人參皂苷rg3對馬立克氏病毒感染的預(yù)防作用

人參皂苷rg3對馬立克氏病毒感染的預(yù)防作用

結(jié)果表明，rg3、rg1和rh1等胡蘿卜類化合物具有抗癌和腫瘤作用。1材料和方法1.1病毒株和藥物株實驗動物為1日齡健康公雞,未接種馬立克氏病毒疫苗,平均體重30~35g。馬立克氏病毒株(MDV)購自北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所。人參皂苷Rg3購自吉林大成醫(yī)藥公司;陽性對照藥物鹽酸嗎啉胍(ABOB)粉劑購自聊城市利民藥店。1.2方法1.2.1雞馬立克氏病毒的檢測1日齡雛雞飼養(yǎng)觀察3d后,確認無疾病的選擇65只,稱重,隨機分成4組。(1)人參皂苷Rg3處理組,4日齡雛雞20只,正常飼養(yǎng),第6天開始添加人參皂苷Rg3,在8日齡時接種馬立克氏病毒,然后正常飼養(yǎng)。(2)鹽酸嗎啉胍對照組,4日齡雛雞20只,正常飼養(yǎng),第6天開始服用鹽酸嗎啉胍,在8日齡時接種病毒,然后正常飼養(yǎng)。(3)病毒感染對照組,4日齡雛雞20只,正常飼養(yǎng),在8日齡時接種病毒,然后正常飼養(yǎng)。(4)正常對照組,4日齡雛雞5只,單獨飼養(yǎng)在一個安全的地方,正常飼養(yǎng),嚴格消毒,防止MDV感染。1.2.2給藥及給藥風(fēng)險(1)人參皂苷Rg3組,每千飼料添加0.4g人參皂苷Rg3,拌料混勻。6日齡開始飼喂,連續(xù)喂2d后攻毒。攻毒后繼續(xù)給藥7d;間隔3d后再給藥7d;再間隔3d,給藥7d,共3個療程。(2)鹽酸嗎啉胍對照組,每千克飼料添加2gABOB,拌料混勻。6日齡開始飼喂,連續(xù)喂2d后攻毒。攻毒后繼續(xù)給藥7d;間隔3d,給藥7d;再間隔3d,給藥7d,共3個療程。(3)病毒感染對照組和正常對照組都不用藥。1.2.3dv強毒攻擊人參皂苷Rg3組、鹽酸嗎啉胍對照組和病毒感染對照組,于8日齡時均用MDV強毒攻擊,每羽注射以細胞培養(yǎng)液稀釋的含2000PFU的MDV強毒0.2mL,通過腹腔注射。正常對照組雞腹腔注射等量的生理鹽水。各組試驗雞分別嚴格隔離飼養(yǎng),自由采食和飲水,飼養(yǎng)管理條件力求一致。1.2.4臨床資料的采集(1)臨床癥狀觀察:每天檢查雛雞被毛、精神狀態(tài)、體態(tài)姿勢、運動情況、食欲和糞便的變化;統(tǒng)計死亡率,對病死雞逐一剖檢,統(tǒng)計各臟器眼觀腫瘤的陽性率。記錄發(fā)病最早日齡、發(fā)病與死亡情況。(2)體重變化觀察:馬立克氏病雞經(jīng)常表現(xiàn)為下痢、消化不良和極度消瘦,因此體重變化是反映動物健康狀態(tài)的重要指標。在攻毒前對所有雞進行稱重,在試驗結(jié)束后對所有存活的雞進行稱重,最后對各組雞的體重進行方差分析,看是否存在顯著差異。(3)病理變化觀察:對死亡的雞剖檢,觀察病理變化,并記錄腫瘤出現(xiàn)的部位。(4)試驗時間:試驗全程60d,在結(jié)束時,對全部存活雞進行稱重,剖殺所有存活雞,觀察并記錄肉眼病變。2結(jié)果與分析2.1臨床癥狀觀察2.1.1發(fā)病及死亡情況在第18天出現(xiàn)臨床癥狀,病雞表現(xiàn)為羽毛逆立、精神沉郁、食欲減退、縮頸呈企鵝樣站立姿勢;并且在第20天就有3只雞發(fā)生死亡。雛雞的發(fā)病和死亡主要集中在22~25日齡時間段。發(fā)病后期,病雞癥狀加重并出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。表現(xiàn)為運動障礙、步態(tài)不穩(wěn),逐漸發(fā)展成不完全麻痹,不能行走,伏臥在地上,一只腳伸向前方,另一只腳伸向后方。少數(shù)雞發(fā)生腹瀉,糞便稀軟呈白色或綠色、褐色等色澤。2.1.2照組要晚的時間試驗雞的發(fā)病和出現(xiàn)死亡時間比病毒對照組要晚。第一例死亡發(fā)生在攻毒后24d,病雞的發(fā)病和死亡也比較集中。臨床癥狀和病毒對照組基本相近。2.1.3第一例死亡發(fā)生時間發(fā)病和死亡出現(xiàn)的時間明顯晚于病毒對照組和鹽酸嗎啉胍組,第一例死亡發(fā)生在攻毒后33d,比病毒對照組晚了13d。并且人參皂苷Rg3組的發(fā)病和死亡并不像病毒對照組那樣集中,只呈零星和散發(fā)狀態(tài)。2.1.4正常對照組2.2人參皂苷rg3組的死亡率在試驗期間(60d),只要是表現(xiàn)出臨床癥狀的雞,都統(tǒng)計為發(fā)病雞。