一測(cè)多評(píng)法在中藥化學(xué)成分含量測(cè)定中的應(yīng)用

一測(cè)多評(píng)法在中藥化學(xué)成分含量測(cè)定中的應(yīng)用

中藥及其制劑包含許多組件，具有化學(xué)成分多樣性和復(fù)雜性的特點(diǎn)。這也是中醫(yī)具有各種功能和多種藥理基礎(chǔ)的基本原因。因此，在研究中藥及其制劑的有效性和安全性時(shí)，我們不僅要選擇單一成分的含量測(cè)定來(lái)表達(dá)中藥的質(zhì)量，還要選擇不同成分的含量測(cè)定來(lái)對(duì)影響的化學(xué)指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。近年來(lái),各種新的分析技術(shù)和方法在中藥質(zhì)量控制中不斷出現(xiàn),王智民等提出了一測(cè)多評(píng)法(quantitativeanalysisofmulti-componentsbysinglemarker,QAMS),即利用中藥有效成分內(nèi)在的函數(shù)關(guān)系和比例關(guān)系,只測(cè)定一個(gè)成分(對(duì)照品易得者),來(lái)實(shí)現(xiàn)多個(gè)成分(對(duì)照品難以得到或難供應(yīng))的同步測(cè)定。中國(guó)藥典2010年版中,已經(jīng)收錄利用該方法測(cè)定黃連小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿、藥根堿等成分的含量。本文主要探討目前一測(cè)多評(píng)法在中藥化學(xué)成分含量測(cè)定中的應(yīng)用進(jìn)展,為進(jìn)一步推廣一測(cè)多評(píng)法在中藥質(zhì)量控制模式中的應(yīng)用提供數(shù)據(jù)參考。1類多成分同時(shí)測(cè)定時(shí)樣品、分析方法及結(jié)果一測(cè)多評(píng)法是通過(guò)只測(cè)定某個(gè)代表性成分,來(lái)計(jì)算出其他待測(cè)有效成分的含量,使其計(jì)算值與實(shí)測(cè)值符合定量方法學(xué)的要求。主要適用于對(duì)照品難得或制備成本高或不穩(wěn)定的情況下同類多成分同時(shí)測(cè)定。因此在使用該方法時(shí),首先應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)指標(biāo),收集研究樣品,并制備對(duì)照品溶液,進(jìn)行HPLC分析條件的確定。參照藥典附錄ⅩⅧA要求完成多成分同時(shí)測(cè)定的方法學(xué)考察,并利用對(duì)照品溶液和確定的分析條件,建立內(nèi)參物與待測(cè)成分之間的相對(duì)校正因子(RCF),同時(shí)進(jìn)行待測(cè)成分的色譜峰定位。然后按常規(guī)方法測(cè)定待測(cè)成分的含量,同時(shí)利用RCF計(jì)算待測(cè)成分的含量,并將實(shí)測(cè)值與計(jì)算值進(jìn)行分析比較,以驗(yàn)證QAMS的合理性和可行性。2中藥中n類、類、苯丙素類等3種分類含量測(cè)定,能夠檢測(cè)香豆素、及其他類目前,一測(cè)多評(píng)法已在中藥多種化學(xué)成分的含量測(cè)定中得到廣泛應(yīng)用,如中藥苷類、醌類中的蒽醌類和菲醌類、苯丙素中的香豆素類和木脂素類、黃酮類、揮發(fā)油類、三萜類、生物堿類、鞣質(zhì)類等成分的含量測(cè)定。2.1朝激勵(lì)因子確定李發(fā)美等以淫羊藿藥材為研究對(duì)象,以藥材中4種主要成分為指標(biāo)成分,分別建立了淫羊藿苷與朝藿定A、B、C的相對(duì)校正因子,計(jì)算朝藿定A、B、C的含量(計(jì)算值),實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng);同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定藥材中4種指標(biāo)成分的含量(實(shí)測(cè)值),并比較計(jì)算值與實(shí)測(cè)值的差異,結(jié)果顯示一測(cè)多評(píng)法和外標(biāo)法所得的含量結(jié)果無(wú)顯著性差異。2.2大黃素甲醚與參與物的相對(duì)校正因子孟繁穎等以復(fù)方黃白膠囊為研究對(duì)象,以大黃酚為內(nèi)參物,計(jì)算大黃酸、大黃素和大黃素甲醚與大黃酚的相對(duì)校正因子;分別采用一測(cè)多評(píng)法和外標(biāo)法測(cè)定復(fù)方黃白膠囊中4種大黃蒽醌類成分的含量,結(jié)果表明相對(duì)校正因子的重現(xiàn)性良好,且采用校正因子計(jì)算的含量值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值之間無(wú)顯著性差異。