實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件

實驗五蛋白質(zhì)及氨基酸的呈色反應(yīng)實驗五1實驗?zāi)康?、了解構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位和主要連接方式2、了解蛋白質(zhì)和某些氨基酸的呈色反應(yīng)原理。3、學(xué)習(xí)幾種常用的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方法實驗?zāi)康?實驗原理(一)雙縮脲反應(yīng)(Biureareaction)所謂雙縮脲反應(yīng)是指在堿性條件下,雙縮脲與二價銅離子作用,生成紫紅色配合物的反應(yīng)。當(dāng)加熱至180℃左右時,兩分子尿素縮合脫去一分子氨,生成雙縮脲。在肽和蛋白質(zhì)分子中具有肽鍵,其結(jié)構(gòu)與雙縮脲類似,也能發(fā)生此反應(yīng),生成藍紫色或紫紅色的配合物。該反應(yīng)常用于蛋白質(zhì)的定性或定量測定。應(yīng)當(dāng)指出,該反應(yīng)的千擾因素較多,一些含有一個肽健和一個-C0NH2、-C-NH2、-CH2-NH2等基的物質(zhì)也有雙編脲反應(yīng)。并且NH3對此反應(yīng)具有嚴(yán)重的千擾,因為H3與銅離子可生成深藍色的銅氨配合物。因此我們可以說蛋白質(zhì)和多肽都有雙縮脲反應(yīng),但有雙縮脲反應(yīng)的物質(zhì)不一定都是蛋白質(zhì)或多肽。此反應(yīng)所產(chǎn)生顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比,而與蛋白質(zhì)分子量及氛基酸成分無關(guān)。實驗原理3NH2NH.NHNH3↑acNH雙賬NH3HCut,+hNNH昌喜♂需紅色化合物NH24(二)茚三酮反應(yīng)(Ninhydrinreaction)除脯氨酸、羥脯氨酸和革三酮反應(yīng)生成黃色物質(zhì)外,所有的a氨基酸及一切蛋白質(zhì)都能和茚三酮反應(yīng)生成藍紫色物質(zhì)。該反應(yīng)分兩步進行,首先是氨基酸被氧化,產(chǎn)生CO2、NH3和醛,而水合茚三酮被還原成還原型茚三酮;第二步是所生成之還原型茚三酮與另一個水合茚三酮分子和氨縮合生成有色物質(zhì).此反應(yīng)的適宜pH為5~7,同一濃度的蛋白質(zhì)或氨基酸在不同pH條件下的顏色深淺不同,酸度過大時甚至不顯色。該反應(yīng)十分靈敏,1:1500000濃度的氨基酸水溶液即能顯示反應(yīng),因此是一種常用的氨基酸定量方法。但也有些物質(zhì)對革三酮也呈類似的陽性反應(yīng),如β丙氨酸氨和許多一級胺化合物等。所以定性或定量測定中,應(yīng)嚴(yán)防干擾物存在(二)茚三酮反應(yīng)(Ninhydrinreaction)5實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件6實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件7實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件8實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件9實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件10實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件11實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件12實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件13實驗蛋白質(zhì)及氨基酸呈色反應(yīng)課件14實驗