結(jié)果人工感染雞的發(fā)病率為85%,死亡率達60%,具體見表1。從表1中可見,死亡高峰集中在21~27日齡。其中,鹽酸嗎啉胍組的發(fā)病率為70%,死亡率達到40%;人參皂苷Rg3組的發(fā)病率為40%,死亡率僅為20%;正常對照組雞的生長發(fā)育正常,無死亡情況;而病毒對照組的發(fā)病率、死亡率明顯高于用藥組。試驗結(jié)果說明,以人參皂苷Rg3組的發(fā)病率和死亡率最低。2.3病理改變2.3.1參證及病料的侵害組織病理學(xué)和克氏神經(jīng)結(jié)構(gòu)病毒對照組的死亡雞解剖后可見到心、肝、脾、腎和性腺等器官有呈彌漫性或局灶性腫瘤組織增生;肝臟表面和實質(zhì)中可見灰白色油脂狀從粟粒大到蠶豆大的腫瘤結(jié)節(jié),腫瘤結(jié)節(jié)與周圍肝組織的界限明顯;脾臟腫大,表面散在灰白色大小不等的腫瘤結(jié)節(jié),小的如粟粒,大的如黃豆,呈扁平狀或半球狀;腎有綠豆、粟粒大的灰白結(jié)節(jié);睪丸腫大5~7倍,呈現(xiàn)灰白色半透明狀;受侵害的一側(cè)坐骨神經(jīng)腫大,橫紋消失,呈灰白色或黃白色。鹽酸嗎啉胍組死亡和剖殺雞的病變基本上同病毒對照組,但病變程度要輕于病毒對照組。人參皂苷Rg3組在死亡和剖殺雞中也可以見到上述病變,在肝、腎、心、脾、睪丸等處可見到粟粒大的白色結(jié)節(jié),坐骨神經(jīng)一側(cè)腫大,法氏囊可見不同程度的萎縮;但病雞腫瘤病變的程度明顯要輕于以上兩組,表現(xiàn)為發(fā)生的部位少、腫瘤體積小。2.3.2各組大鼠腫瘤陽性率的比較試驗對各組臟器腫瘤的出現(xiàn)情況進行了統(tǒng)計,具體情況見表2。從檢出結(jié)果來看,從高到低依次為病毒對照組、鹽酸嗎啉胍組、人參皂苷Rg3組,病毒對照組的腫瘤陽性率是345%,鹽酸嗎啉胍組的腫瘤陽性率是240%,人參皂苷Rg3組的腫瘤陽性率是195%。利用χ2.4體重和減幅率測定結(jié)果為對試驗雞增重變化進行了差異比較,結(jié)果見表3,由表3可見,人參皂苷Rg3組、鹽酸嗎啉胍組、病毒對照組和正常對照組試驗雞在6日齡時的平均體重約為75.00g左右,試驗?zāi)┑钠骄w重分別為680.40g、560.30g、419.40g和962.20g。將人參皂苷Rg3組、鹽酸嗎啉胍組、病毒對照組和正常對照組比較后,發(fā)現(xiàn)以病毒對照組減重的幅度最大,達542.80g;其次是鹽酸嗎啉胍組,人參皂苷Rg3組的減幅最小。人參皂苷Rg3組與病毒對照組相比,差異達到了極顯著水平;與鹽酸嗎啉胍組比,差異達到了顯著水平。表明人參皂苷Rg3組能促進雞體重的增加,減少病毒對機體的侵害。3增強機體抗病力試驗證明,人參皂苷Rg3能夠推遲人工感染雞的發(fā)病時間,明顯降低人工感染雞的發(fā)病率和死亡率。在試驗結(jié)束后,存活數(shù)占試驗雞的比率分別為人參皂苷組Rg3為80%、鹽酸嗎啉胍組60%、病毒對照組40%,人參皂苷Rg3處理的存活率明顯要高于病毒對照組,說明人參皂苷Rg3具有較好的治療保護作用。從剖檢變化中可以發(fā)現(xiàn),人參皂苷Rg3組的病變范圍明顯低于病毒對照組,腫瘤的檢出率也低于其他組。分析表明,人參皂苷Rg3很可能是通過增強機體的免疫力來達到抗病毒效果的。李慶章等MD主要病變特征是內(nèi)臟各組織器官中出現(xiàn)單核細胞浸潤而形成腫瘤。單核細胞源于干細胞。本試驗在人工感染MDV雛雞日糧中加入人參皂苷Rg3后,顯著降低了MD腫瘤的發(fā)生率,從感染MDV雛雞腫瘤的檢出率變化情況可以看出,人參皂苷Rg3組的腫瘤檢出率是195%,低于鹽酸嗎啉胍組(P<0.05)。表明人參皂苷Rg3對MD腫瘤病變的發(fā)生有明顯的抑制作用。據(jù)報道,人參皂苷Rg3有顯著的免疫促進作用試驗結(jié)果還表明,人參皂苷Rg3對MD死亡率的影響與鹽酸嗎啉胍組相比差異不顯著,但是和病毒對照組差異顯著。從腫瘤檢出率上看,人參皂苷Rg3組要低于鹽酸嗎啉胍組,鹽酸嗎啉胍組低于病毒對照組。這說明藥物的綜合防治效果依次是人參皂苷Rg3、鹽酸嗎啉胍,人參皂苷Rg3的治療效果優(yōu)于鹽酸嗎啉胍組可能和它們的作用機制不同有關(guān)。鹽酸嗎啉胍的抗病毒機制主要是通過阻斷RNA聚合酶的活性和蛋白質(zhì)的合成來發(fā)揮抗病毒作用的,沒有提高機體免疫力的作用。盡管鹽酸嗎啉胍能降低感染