王鈺瑩等以三黃片為研究對(duì)象,建立了大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚與內(nèi)參物大黃素之間的相對(duì)校正因子,分別采用外標(biāo)法和一測(cè)多評(píng)法測(cè)定三黃片中4種蒽醌類成分的含量,并將一測(cè)多評(píng)法的計(jì)算值與外標(biāo)法的實(shí)測(cè)值用相對(duì)誤差進(jìn)行評(píng)價(jià),結(jié)果表明兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,實(shí)驗(yàn)所得的相對(duì)校正因子可信,表明該法具有合理性、可行性和可重復(fù)性。范玲等以虎杖為研究對(duì)象,選取大黃素為內(nèi)標(biāo)物,分別建立了大黃素與虎杖苷、白藜蘆醇和大黃素甲醚的相對(duì)校正因子,并用該校正因子進(jìn)行虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素甲醚的含量計(jì)算,實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng),同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定飲片中大黃素、虎杖苷、白藜蘆醇和大黃素甲醚的含量,比較計(jì)算值與實(shí)測(cè)值的差異,結(jié)果表明11批虎杖飲片中3種成分含量的計(jì)算值與實(shí)測(cè)值的RSD<3%,表明兩者無(wú)顯著性差異。李倩等以丹參藥材為研究對(duì)象,藥材中4個(gè)有效成分為指標(biāo)成分,分別建立丹參酮ⅡA與二氫丹參酮Ⅰ、隱丹參酮,丹參酮Ⅰ的相對(duì)校正因子,計(jì)算二氫丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ的含量,同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定藥材中4個(gè)指標(biāo)性成分的含量,比較計(jì)算值與實(shí)測(cè)值的差異,結(jié)果顯示16批丹參中4個(gè)指標(biāo)成分含量的計(jì)算值與實(shí)測(cè)值之間無(wú)顯著性差異。2.3藥物中香豆素含量測(cè)定結(jié)果楊芳等采用一測(cè)多評(píng)法測(cè)定川白芷藥材中3種香豆素成分的含量,實(shí)驗(yàn)以歐前胡素對(duì)照品為內(nèi)參物,在線性范圍內(nèi)采用HPLC-DAD建立其與異歐前胡素、氧化前胡素的相對(duì)校正因子,并用該校正因子進(jìn)行異歐前胡素、氧化前胡素的含量計(jì)算實(shí)現(xiàn)“一測(cè)多評(píng)”,同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定藥材中這3種香豆素的含量,并比較計(jì)算值與實(shí)測(cè)值的差異,結(jié)果顯示20批藥材中3種香豆素含量的計(jì)算值與實(shí)測(cè)值無(wú)顯著性差異(RSD<5%)。丁黎艷等以補(bǔ)骨脂藥材為研究對(duì)象,選取補(bǔ)骨脂素為指標(biāo),確定該成分與其他藥效成分——異補(bǔ)骨脂素、補(bǔ)骨脂甲素(補(bǔ)骨脂二氫黃酮)、補(bǔ)骨脂乙素(異補(bǔ)骨脂査兒酮)間的校正因子,考察一測(cè)多評(píng)法和外標(biāo)法測(cè)得結(jié)果的差異性,并研究了不同儀器及色譜柱對(duì)相對(duì)校正因子的影響,結(jié)果表明一測(cè)多評(píng)法和外標(biāo)法測(cè)得的數(shù)據(jù)RSD均<3%,且不同儀器及色譜柱所得相對(duì)校正因子無(wú)顯著性差異。賀鳳成等建立了五味子中4個(gè)木脂素類化合物一測(cè)多評(píng)方法學(xué)考察模式,實(shí)驗(yàn)以五味子醇甲為內(nèi)參物,建立五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素與五味子醇甲的相對(duì)校正因子,并進(jìn)行含量計(jì)算,同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定13批五味子藥材中4個(gè)成分的含量。結(jié)果表明建立的校正因子重現(xiàn)性良好,同時(shí)采用校正因子計(jì)算的含量值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值之間無(wú)顯著性差異,表明該方法準(zhǔn)確可行。2.4不同類型的著性差異楊菲等以銀黃制劑為研究對(duì)象,建立漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素與黃芩苷間的相對(duì)校正因子,分別采用外標(biāo)法和一測(cè)多評(píng)法測(cè)定銀黃制劑中4種黃酮類成分的含量,并將一測(cè)多評(píng)法的計(jì)算值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值用相對(duì)誤差進(jìn)行比較,結(jié)果表明一測(cè)多評(píng)法的計(jì)算結(jié)果與外標(biāo)法的實(shí)測(cè)值之間沒(méi)有顯著性差異。