常見腫瘤免疫標(biāo)記

常見腫瘤免疫標(biāo)記常見腫瘤免疫標(biāo)記第1頁免疫組化基礎(chǔ)原理抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合原理，經(jīng)過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)識抗體顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))，對其進(jìn)行定位、定性及定量研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)。常見腫瘤免疫標(biāo)記第2頁常見方法EPOS（一步法）SP法-鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化酶連接法二步EnVision（優(yōu)點(diǎn)：敏感性大幅增強(qiáng)，不受內(nèi)源性生物素干擾）SABC法（三步法）常見腫瘤免疫標(biāo)記第3頁結(jié)果判定每項指標(biāo)都有其抗體結(jié)合對應(yīng)位點(diǎn)，假如定位不準(zhǔn)確，則不能判為陽性。結(jié)果中“±”有相當(dāng)一個別為背景與腫瘤表示均呈陽性，無法區(qū)分，其原因大致有：孵育過長；抗原抗體交叉反應(yīng)；沖洗不足；血清封閉不足或錯誤；二抗與組織非特異性結(jié)合。標(biāo)本沒有按規(guī)范程序固定。（固定液、固定時間）常見腫瘤免疫標(biāo)記第4頁腸癌中P53表示常見腫瘤免疫標(biāo)記第5頁腸癌中MDR表示常見腫瘤免疫標(biāo)記第6頁肺癌中Ki-67表示常見腫瘤免疫標(biāo)記第7頁胃癌中EGFR表示常見腫瘤免疫標(biāo)記第8頁胃癌中AFP表示常見腫瘤免疫標(biāo)記第9頁消化道癌標(biāo)識我科常見胃癌標(biāo)識：VEGF,EGFR,P-gp,GST-π,Topo-Ⅱ,Ki-67,AFP,P53,C-erbB-2,C-erbB-3,C-erbB-4,TS,TP.我科常見大腸癌標(biāo)識：VEGF,EGFR,P-gp,GST-π,Ki-67,P53,MSH2,P21,TS,TP.常見腫瘤免疫標(biāo)記第10頁耐藥相關(guān)基因標(biāo)識P-糖蛋白（P-gp）

谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶（GST-π）

DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（Topo-Ⅱ）腫瘤產(chǎn)生耐藥生物學(xué)基礎(chǔ)取決于腫瘤多藥耐藥基因擴(kuò)增，瘤組織生成GST-π

、TOPO-Ⅱ和P-gp含量升高，則耐藥性增強(qiáng)。影響化療療效主要原因是細(xì)胞內(nèi)耐藥、抗腫瘤藥藥代動力學(xué)/藥效學(xué)、腫瘤血供、藥品擴(kuò)散Pgp-MDR及腫瘤細(xì)胞增殖能力等。其中MDR關(guān)注點(diǎn)是mdri/Pgp、MDR、LRP、拓?fù)洚悩?gòu)酶-Ⅱ、谷胱甘肽代謝和凋亡，或腫瘤細(xì)胞增殖活性介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)多向耐藥基因擴(kuò)增。常見腫瘤免疫標(biāo)記第11頁尤其提醒對應(yīng)耐藥關(guān)系：TOPO-Ⅱ陽性對應(yīng)多柔比星、米托蒽醌、鬼臼類；P-gp陽性對應(yīng)長春新堿、VP-6、蒽環(huán)類；GST-π

陽性對應(yīng)各種烷化劑耐藥。據(jù)一些學(xué)者統(tǒng)計，近二分之一大腸癌對GST-π

、TOPO-Ⅱ所介導(dǎo)抗癌藥品順鉑和拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑產(chǎn)生耐藥傾向，并大多呈強(qiáng)耐藥性，提醒大腸癌聯(lián)合化療用藥時，對順鉑和拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑選擇應(yīng)慎重考慮。P-gp陽性表示者對P-gp相關(guān)主要抗癌藥長春新堿、阿霉素等有耐藥傾向。

常見腫瘤免疫標(biāo)記第12頁表皮生長因子受體相關(guān)標(biāo)識表皮生長因子受體（EGFR）、人類表皮生長因子受體-2（C-erbB-2）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）。

C-erbB-2為HER-2癌基因表示產(chǎn)物，HER-2為原癌基因，廣泛存在于各種組織中。通常處于非激活狀態(tài)，被刺激激活后含有腫瘤轉(zhuǎn)化活性，其表示越高，瘤株對化療越不敏感，越易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。VEGF與消化道癌形成親密相關(guān)，并參加其侵襲和轉(zhuǎn)移，可作為預(yù)后判斷指標(biāo)。三者在消化道癌中表示含有一致性，它們聯(lián)合檢測可作為判斷胃癌預(yù)后、篩選高危轉(zhuǎn)移患者有效指標(biāo)

