重組DNA技術(shù)的基本工具第2課時高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具（第二課時）第三章

基因工程復(fù)習(xí)——限制酶限制酶來源特點原核生物特異性只識別特定的核苷酸序列只斷開特定部位的磷酸二酯鍵一般由6個核苷酸組成（回文序列—中心對稱、反向平行）切割末端類型黏性末端和平末端復(fù)習(xí)——限制酶②能根據(jù)切出的片段說出限制酶的識別序列和位點···G···CTGCAGACGTC①找出限制酶的識別序列和切割部位/寫出黏性末端EcoRⅠ：—GAATTC—…TCCTAGAATTCTCGGTATGAAT……AGGATCTTAAGAGCCATACTTA…TaqⅠ：—TCGA—復(fù)習(xí)——限制酶③限制酶作用后產(chǎn)生的黏性末端、斷裂的磷酸二酯鍵數(shù)等問題限制酶作用一次：斷開_____個磷酸二酯鍵；產(chǎn)生_____個游離的磷酸基團(tuán)；產(chǎn)生____個黏性末端；消耗____分子水；2222復(fù)習(xí)——限制酶④切割出的片段數(shù)量問題（如圖最多產(chǎn)生多少不同長度的片段？）Ⅰ編號Ⅱ從最小片段算起abc復(fù)習(xí)——DNA連接酶DNA連接酶E.coliDNA連接酶（形成磷酸二酯鍵）T4DNA連接酶只縫合黏性末端縫合黏性末端和平末端（效率低）能堿基互補(bǔ)配對DNA聚合酶vs以一條鏈為模板，將單個核苷酸連接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯鍵復(fù)習(xí)——質(zhì)粒種類：質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒等。條件①具有一個至多個酶切位點【供外源DNA片段（基因）插入其中】②能在細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制或者整合到受體DNA上【使目的基因同步復(fù)制并能在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在】③具有特殊的標(biāo)記基因【便于重組DNA分子的篩選】④對受體細(xì)胞無毒害作用【不影響受體細(xì)胞的正常生命活動】DNA的粗提取與鑒別實驗原理8DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面存在差異，可以利用這些差異，選用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)方法對它們進(jìn)行提取。DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精DNA能溶于物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液在一定溫度下（沸水?。?，DNA被二苯胺試劑染成藍(lán)色初步分離DNA和蛋白質(zhì)溶解DNA鑒定DNA

1.材料：新鮮洋蔥（也可以選擇香焦、菠菜、菜花和豬肝等作為實驗材料，提取DNA的方法可能稍有不同）、研磨液、體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精、2mol/L的NaCl溶液、二苯胺試劑和蒸餾水等。

2.用具：燒杯、量筒、玻璃棒、研缽、紗布、漏斗、試管、試管架、試管夾、酒精燈、石棉網(wǎng)、三腳架、火柴、刀片和天平等。實驗用具DNA的粗提取與鑒別取材、研磨過濾或離心取上清液預(yù)冷酒精析出DNA或離心收集沉淀中的DNANaCl溶液溶解DNA并鑒定DNA的粗提取與鑒別稱取

，切碎，放入研缽，倒入

，充分研磨。洋蔥研磨液選取DNA含量相對較高的生物組織能不能選擇哺乳動物成熟的紅細(xì)胞？取材、研磨過濾或離心取上清液預(yù)冷酒精析出DNA或離心收集沉淀中的DNANaCl溶液溶解DNA并鑒定DNA的粗提取與鑒別稱取

，切碎，放入研缽，倒入

，充分研磨。洋蔥研磨液選取DNA含量相對較高的生物組織不能選擇哺乳動物成熟的紅細(xì)胞，因為它沒有細(xì)胞核和線粒體，幾乎不含DNA作用：溶解并提取DNA研磨的目的：破碎細(xì)胞，使核物質(zhì)容易溶解在研磨液中SDS：使蛋白質(zhì)變性與DNA分離;EDTA：是一種DNA酶的抑制劑，可防止細(xì)胞破碎后

DNA酶降解DNA;Tris：提供緩沖體系，DNA在這個緩沖體系中呈穩(wěn)定狀態(tài)。NaCl：溶解DNA研磨液可以用洗滌劑和食鹽取材、研磨過濾或離心取上清液預(yù)冷酒精析出DNA或離心收集沉淀中的DNANaCl溶液溶解DNA并鑒定DNA的粗提取與鑒別稱取

