高效液相色譜法測定酮康唑乳膏中酮康唑的含量

高效液相色譜法測定酮康唑乳膏中酮康唑的含量

酮康唑乳膏是一種乳腺癌藥物。這種有效的異丙酮醇是一種抗真菌藥物。它被用于治療體虱、銀屑病、濕疹和神經(jīng)皮炎。中國藥典(1)采用萃取-紫外分光光度法進(jìn)行含量測定,由于該法操作繁瑣,影響因素多,專屬性不強(qiáng),因而有一些采用HPLC法測定酮康唑乳膏含量的報道。筆者對這些方法進(jìn)行了初步篩選,發(fā)現(xiàn)其耐用性均不理想,對色譜柱選擇性較高,而采用本文建立的高效液相色譜方法測定酮康唑乳膏中酮康唑的含量,耐用性良好并且快速、簡便、準(zhǔn)確。為中國藥典(1)酮康唑乳膏含量測定方法的改進(jìn)提供了一定的參考依據(jù)。一、儀器和試劑盒1.儀器島津LC-10AT-SPD10A色譜系統(tǒng)2.試劑及其儀器酮康唑標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所);四丁基硫酸氫銨:色譜純中國醫(yī)藥(集團(tuán))上?；瘜W(xué)試劑公司;無水乙醇:分析純北京化工廠;乙腈:色譜純Merck;水為去離子水。酮康唑乳膏(批號:20030701;20030702;20030703;規(guī)格:10g∶0.2g)及空白輔料:北京清華紫光制藥廠。二、試驗方法和結(jié)果1.對照品溶液的制備分析柱為ThermoC18(5μm,150×4.6mm),流動相為0.34%四丁基硫酸氫銨溶液-乙腈(75∶25),流速0.9ml/min,檢測波長223nm。進(jìn)樣分析對照品溶液,記錄色譜圖(見圖1)。酮康唑色譜峰的保留時間為7.699min,理論塔板數(shù)以酮康唑峰計算為8419。2.空白輔料含量測定取酮康唑乳膏樣品(批號20030701)與空白輔料樣品,按照樣品處理方法配制樣品溶液與空白基質(zhì)溶液,精密量取10μl注入液相色譜儀。色譜圖見圖1。結(jié)果表明輔料不干擾測定。3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取酮康唑?qū)φ掌芳s40mg至100mL容量瓶中,用無水乙醇溶解并稀釋成0.4mg/mL的對照儲備液,精密量取2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0mL分別置50mL量瓶中,用無水乙醇定容。精密量取10μL注入液相色譜儀,得到濃度C(μg/mL)與峰面積A的線性方程。結(jié)果表明,酮康唑在18μg/mL～72μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為:C=-0.5003+2.167A×10-5,r=0.99994.標(biāo)準(zhǔn)曲線與定量限取酮康唑?qū)φ掌愤m量,配制成濃度為0.4mg/mL的溶液,逐步稀釋后,精密量取10μl注入液相色譜儀,測得定量限為40ng/mL(S/N=10)。5.加標(biāo)回收率試驗根據(jù)處方比例精確配制含酮康唑為標(biāo)示量80%、100%、120%的模擬樣品9份,按樣品測定項下方法操作,得平均回收率,結(jié)果為100.3%(n=9),RSD=1.62%。6.精密度6.1進(jìn)樣檢測取樣品(批號20030701),依樣品處理方法制得供試品溶液,精密量取10μL,重復(fù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,平均值為2033,RSD為0.16%(n=6)。另在第1、2、3d各進(jìn)樣1次,記錄峰面積,RSD為1.56%(n=3)。6.2a色譜系統(tǒng)配置用樣品含量(批號為20030701)測定值的RSD表示。結(jié)果為:采用島津LC-10AT-SPD10A色譜系統(tǒng)配ThermoC18(5μm,150×4.6mm)色譜柱測定,酮康唑的含量為101.5%,RSD為1.37%(n=6);用Agillent1100色譜系統(tǒng)配SHISEIDOC18(5μm,250×4.6mm)色譜柱測定,酮康唑的含量為102.0%,RSD為1.48%(n=6)。7.hplc測定取3個批號的樣品,精密稱取適量(約相當(dāng)于酮康唑40mg)置100mL量瓶中,加入無水乙醇約60mL,置80℃水浴中加熱數(shù)分鐘,振搖,使酮康唑溶解,放冷至室溫,無水乙醇定容至刻度,搖勻,置冰浴2h以上,取出后迅速濾過,放至室溫,精密量取續(xù)濾液5mL至50mL量瓶中,加無水乙醇稀釋至刻度,精密量取10μl注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按外標(biāo)法以峰面積計算,3批樣品中的含量見表1。8.siseidocd8m,20m采用了5個品牌的色譜柱進(jìn)行試驗,分別為:ThermoC18(5μm,150×4.6mm);SHISEIDOC18(5μm,250×4.6mm);PhenomenexC18(4μm,150×4.6mm);InertsilC18(5μm,150×4.6mm);AlltechC18(5μm,150×4.6mm),結(jié)果峰形良好,理論塔板數(shù)均在5000以上。三、討論1.樣品處理本文參考了相關(guān)文獻(xiàn)(2,3,5)采用了無水乙醇80℃水浴溶解,然后冰浴2h過濾能有效的去除乳膏基質(zhì),減少基質(zhì)對色譜柱的損害和影響。2.流動相組成的色譜柱筆者初期用4個品牌的色譜柱篩選了4種流動相組成:分別為甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鉀(pH7.40)(75∶25)(3)、甲醇-水(74∶26)(4)、甲醇-0.02mol/L磷酸氫二鈉(70∶30,含0.2%三乙胺,稀磷酸調(diào)節(jié)pH至6.9±0.1)(5)、80%甲醇(含0.05%三乙胺)(6),耐用性均不太理想,以第一種流動相組成為例,在4個品牌的色譜柱中,僅在InertsilC18(5μm,150×4.6mm)條件下,峰形較好,達(dá)到檢測要求,其他色譜柱條件下出現(xiàn)了前延峰與肩峰,無法正常檢測。后參考美國藥典(7)酮康唑口服混懸劑項下的含量測定用色譜條件,取得滿意的試驗結(jié)果,耐用性良好