。常見腫瘤免疫標(biāo)記第13頁酪氨酸激酶I型受體家族I型表皮生長因子受體是廣泛分布于人體各組織細(xì)胞膜上多功效糖蛋白，分享由細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域及胞漿結(jié)構(gòu)域組成分子信號傳導(dǎo)通道。其家族包含：HER1(EGFR)、HER2(C-erbB-2)、HER3、HER4四種同源受體。其受體及配體在各種實(shí)體瘤如NSCLC、BC、CC、NPC、GC等中過表示，正常組織中低表示。據(jù)報道，C-erbB-3蛋白在慢性胰腺炎、外分泌胰腺癌與胃腸道腫瘤中有顯著表示。常見腫瘤免疫標(biāo)記第14頁p53正常p53生物功效好似“基因組衛(wèi)士（guardianofthegenome）”，在G1期檢驗(yàn)DNA損傷點(diǎn)，監(jiān)視基因組完整性。假如修復(fù)失敗，P53蛋白則引發(fā)細(xì)胞凋亡。假如p53基因突變，對細(xì)胞增殖將失去控制(顯性負(fù)調(diào)控)。p53基因突變與人類50%腫瘤相關(guān)。常見腫瘤免疫標(biāo)記第15頁p21p21能夠和p53共同組成細(xì)胞周期G1>檢驗(yàn)站，降低受損DNA復(fù)制，發(fā)揮抑癌作用.

P21作為一個負(fù)性調(diào)整因子,在依賴野生型p53表示通路上與腫瘤表示、表示含量、表示位置,以及預(yù)后都親密相關(guān).當(dāng)P21、Cyclin、CDK、PCNA四聚體功效受到抑制,則使增殖信號大量活化,造成細(xì)胞異化和惡變.

常見腫瘤免疫標(biāo)記第16頁P(yáng)CNA:Proliferatingcellnuclearantigen常見腫瘤免疫標(biāo)記第17頁p53是G1期能否進(jìn)入S期分子警察復(fù)制DNA損傷p53p21P21-cyclin-CDK復(fù)合物Rb-E2FRb-P+E2F 阻滯G1期修復(fù)無法修復(fù)凋亡誘導(dǎo)（P21CIP1）（Cyclin-CDK活性抑制）開啟增殖常見腫瘤免疫標(biāo)記第18頁聯(lián)合表示意義P53、c-erbB-2、P21表示與消化道癌分化程度,浸潤程度,轉(zhuǎn)移程度及臨床分期呈正相關(guān).多基因聯(lián)合表示檢測對消化道癌預(yù)后判斷顯著優(yōu)于單基因表示檢測.

據(jù)國外文件報道，分化差大腸癌中，P53、P21蛋白過表示常伴伴隨K–ras、p53基因高突變，所以該對應(yīng)關(guān)系很可能參加了大腸癌形成及演進(jìn)。常見腫瘤免疫標(biāo)記第19頁Ki-67增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)對于研究腫瘤細(xì)胞生物化學(xué)特征、惡性程度及預(yù)后判斷等含有一定價值。Ki-67是真核細(xì)胞G1和S期合成一個36kD核蛋白，是DNA聚合酶輔助蛋白，直接參加細(xì)胞增殖過程中DNA復(fù)制。在靜止期細(xì)胞內(nèi)含量極少，從G1晚期開始增加，S期到達(dá)高峰，G2期和M期呈顯著下降，其表示程度能客觀反應(yīng)瘤細(xì)胞增殖活性。

常見腫瘤免疫標(biāo)記第20頁AFPAFP（甲胎蛋白）是在體液中發(fā)覺70kD癌胚抗原，正常表示于胎肝，常態(tài)下成人組織中呈陰性。在個別生殖細(xì)胞腫瘤（尤其卵黃囊瘤）和多數(shù)肝細(xì)胞肝癌中高表示。依據(jù)其病理組織形態(tài)學(xué)特點(diǎn)和癌細(xì)胞內(nèi)AFP染色陽性表示，并對比3個月胚胎胃腸組織學(xué)改變，將組織學(xué)類型分為4個亞型：肝樣型（34.9％），胎兒胃腸型（23.8％）和肝樣型伴腸胚分化混合型（38.1％）以及卵黃囊瘤樣型（3.2％）。結(jié)論：AFP陽性胃癌與普通型胃癌不一樣，是一組含有獨(dú)特臨床病理特征高度惡性腫瘤。

常見腫瘤免疫標(biāo)記第21頁MSH2MSH2基因是錯配修復(fù)基因主要組員之一,其表示蛋白參加DNA錯配修復(fù)反應(yīng)。MSH2等錯配修復(fù)基因缺點(diǎn)造成錯配修復(fù)蛋白失表示及微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI+)進(jìn)而引發(fā)基因組不穩(wěn)定,誘發(fā)腫瘤,尤其是在遺傳性非息肉性大腸癌(HNPCC)常見有MSH2基因缺點(diǎn)。

Muir-Torre綜合征、卵巢癌也與該基因親密相關(guān)。有文件稱，若錯配修復(fù)蛋白2在回腸與結(jié)腸中隱窩細(xì)胞有失表示，隱窩細(xì)胞會快速更新，產(chǎn)生分化細(xì)胞遷移至隱窩腺腔內(nèi)，參加了腫瘤形成。常見腫瘤免疫標(biāo)記第22頁HNPCC遺傳原因：

