生物制品質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)審評一般原則

摘要：本文對《生物制品質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)審評一般原則》中有關(guān)驗證參數(shù)的問題進行了闡述質(zhì)控分析方法的驗證就是根據(jù)方法的需要測定該方法的專屬性、準確性、精密度、線性、范圍、檢測限度、定量限度、耐用性等幾個指標中的一個或幾個，所以上述參數(shù)的驗證是本技術(shù)審評一般原則中的核心內(nèi)容。本文擬就該部分內(nèi)容進行補充說明。

1、精密度

由于各種生物活性測定方法的變異均較大，所以精密度往往不太理想。對于一些新建立的活性測定方法而言，測定結(jié)果不穩(wěn)定、難以進行定量及無法準確標示等問題已成為質(zhì)控中的主要問題。針對上述情況，本技術(shù)審評一般原則擬強調(diào)，作為測定有效成分含量水平的生物活性指標，需采用定量的測定方法，并盡可能減少方法的變異。參照國外的有關(guān)標準，對各種測定方法，提出了一般的可接受標準。

經(jīng)課題研究組討論認為，本原則中所提出的可接受標準，一般情況下均可以做到。對于個別難以做到的，可結(jié)合制品特性及其臨床效應(yīng)等進行綜合評估，如基本不影響到產(chǎn)品的安全、有效和質(zhì)量可控，也可考慮適當放寬。

鑒于生物學(xué)測定方法的多樣性和復(fù)雜性，本原則的正文中未對精密度測定的重復(fù)次數(shù)作明確要求。從理論上考慮，測定次數(shù)主要取決于方法學(xué)的誤差，變異大的方法應(yīng)增加測定次數(shù)；從可操作性角度考慮，對于復(fù)雜、成本高及周期長的方法，重復(fù)次數(shù)太多，試驗難度將很大。所以關(guān)于驗證次數(shù)的設(shè)計，需綜合考慮，應(yīng)以基本達到驗證的目的為準則。驗證設(shè)計方案中的重復(fù)次數(shù)供參考。

2、線性

線性關(guān)系一般是指檢測結(jié)果與樣品含量的直線相關(guān)性，而且一般情況下線性關(guān)系是定量測定的基礎(chǔ)，所以應(yīng)盡可能摸索出存在較好線性關(guān)系的測定方法并進行線性驗證。但對于某些生物活性測定方法而言，其線性范圍較?。ㄈ缂毎麥y定中呈S曲線），這時采用曲線擬合的方法應(yīng)更合理。鑒于目前曲線擬合的方法在生物活性測定中被廣泛采用，所以本原則中的線性驗證亦包括了有關(guān)曲線擬合的內(nèi)容。

3、專屬性和準確性

專屬性和準確性不是每個生物學(xué)測定方法都需要測定的參數(shù)，但同樣重要，只是對于不同品種的不同方法應(yīng)有不同的考慮，所以對于這兩個參數(shù)進行了較詳細的說明，并列舉了一些具體情況，提請研制單位在建立方法和進行方法驗證過程中能有所考慮。

4、耐用性

由于生物學(xué)測定結(jié)果對分析條件往往比較敏感，所以方法的耐用性驗證是非常重要的。為保證測定結(jié)果穩(wěn)定，研究者應(yīng)對此項工作給予充分重視。但是考慮到目前國內(nèi)的相關(guān)研究現(xiàn)狀，在此項研究工作的起步階段，為不致使驗證工作量過大，暫提出：根據(jù)具體情況，可針對一個或幾個關(guān)鍵的參數(shù)進行驗證。今后將視國內(nèi)相關(guān)研究的進展，逐步提高此項驗證要求。

5、檢測限度和定量限度

這兩項是雜質(zhì)檢查中需測定的參數(shù)。根據(jù)目前國內(nèi)的實際狀況，部分生物制品尚未建立雜質(zhì)檢查項目，但是對于已建立的雜質(zhì)檢測方法，應(yīng)參照本原則進行驗證。

對于生物活性測定而言，精密度、線性和范圍是非常重要的驗證參數(shù)，所以本原則不但提出了一般性的驗證要求，而且附上了推薦的驗證設(shè)計方案（參照WHO的建議），供研制單位參考。

最后需要強調(diào)的是，分析方法的驗證工作最終是為了保證產(chǎn)品的質(zhì)量可控，以此為目的，各種質(zhì)控分析方法之間存在著一定的內(nèi)在聯(lián)系，所以在評價驗證工作時，需對各種方法及其驗證結(jié)果進行綜合分析和評價。基于此考慮，本原則中還增加了一項綜合分析的內(nèi)容，提請研制單位給予關(guān)注。關(guān)于起草《生物制品質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)審評一般原則》的一些考慮

