦形劑，微孔濾膜除菌過(guò)濾、分裝、冷凍干燥即得注射用胸腺肽。②工藝過(guò)程2011/11/115大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院2011/11/116大連大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院3）檢驗(yàn)方法活力測(cè)定同胸腺素。相對(duì)分子質(zhì)量10000以下。4）作用與用途調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能，有較好的抗衰老和抗病毒作用，適用于各種原發(fā)性或繼發(fā)性T細(xì)胞缺陷病某些自身免疫性疾病，