(1)家庭組員中有三人以上患有結(jié)直腸癌，其中兩人以上為同一代；

(2)最少相近兩代人都有發(fā)??；

(3)其中最少有一人是在50歲以前診療為結(jié)直腸癌。

若滿足上述原因中一條，一級親屬亦應(yīng)進(jìn)行HNPCC突變檢測。攜帶MLH1和MSH2突變者罹患結(jié)直腸癌一生累計風(fēng)險高達(dá)80%。

若免疫組化檢測出腫瘤細(xì)胞核為陰性，提醒該基因失活，發(fā)生了hMLH1和hMSH2基因胚系突變。

常見腫瘤免疫標(biāo)記第23頁TS&TP5-FU代謝(DPD，TP，dUTPase)、DNA修復(fù)(ERCC2，XRCC1)，血管生成(COX-2，EGFR，IL-8，PLA2)以及藥品解毒(GST-π)基因mRNA水平影響著晚期消化道癌患者預(yù)后。TS（胸苷酸合成酶）是DNA合成中限速酶，在DNA合成與修復(fù)中起主要作用，并與細(xì)胞分裂和增生關(guān)系親密。TS高表示預(yù)示著腫瘤高侵襲性。TS與ERCC1（切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因）分別為標(biāo)志氟尿嘧啶(5-Fu)、奧沙利鉑(L-OHP)耐藥指標(biāo)。TP（胸苷磷酸化酶）基質(zhì)TP表示對腫瘤微血管密度產(chǎn)生顯著影響

。TP表示對預(yù)測5-FU化療療效、判斷結(jié)腸癌預(yù)后有一定指導(dǎo)意義。常見腫瘤免疫標(biāo)記第24頁肺癌標(biāo)識我科常見肺癌標(biāo)識：VEGF-C3,EGFR,P-gp,p53,Ki-67,PE,CD24,CA125,bcl-2,Tslc1.常見腫瘤免疫標(biāo)記第25頁VEGF-C3血管內(nèi)皮生長因子-C(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF-C)是迄今發(fā)覺最主要淋巴管生成因子,VEGF-C誘導(dǎo)淋巴管生成與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移親密相關(guān)。所以,以VEGF-C為靶點(diǎn)抑制淋巴管生成已成為抗腫瘤轉(zhuǎn)移主要策略之一。常見腫瘤免疫標(biāo)記第26頁CA125CA125（糖鏈抗原125）又稱卵巢癌抗原（OCA）是由一組糖基轉(zhuǎn)移酶綜合作用而產(chǎn)生，主要存在于癌組織中。肺癌中CA125敏感性56.43%、特異性84.72%。

CA125檢測在對NSCLC診療、NSCLC與SCLC判別診療中含有一定價值,對肺癌療效觀察、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)監(jiān)測及預(yù)后有較大輔助診療意義.

常見腫瘤免疫標(biāo)記第27頁bcl-2Bcl-2蛋白是bcl-2原癌基因編碼產(chǎn)物，是一個定位于線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和連續(xù)核周膜

25kD膜蛋白，廣泛分布。Bcl-2蛋白家族是一個尤其家族，組員中有些促進(jìn)凋亡，如Bad、Bid、Bax，有些組員阻止細(xì)胞凋亡,如Bcl-2、Bcl-x、Bcl-w。Bcl-2能夠阻止細(xì)胞色素c從線粒體釋放到細(xì)胞質(zhì)，從而抑制了細(xì)胞凋亡。

有文件稱，Bcl-2蛋白過分表示在肺癌發(fā)生中起主要作用,是肺癌早期表現(xiàn),有可能成為肺癌早期診療主要參考指標(biāo)。

常見腫瘤免疫標(biāo)記第28頁Tslc1TSLC1（腫瘤阻抑基因1）是一個新抑癌基因,其失活與消化系腫瘤發(fā)生,浸潤轉(zhuǎn)移及預(yù)后有著主要關(guān)系.TSLC1失活主要機(jī)制之一是基因甲基化.TSLC1抑癌機(jī)制當(dāng)前還不完全明確,認(rèn)為與細(xì)胞黏附,細(xì)胞間信號傳導(dǎo),參加腫瘤免疫,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和抑制細(xì)胞生長周期相關(guān).常見腫瘤免疫標(biāo)記第29頁CD24CD24是一個低分子量高度糖基化黏蛋白樣黏附分子，經(jīng)過糖基磷脂酰肌醇黏附在細(xì)胞膜上，最初被認(rèn)為是一個B細(xì)胞標(biāo)志物，在B細(xì)胞分化早期階段表示。最近國外一些研究發(fā)覺，CD24在上皮細(xì)胞起源腫瘤如非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌等腫瘤中呈高表示，同時還發(fā)覺CD24表示和腫瘤侵襲性有一定關(guān)