動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)-小鼠、大鼠的實(shí)驗(yàn)操作

項(xiàng)目四動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)任務(wù)一大鼠、小鼠的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)（采血）

*認(rèn)識(shí)理解并善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)目標(biāo)任務(wù)描述知識(shí)平臺(tái)3任務(wù)描述

*

熟練掌握大鼠、小鼠采血操作，并培養(yǎng)團(tuán)隊(duì)合作意思。5

知識(shí)平臺(tái)9/28/2023

血樣可幫助科學(xué)研究人員和技術(shù)人員確定動(dòng)物的健康狀況、診斷疾病，并為研究人員提供非常重要的信息。無(wú)論使用何種方法從嚙齒類動(dòng)物身上采集血樣，都應(yīng)特別重視保持血樣的質(zhì)量。小鼠與大鼠的采血9/28/2023

1.最大抽血量

健康成年動(dòng)物的平均血液量通常約相當(dāng)于其體重的6-7%（g）。典型可承受最大抽血量（可以從一只動(dòng)物中安全抽取的血液總量）最高約相當(dāng)于一只動(dòng)物循環(huán)血量的10%。9/28/2023

品種單個(gè)樣品最大抽血量放血量小鼠0.2–0.3ml1.6-3.2ml1.0–1.5ml大鼠2.0–3.0ml20.0–40.0ml8.0–12.0ml大鼠和小鼠中常用抽血量、最大量及放血量9/28/2023

2.眼窩采血

眼窩抽血是將采血毛細(xì)管直接置于嚙齒類動(dòng)物眼窩的眼窩竇（或大鼠脈絡(luò)叢）中進(jìn)行抽血的過(guò)程。這種類型的抽血過(guò)程可能需要采用安樂(lè)死。9/28/2023

1.頸背部保定小鼠，并將毛細(xì)管插入眼內(nèi)眥（沿著動(dòng)物鼻子的45°角）2.當(dāng)血液鍵入采血管，輕輕扭轉(zhuǎn)采血管，使其向前進(jìn)入眼竇。9/28/2023

3.倒轉(zhuǎn)動(dòng)物，利用重力幫助加速血液流入采血容器中。4.移除采血管，合上眼瞼，輕輕壓一下眼睛，以確保止血。9/28/2023

3．尾靜脈采血

尾靜脈采血在小鼠和大鼠中均可進(jìn)行。側(cè)尾靜脈是快速有效采集量至中量動(dòng)物血液的一個(gè)很好部位。

保定小鼠，露出尾巴2.握住尾根部，以加速血流。3.酒精擦拭尾部

4.斜面朝上插入針頭至側(cè)尾靜脈

5.從針頭接口處收集血液6.移去針頭，并輕壓止血9/28/2023

眼窩抽血、尾靜脈抽血和心臟穿刺采血是比較費(fèi)力的，涉及到動(dòng)物保定、安樂(lè)死、采血管準(zhǔn)備、采血、基本血樣制備和儲(chǔ)存，需要盡量減輕動(dòng)物的疼痛和不適9/28/2023交流（1）由各組負(fù)責(zé)人示范小鼠大鼠的基本實(shí)驗(yàn)操作，教師講解重點(diǎn)難點(diǎn)和注意事項(xiàng)；（2）各組在教師和該責(zé)任人的指導(dǎo)下完成小鼠大的基本實(shí)驗(yàn)操作；（3）所有學(xué)生撰寫(xiě)自己的工作記錄；（4）考核小鼠的基本實(shí)驗(yàn)操作，再考核大鼠的基本實(shí)驗(yàn)操作；（5）該項(xiàng)目負(fù)責(zé)人撰寫(xiě)該實(shí)驗(yàn)的工作小結(jié)；（6）教師總結(jié)。

9/28/2023

思考與練習(xí)1.總結(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥的方法。2.列表比較小鼠灌胃、皮下注射、肌肉注射和腹腔注射的操作要點(diǎn)的異同。9/28/2023

3.某實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目研究的是某飼料添加劑對(duì)雌性大鼠的影響。實(shí)驗(yàn)方案如下：共50只大鼠，分成五組，每組十只，各組動(dòng)物用一個(gè)大籠盒飼養(yǎng)，共用5個(gè)大籠盒。第一組為對(duì)照組，第二、三、四、無(wú)組每日灌胃該飼料添加劑，濃度依次為1mg/kg、5mg/kg、30mg/kg、100mg/kg，連續(xù)灌胃30天，每日灌胃前對(duì)所有動(dòng)物稱重，并記錄。第31日去動(dòng)物小腸和血液檢測(cè)生理生化指標(biāo)。就在實(shí)驗(yàn)的第22天，由于飼養(yǎng)員疏忽，第三組的飲水瓶沒(méi)蓋緊，漏了一夜的水，致使第三組大鼠的體重和采食量明顯下降。第三組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性受到很大的影響。于是，實(shí)驗(yàn)人員決定重新實(shí)驗(yàn)，他們?nèi)绾胃倪M(jìn)實(shí)驗(yàn)的方式方法，才能避免類似情況發(fā)生。