近年來，我國生物藥物研發(fā)工作已取得長足的進步，但是在質(zhì)量控制體系方面還有許多薄弱環(huán)節(jié)，尤其體現(xiàn)在質(zhì)控標準的方法驗證工作上。大部分研制單位在建立標準時，不進行或很少進行方法學(xué)的研究和驗證工作。對于理化分析項目，基本上都是套用國家規(guī)程中已收載品種的檢定方法和判定標準；對于生物活性測定項目，即使無標準方法，也大多是參照文獻上報道的方法，簡單地重復(fù)一下，只要能完成實驗過程，得到實驗結(jié)果，便根據(jù)很有限的實驗數(shù)據(jù)確定一個標準，對其合理性和科學(xué)性往往難以判斷。

而不經(jīng)驗證的檢定方法用于產(chǎn)品質(zhì)控會存在很大的問題。比如，對于活性測定而言，如果不經(jīng)方法驗證，不了解測定方法的精密度，則對于批間產(chǎn)品檢定結(jié)果的差異便難以分析，不知是由于方法的變異引起的，還是批間產(chǎn)品的質(zhì)量差異引起的，對于其擬定標準的合理性更無從判斷。

以往由于各方面條件的限制，研發(fā)單位對于質(zhì)控方法驗證工作不夠重視，從審評角度講，對于檢定方法的驗證工作也并未加以強調(diào)。然而現(xiàn)階段，非已有國家標準的品種在申報的生物制品中的比例不斷增加，已有的質(zhì)控方法不一定適用于每一種生物藥物，在新生物制品研究過程中必須研究摸索出適合申報品種的檢定方法，并對擬定的方法進行驗證；而且從嚴格意義上講，對于已有國家標準的質(zhì)控方法也應(yīng)進行適當?shù)尿炞C，以證明在實際的使用條件下該方法也是適用的。因此綜合考慮，隨著國內(nèi)生物技術(shù)研究水平的提高以及生物藥物研發(fā)工作的進一步開展，質(zhì)控分析方法的驗證工作已日益凸現(xiàn)其重要性和必要性。

由于以往國內(nèi)大部分生物制品研制單位很少進行方法學(xué)驗證工作，法規(guī)中也一直缺少相關(guān)的具體要求，所以國內(nèi)這方面的研究基礎(chǔ)較薄弱，本技術(shù)審評一般原則的起草也相當于是一項補缺的工作?？紤]到目前的實際狀況，對于這樣一項起步工作而言，有關(guān)的技術(shù)要求可能不宜一下子提得過多和過高，所以本原則只求關(guān)注那些重點和難點問題，以解決或初步解決目前質(zhì)控中存在的主要問題為目的，并力求具有實用性和可操作性。

生物制品質(zhì)控中采用的方法包括理化分析方法和生物學(xué)測定方法（bioassay）。其中，理化分析方法的驗證原則與化學(xué)藥品基本相同，所以可參照《化學(xué)藥品質(zhì)控方法驗證的指導(dǎo)原則》進行，當然在進行具體驗證時，還需要結(jié)合生物制品的特點考慮。就我國目前生物制品質(zhì)控的實際狀況而言，新引入的理化分析方法并不太多，對于常規(guī)理化分析方法，可能尚不需要對所有的項目均進行全面驗證。對于有些項目需進行一些必要的測試（如HPLC的系統(tǒng)適應(yīng)性測試），對于有些項目（如成品主藥含量測定）仍需要進行較全面的驗證。本技術(shù)審評一般原則擬不對這部分內(nèi)容進行詳細論述。生物制品主要在生物學(xué)測定驗證工作方面具有一定特殊性，所以為突出重點、避免重復(fù)，本技術(shù)審評一般原則僅對生物學(xué)測定方法的驗證工作進行了討論。尤其是在生物活性測定方面，由于此類方法是最具有生物制品特色、最重要、完成難度最大和目前存在問題最多的檢定項目，所以本文將生物活性測定的驗證工作作為重點進行闡述。

起草人查閱了國外有關(guān)技術(shù)要求。ICH和FDA的技術(shù)要求的原則是適用于所有分析方法的，但其具體內(nèi)容并不都適用于生物學(xué)測定方法。WHO的相關(guān)文件主要是針對生物學(xué)測定方法的，但缺少具體的方法和內(nèi)容，其驗證原則與化學(xué)藥基本一致，僅強調(diào)了生物學(xué)測定方法的變異較大，應(yīng)有較寬松的可接受標準。其它文獻有的是針對生物學(xué)測定方法某一方面問題的論述，有的是綜述性的文章。

本技術(shù)審評一般原則參考了國內(nèi)外相關(guān)文獻，在此基礎(chǔ)上，根據(jù)生物學(xué)測定方法自身的特點、目前國內(nèi)生物制品質(zhì)控分析方法中存在的主要問題以及國內(nèi)研究水平的實際等，闡述了有關(guān)方法驗證中的主要關(guān)注點，對于每一個驗證參數(shù)，提出了一般性的建議和要求。

本原則包括了對相關(guān)研究工作和申報資料的建議和一般性要求，擬作為技術(shù)審評中的一般性原則。由于生物制品具有復(fù)雜性和多樣性的特點，本原則不求面面俱到，可能有許多具體問題會出現(xiàn)，而本原則未包