微生物限度檢查微生物總數檢查

微生物總數檢驗提要一、試驗前準備二、操作過程三、成果判斷四、有關要求1.取樣

一、試驗前準備取樣量檢驗量3-5倍的檢驗量10g或10ml或100cm2；2個以上獨立包裝2.無菌室的清潔與消毒

消毒劑：0.2%苯扎溴銨、75%乙醇等消毒流程：自上而下、先里后外；開啟紫外燈與空氣過濾裝置30分鐘以上3.試驗物品的準備

（1）設備（2）器材（3）培養(yǎng)基（4）稀釋液微生物總數檢驗采用的措施：涉及微生物計數法，涉及平皿法、薄膜過濾法和最可能數法，操作過程涉及：●計數培養(yǎng)基合用性檢驗●計數措施合用性試驗●供試品的檢驗二、操作過程1.計數培養(yǎng)基合用性檢驗金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基30-35℃18-24h沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基20-25℃2-3d沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20-25℃5-7d新鮮培養(yǎng)物胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基分別接種上述不不小于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管和無菌平皿中，平皿中立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，置30～35℃培養(yǎng)不超出3天，每株試驗菌平行制備2管或2個平皿；分別接種不不小于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉注入無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，分別置30～35℃與20～25℃培養(yǎng)不超出5天，每株試驗菌、每種培養(yǎng)基均平行制備2個平皿。同步，用相應的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進行上述試驗。

被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數與對照培養(yǎng)基上的菌落平均數的比值應在0.5～2范圍內，且菌落形態(tài)大小應與對照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對照培養(yǎng)基管比較，試驗菌應生長良好。2.計數措施合用性試驗檢驗目的：確認所采用措施適合產品微生物計數（產品的抑菌性）●合用范圍：新產品或生產工藝變更的舊產品●檢驗措施：微生物回收試驗法●檢驗操作涉及：供試液的制備、陽性對照菌液制備、回收試驗。3.供試品檢驗（1）平皿法平皿法涉及傾注法和涂布法。除另有要求外，取要求量供試品，按措施合用性試驗確認的措施進行供試液制備和菌數測定，每稀釋級每種培養(yǎng)基至少制備2個平板。培養(yǎng)和計數：除另有要求外，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5天，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～7天，觀察菌落生長情況，點計平板上生長的全部菌落數，計數并報告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計數。點計菌落數后，計算各稀釋級供試液的平均菌落數，按菌數報告規(guī)則報告菌數。若同稀釋級兩個平板的菌落數平均值不不不小于15，則兩個平板的菌落數不能相差1倍或以上。菌數報告規(guī)則：需氧菌總數測定宜選用平均菌落數不不小于300cfu的稀釋級、霉菌和酵母菌總數測定宜選用平均菌落數不不小于100cfu的稀釋級，作為菌數報告的根據。取最髙的平均菌落數，計算lg、lml或10cm2供試品中所含的微生物數，取4位有效數字報告。如各稀釋級的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級的平板有菌落生長，但平均菌落數不不小于1時，以＜1乘以最低稀釋倍數的值報告菌數。（2）薄膜過濾法除另有要求外，按計數措施合用性試驗確認的措施進行供試液制備。取相當于lg、lml或10cm2供試品的供試液，若供試品所含的菌數較多時，可取合適稀釋級的供試液，照措施合用性試驗確認的措施加至適量稀釋液中，立即過濾，沖洗，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)和計數：培養(yǎng)條件和計數措施同平皿法，每張濾膜上的菌落數應不超出100cfu。

菌數報告規(guī)則：以相當于lg、lml或10cm2供試品的菌落數報告菌數；若濾膜上無菌落生長，以＜1報告菌數（每張濾膜過濾lg、lml或10cm2供試品），或＜1乘以最低稀釋倍數的值報告菌數。（3）MPN法取要求量供試品，按措施合用性試驗確認的措施進行供試液制備和供試品接種，全部試驗管在30～35℃培養(yǎng)3～5天，假如需要確認是否有微生物生長，按措施合用性試驗確認的措施進行。統計每一稀釋級微生物生長的管數，從“微生物最可能數檢索表”查每1g或每1ml供試品中需氧菌總數的最可能數。三、成果判斷各品種項下要求的需氧菌總數、霉菌和酵母菌總數原則的解釋如下：101cfu：可接受的最大菌數為20；102cfu：可接受的最大菌數為200；103cfu：可接受的最大菌數為2023，依此類推。若供試品的需氧菌總數、霉菌和酵母菌總數的檢査成果均符合該品種項下的要求，判供試品符合要求；若其中任何一項不符合該品種項下的要求，判供試品不符合要求。四、有關要求1．藥物在檢驗前，應置陰涼干燥處保存，不得開啟原包裝，預防微生物污染，影響檢驗成果。2．供試品檢驗全過程必須符合無菌技術要求，使用滅菌用具時，不能接觸可能污染