，切碎，放入研缽，倒入

，充分研磨。洋蔥研磨液在漏斗中墊上紗布過濾研磨液，4℃冰箱中靜置幾分鐘后取

；或?qū)⒀心ヒ旱谷胨芰想x心管中，在1500r/min下離心5min，取

。上清液上清液不可以用濾紙代替，因為DNA會被吸附到濾紙上而大量損失。取材、研磨過濾或離心取上清液預(yù)冷酒精析出DNA或離心收集沉淀中的DNANaCl溶液溶解DNA并鑒定DNA的粗提取與鑒別稱取

，切碎，放入研缽，倒入

，充分研磨。洋蔥研磨液在漏斗中墊上紗布過濾研磨液，4℃冰箱中靜置幾分鐘后取

；或?qū)⒀心ヒ旱谷胨芰想x心管中，在1500r/min下離心5min，取

。上清液上清液上清液中除DNA外，可能含有哪些雜質(zhì)？RNA以及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類等低溫放置幾分鐘的作用？不可以用濾紙代替，因為DNA會被吸附到濾紙上而大量損失。①抑制核酸水解酶的活性，進(jìn)而抑制DNA降解；②抑制DNA分子運(yùn)動，使DNA易形成沉淀析出DNA的粗提取與鑒別取材、研磨過濾或離心取上清液預(yù)冷酒精析出DNA或離心收集沉淀中的DNANaCl溶液溶解DNA并鑒定稱取

，切碎，放入研缽，倒入

，充分研磨。洋蔥研磨液在漏斗中墊上紗布過濾研磨液，4℃冰箱中靜置幾分鐘后取

；或?qū)⒀心ヒ旱谷胨芰想x心管中，在1500r/min下離心5min，取

。上清液上清液在上清液中加入體積相等的、

溶液（體積分?jǐn)?shù)95%）,靜置2~3min，溶液中出現(xiàn)的

就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，用濾紙吸取上面的水分預(yù)冷的酒精白色絲狀物防止絲狀DNA破碎，可以完整的纏在玻璃棒上。析出DNA，使DNA和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)分開冷卻的酒精溶液(體積分?jǐn)?shù)95％)作用是？DNA的粗提取與鑒別取材、研磨過濾或離心取上清液預(yù)冷酒精析出DNA或離心收集沉淀中的DNANaCl溶液溶解DNA并鑒定取兩支20mL的試管，各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaC1溶液中。然后，向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑。混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。試管編號A（對照組）B（實驗組）步驟12mol/L的NaCl溶液5mL步驟2不進(jìn)行任何處理步驟3步驟4沸水浴加熱5min實驗現(xiàn)象溶液不變藍(lán)色實驗結(jié)論加絲狀物或沉淀物加4mL的二苯胺試劑溶液逐漸變藍(lán)提取出的白色絲狀物含有DNA分子①研磨液②體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精③2mol/L的NaCl溶液④二苯胺試劑——溶解并提取DNA——析出DNA，使DNA和蛋白質(zhì)等雜質(zhì)分開——溶解DNA——鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用DNA的粗提取與鑒別各試劑作用DNA的粗提取與鑒別（視頻）結(jié)果分析與評價1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺試劑鑒定的結(jié)果如何？觀察提取的DNA的顏色，如果不是白色狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多。二苯胺試劑鑒定呈現(xiàn)藍(lán)色，說明實驗基本成功；如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能原因有所提取的DNA含量低，或者在實驗操作過程中出現(xiàn)了失誤等。DNA的粗提取與鑒別2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些雜質(zhì)嗎？本實驗出提取的DNA可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。3.與其他同學(xué)提取的DNA進(jìn)行比較，看看實驗結(jié)果有何不同分析產(chǎn)生差異的原因。從多種方面比較實驗結(jié)果，如DNA的純度、DNA的顏色、二苯胺試劑顯色的深淺等，看看哪種實驗材料，哪種提取方法的效果更好。結(jié)果分析與評價DNA的粗提取與鑒別練習(xí)1.關(guān)于"DNA的粗提取與鑒定"實驗，下列相關(guān)敘述正確的是(

)A.實驗中用95%的酒精預(yù)冷后可以更好地溶解DNAB.鑒定DNA時，將粗提產(chǎn)物與二苯胺混合后進(jìn)行沸水浴C.將研磨液加入切碎的洋蔥，充分研磨后過濾，棄去上清液D.本實驗可用豬的成熟紅細(xì)胞置于清水中，待其漲破后釋放出DNAB2、下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，正確的是(

)A.取材時可選用雞血、洋蔥、香蕉等富含DNA的材料進(jìn)行實驗B.將白色絲狀物置于2mol/L的NaCl溶液中，離心后棄去上清液C.可將洋蔥置于清水中，細(xì)胞吸水破裂后將DNA釋放出來D.鑒定DNA時，應(yīng)將絲