項(xiàng)目四動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)任務(wù)一大鼠、小鼠的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)（麻醉）

*認(rèn)識(shí)理解并善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)目標(biāo)任務(wù)描述知識(shí)平臺(tái)21

學(xué)習(xí)目標(biāo)

*1.能進(jìn)行小鼠、大鼠的麻醉全身麻醉；2.加深對(duì)動(dòng)物3R和動(dòng)物福利的認(rèn)識(shí)，并在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中予以貫徹，人道對(duì)待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。

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知識(shí)平臺(tái)9/28/2023知識(shí)平臺(tái)小鼠與大鼠的全身麻醉常用麻醉劑麻醉方法9/28/2023

進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)有時(shí)需要麻醉，安全、有效的麻醉方法和技術(shù)，可高質(zhì)量地保障動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行，并體現(xiàn)動(dòng)物福利的宗旨。麻醉過(guò)淺或過(guò)深會(huì)使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遭受過(guò)多痛苦，影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，重者可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡。小鼠與大鼠的麻醉9/28/2023

1.常用的麻醉藥從物理性質(zhì)上可分為揮發(fā)性麻醉劑，如乙醚、氟烷、甲氧氟烷等；非揮發(fā)性麻醉劑，如巴比妥類、氯胺酮、水合氯醛、烏拉擔(dān)和一些新型的復(fù)合麻醉劑如速眠新、速麻安等。9/28/2023

（1）乙醚乙醚是最常用的揮發(fā)性麻醉藥物，各種動(dòng)物都可應(yīng)用。其麻醉量和致死量相差大,所以其安全度大。但由于乙醚局部刺激作用大,可刺激上呼吸道粘液分泌增加。9/28/2023

（2）氨基甲酸乙酯

此藥是比較溫和的麻醉藥，安全度大。多數(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物都可使用,更適合于小動(dòng)物。一般用作基礎(chǔ)麻醉，如使用全部過(guò)程都用此麻醉時(shí)，動(dòng)物保溫尤為重要。9/28/2023

（3）戊巴比妥鈉

此藥麻醉時(shí)間不很長(zhǎng),一次給藥的有效時(shí)間可延續(xù)3-5小時(shí),所以十分適合一般使用要求。給藥后對(duì)動(dòng)物循環(huán)和呼吸系統(tǒng)無(wú)顯著抑制作用，藥品價(jià)格也很便宜。9/28/2023

（4）硫噴妥鈉

為黃色粉末，有硫臭，易吸水。其水溶液不穩(wěn)定，故必須現(xiàn)用現(xiàn)配，常用濃度為1～5％。此藥作靜脈注射時(shí)，由于藥液迅速進(jìn)入腦組織，故誘導(dǎo)快，動(dòng)物很快被麻醉。9/28/2023

2.麻醉藥物的選擇（1）根據(jù)不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇麻醉藥物不同實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)同一麻醉藥物的敏感性存在差異。9/28/2023

（2）根據(jù)不同動(dòng)物實(shí)驗(yàn)選擇麻醉藥物（3）根據(jù)不同麻醉途徑選擇麻醉藥物9/28/2023

（4）復(fù)合麻醉的藥物選擇復(fù)合麻醉可以減少每種藥物的劑量和副作用，避免單純使用一種麻醉藥物時(shí)麻醉過(guò)深或長(zhǎng)時(shí)、大量使用對(duì)機(jī)體可能帶來(lái)的不利因素，在保護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的同時(shí)，更好地達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期目的。9/28/2023

3.常用全身麻醉方法（1）吸入麻醉法吸入法對(duì)多數(shù)動(dòng)物有良好的麻醉效果，其優(yōu)點(diǎn)是易于調(diào)節(jié)麻醉的深度和較快的終止麻醉，缺點(diǎn)是中、小型動(dòng)物較適用，對(duì)大型動(dòng)物如狗的吸入麻醉操作復(fù)雜，通常不用。9/28/2023