徐娜等以芹菜籽原料藥中主要成分芹菜甲素、芹菜乙素和新蛇床內(nèi)酯為指標(biāo),在一定范圍內(nèi),建立芹菜甲素與芹菜乙素、新蛇床內(nèi)酯的校正因子,用該校正因子測(cè)定芹菜乙素和新蛇床內(nèi)酯的含量,同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定6批不同批次中3個(gè)成分的含量,結(jié)果顯示建立的校正因子重現(xiàn)性良好,原料藥中采用校正因子計(jì)算的值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值間沒(méi)有顯著性差異。另有張坤等建立以木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷為對(duì)照品的校正因子方法,測(cè)定苦碟子提取物中咖啡酸、菊苣酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷-(1→6)-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷與木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷5種主要成分的含量,同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定苦碟子提取物中5種成分含量,并將校正因子法與外標(biāo)法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較,經(jīng)t檢驗(yàn),P>0.05,表明這2種方法的測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著性差異。2.5與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的比較付瀅舟等采用一測(cè)多評(píng)法測(cè)定速效救心丸中冰片的含量,實(shí)驗(yàn)以正十四烷為內(nèi)標(biāo)物,以右旋龍腦為參照物建立其與異龍腦、左旋龍腦的相對(duì)校正因子進(jìn)行含量測(cè)定,同時(shí)與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較,結(jié)果表明采用一測(cè)多評(píng)法的測(cè)定結(jié)果與現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定結(jié)果基本一致。2.6相對(duì)校正因子的測(cè)定宋永貴等采用一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定預(yù)知子中4種三萜皂苷成分,以常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷PD)為內(nèi)標(biāo)物考察在不同色譜柱、流動(dòng)相系統(tǒng)、HPLC儀器條件下,皂苷PD與常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃葡萄糖基(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷X)、常春藤皂苷元3-O-β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷B)、常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(皂苷A)之間的相對(duì)校正因子,并利用該校正因子計(jì)算皂苷X、皂苷B和皂苷A的含量。采用外標(biāo)法同時(shí)測(cè)定藥材中該4種成分的量,將測(cè)定值與計(jì)算值進(jìn)行多種統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn),結(jié)果表明,在不同的條件下相對(duì)校正因子重現(xiàn)性良好,10批預(yù)知子中皂苷X、皂苷B及皂苷A的計(jì)算值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值相比沒(méi)有顯著性差異。張勇等建立一測(cè)多評(píng)法同時(shí)測(cè)定木瓜中齊墩果酸和熊果酸2種三萜酸成分。實(shí)驗(yàn)以齊墩果酸為內(nèi)參物,考察了HPLC和UPLC2種色譜體系,建立相對(duì)校正因子計(jì)算熊果酸的量,并與外標(biāo)法進(jìn)行比較,結(jié)果表明,在不同的色譜分析體系中,熊果酸相對(duì)校正因子及保留時(shí)間的重現(xiàn)性良好,且計(jì)算值與實(shí)測(cè)值偏差范圍較小。2.7外標(biāo)法測(cè)樣品中的化合物測(cè)定劉永利等以咳喘寧片為研究對(duì)象,以嗎啡為對(duì)照,建立嗎啡與磷酸可待因、鹽酸罌粟堿、鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的校正因子,并利用校正因子計(jì)算磷酸可待因、鹽酸罌粟堿、鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量,同時(shí)利用外標(biāo)法測(cè)定這4種成分的含量,結(jié)果顯示采用校正因子計(jì)算的含量值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值之間沒(méi)有明顯差異,表明該法的準(zhǔn)確性和科學(xué)性。陳曉斌等以熱痹消顆粒為研究對(duì)象,建立小檗堿與黃柏堿、藥根堿、巴馬汀的相對(duì)校正因子,并將該因子用于這4種生物堿的含量測(cè)定,同時(shí)采用外標(biāo)法測(cè)定4種生物堿的含量。結(jié)果表明一測(cè)多評(píng)法對(duì)不同的色譜柱和儀器的計(jì)算值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值之間沒(méi)有明顯差異。2.8相對(duì)校正因子的計(jì)算林永強(qiáng)等采用一測(cè)多評(píng)法同步測(cè)定銀黃片中6種咖啡?？鼘幩?實(shí)驗(yàn)以綠原酸(5-O-咖啡酰奎寧酸)為指標(biāo),建立該成分與3-O-咖啡?？鼘幩帷?-O-咖啡?？鼘幩?、4,5-O-二咖啡酰奎寧酸、3,5-O-二咖啡?？鼘幩帷?,4-O-二咖啡?？鼘幩岬南鄬?duì)校正因子,用相對(duì)校正因子計(jì)算各成分的量,同時(shí)對(duì)13批銀黃片一測(cè)多評(píng)的計(jì)算結(jié)果與外標(biāo)實(shí)測(cè)值進(jìn)行比較,并考察了不同品牌儀器和不同廠家色譜柱進(jìn)行考察。方法準(zhǔn)確性評(píng)價(jià)結(jié)果表明利用一測(cè)多評(píng)法在不同色譜柱的計(jì)算值與外標(biāo)實(shí)測(cè)值之間沒(méi)有顯著性差異。3樣點(diǎn)測(cè)定結(jié)果目前一測(cè)多評(píng)法中校正因子的計(jì)算,文獻(xiàn)[11，21]普遍采用多點(diǎn)校正后求平均值的方法。但如果其中2個(gè)點(diǎn)前后偏差較大時(shí),便直接影響整個(gè)平均值,導(dǎo)致計(jì)算值出現(xiàn)一定的偏差。另外,色譜峰的準(zhǔn)確定位是一測(cè)多評(píng)法技術(shù)的應(yīng)用前提,一般采用保留時(shí)間差或相對(duì)保留值等參數(shù)結(jié)合色譜圖整體特征,以及每個(gè)峰的紫外吸收特征來(lái)定位其余待測(cè)成分的色譜峰。但由于不同實(shí)驗(yàn)儀器及色譜柱的差異較大,保留時(shí)間出現(xiàn)漂移,導(dǎo)致有些結(jié)果可能出現(xiàn)較大偏差。何兵等以雙黃連口服液為研究對(duì)象,采用3種校正方法(多點(diǎn)校正、斜率校正、定量因子校正)建立雙黃連口服液中綠原酸與11個(gè)活性成分(新綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、連翹酯苷A、野黃芩苷、異綠原酸B、異綠原酸A、異綠原酸C、黃芩苷、連翹苷及漢黃芩苷)之間的相對(duì)校正因子,同時(shí)采用線性回歸法定位色譜峰,實(shí)現(xiàn)只用一個(gè)對(duì)照品測(cè)定雙黃連口服液中12個(gè)成分的含量。結(jié)果表明在一定線性范圍內(nèi),以3種校正方式所得校正因子計(jì)算結(jié)果與外標(biāo)法或線性回歸法并無(wú)顯著性差異,且該法更簡(jiǎn)便快捷、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、具有良好的重現(xiàn)性,而線性回歸法定位色譜峰比文獻(xiàn)采用相對(duì)保留時(shí)間更準(zhǔn)確?？梢?jiàn)采用標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率之比計(jì)算校正因子,即使有幾個(gè)點(diǎn)存在較大偏差,其對(duì)整個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率影響不大,相對(duì)多點(diǎn)校正更科學(xué)合理。而且斜率校正無(wú)需逐個(gè)濃度計(jì)算校正因子求平均值,直接以標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率計(jì)算,相對(duì)更快捷。此外,通過(guò)線性回歸法推導(dǎo)出相應(yīng)的校正方程,并用該方程快速推測(cè)各成分理論出峰時(shí)間,若該色譜峰臨近還有其他色譜峰,再根據(jù)紫外吸收光譜、整體峰形或峰面積比,即能在一定程度上準(zhǔn)確定位色譜峰。4測(cè)多評(píng)法的原則中藥化學(xué)成分的研究是一項(xiàng)復(fù)雜龐大的工程,涉及眾多學(xué)科的交叉結(jié)合。一測(cè)多評(píng)法的提出,解決了部分因?qū)φ掌穬r(jià)格昂貴或難供應(yīng)成分指標(biāo)檢測(cè)的難題,實(shí)現(xiàn)了多指標(biāo)成分同時(shí)檢測(cè),也為中藥質(zhì)量新的評(píng)價(jià)模式提供了更好的分