2）注射麻醉法大、小鼠和豚鼠常采用腹腔注射法進(jìn)行全身麻醉。狗、兔等動(dòng)物既可腹腔注射給藥，也可靜脈注射給藥。在麻醉興奮期出現(xiàn)時(shí)，動(dòng)物掙扎不安，為防止注射針滑脫，常用吸入麻醉法進(jìn)行誘導(dǎo)，待動(dòng)物安靜后再行腹腔或靜脈穿刺給藥麻醉。9/28/2023

（4）復(fù)合麻醉的藥物選擇復(fù)合麻醉可以減少每種藥物的劑量和副作用，避免單純使用一種麻醉藥物時(shí)麻醉過(guò)深或長(zhǎng)時(shí)、大量使用對(duì)機(jī)體可能帶來(lái)的不利因素，在保護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的同時(shí)，更好地達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期目的。9/28/2023

（4）復(fù)合麻醉的藥物選擇復(fù)合麻醉可以減少每種藥物的劑量和副作用，避免單純使用一種麻醉藥物時(shí)麻醉過(guò)深或長(zhǎng)時(shí)、大量使用對(duì)機(jī)體可能帶來(lái)的不利因素，在保護(hù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的同時(shí)，更好地達(dá)到實(shí)驗(yàn)預(yù)期目的。9/28/2023

4.麻醉深度要根據(jù)動(dòng)物體重、藥物濃度，仔細(xì)計(jì)算好所需的麻醉藥物劑量。9/28/2023

5.麻醉后的動(dòng)物監(jiān)護(hù)防止麻醉后的動(dòng)物因呼吸道阻塞而窒息死亡。在需要?jiǎng)游镩L(zhǎng)時(shí)間處于麻醉狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)中，追加麻醉藥物要嚴(yán)格控制劑量(一般不超過(guò)麻醉劑量的1/3).9/28/2023常用麻醉劑的用法及劑量

麻醉藥名適用動(dòng)物給藥途徑給藥劑量

（mg/kg）常配濃度（%）給藥量(ml/kg）維持時(shí)間乙醚各種動(dòng)物吸入———實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一直藥吸入麻藥，時(shí)間隨實(shí)驗(yàn)而掌握氯仿各種動(dòng)物吸入

同乙醚，毒性大戊巴比妥鈉狗、貓、兔豚鼠大、小鼠鳥(niǎo)類靜脈腹腔、皮下腹腔腹腔肌肉3040~5040~504550~100332221.01.4~1.72.0~2.52.32.5~5.02~4小時(shí).中途加1/5量,可多維持1小時(shí)以上氨基甲酸乙酯(烏拉坦)狗、貓兔豚鼠大、小鼠腹腔，靜脈直腸肌肉肌肉252520203~46.07.06.32~4小時(shí),安全,毒性小,主要適用于小動(dòng)物,有時(shí)可降低血壓硫噴妥鈉狗、貓兔、大鼠靜脈、腹腔靜脈、腹腔25~5050~100211.3~2.55.0~10.015~30分鐘,效力強(qiáng),宜慢性注異戊巴比妥鈉狗、貓兔鼠類靜脈腹腔、肌肉直腸、腹腔40~5080~100100100510101051010104~6小時(shí)

項(xiàng)目四常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本操作任務(wù)1小鼠、大鼠的實(shí)驗(yàn)操作

*任務(wù)描述知識(shí)平臺(tái)任務(wù)實(shí)施學(xué)習(xí)目標(biāo)43學(xué)習(xí)目的9/28/2023學(xué)習(xí)目的：1.了解手術(shù)縫合常見(jiàn)方法；2.熟練掌握連續(xù)縫合技術(shù)、結(jié)節(jié)縫合技術(shù)；

45任務(wù)描述9/28/2023

通過(guò)本任務(wù)的學(xué)習(xí)，能夠了解手術(shù)縫合常見(jiàn)方法；熟練掌握連續(xù)縫合技術(shù)、結(jié)節(jié)縫合技術(shù)；獨(dú)立完成小鼠、大鼠皮膚和肌肉的縫合。9/28/2023

常見(jiàn)縫合方法：結(jié)節(jié)縫合連續(xù)縫合結(jié)節(jié)縫合三棱針皮膚表面9/28/2023連續(xù)縫合肌肉或內(nèi)臟圓形針9/28/20239/28/2023任務(wù)實(shí)施

?9/28/2023?分組練習(xí)，完成老師要求的考核

1.各學(xué)習(xí)小組制定工作計(jì)劃、分配工作任務(wù)，確定小鼠抓取保定和性別判定操作的主要負(fù)責(zé)人；2.各學(xué)習(xí)小組