中藥配伍對黃連抑菌作用的影響

中藥配伍對黃連抑菌作用的影響

黃連是一種常見的中藥，具有清熱除濕、清火解毒的功效。據(jù)現(xiàn)代藥理研究表明,黃連具有抗微生物多種生理活性,小檗堿為其主要有效成分之一。體外實驗證明:黃連和小檗堿的抗菌作用基本一致。為了進一步探討中藥配伍與療效的關(guān)系,筆者研究黃連與甘草等中藥配伍的抗微生物作用,用以分析中藥配伍對黃連抑菌作用的影響。1實驗菌株、培養(yǎng)基①53W紫外可見分光光度計(上海光學(xué)儀器廠);②凈化工作臺(蘇州凈化設(shè)備廠)、培養(yǎng)皿(Φ90mm)、游標(biāo)卡尺;③實驗菌株:金黃色葡萄球菌、志賀氏痢疾桿菌(湖北中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科提供);④培養(yǎng)基:普通肉湯培養(yǎng)基(按中國藥典配制)、肉湯瓊脂培養(yǎng)基(杭州微生物試劑廠);⑤磷酸緩沖液:按中國藥典配制,PH=7.4;⑥鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品(購自中國藥品生物制品檢定所)。本實驗所用藥材均購自武昌區(qū)藥材公司,經(jīng)湖北中醫(yī)學(xué)院鑒定教研室鑒定均為中國藥典規(guī)定之正品,所用試劑均為分析純。2中藥湯劑中小堿的含量測定(1)樣品制備標(biāo)準(zhǔn)溶液配制精密稱取(105℃恒重)鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品1.6mg,置100ml容量瓶中,加水溶解,定溶至刻度,濃度為16ug/ml,搖勻備用。壓力稱取黃連100g,加水煎煮2次,第1次30min,第2次20min,濾過,合并濾液,冷后加水稀釋至200ml;雙層濾紙濾過,精密量取濾液1ml,置50ml容量瓶中,加水至刻度,搖勻即得。黃連和甘草的聯(lián)合劑稱取黃連與甘草各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。3黃連和大黃的制備配方稱取黃連與大黃各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。黃連和蜂蜜湯劑稱取黃連與金銀花各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。黃連和黃鼠尾的制備配方稱取黃連與黃芩各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。黃連和梔子湯劑稱取黃連與梔子各100g,加水煎煮,操作同黃連煎劑。(2)溴烷香草酚藍溶液精密量取配制的標(biāo)準(zhǔn)品溶液1、2、3、4、5ml,分別置60ml分液漏斗中,加水至5ml,加入磷酸緩沖液5ml,0.1%溴麝香草酚藍溶液1ml,精密加入氯仿10ml,振搖,放置使分層,分取氯仿層置離心管中離心;另取5ml水以同樣操作做空白對照。置53W紫外分光光度計于波長420nm處進行測定,根據(jù)測定結(jié)果求得回歸方程為:A=0.00365+0.06725C,r=0.9996(n=5),線性范圍16~80ug。(3)損失率的測定精密吸取樣品溶液1ml,按標(biāo)準(zhǔn)曲線項操作,測定個樣品中黃連總生物堿的含量(以鹽酸小檗堿計算),并求算出損失率。結(jié)果見表1、表2。3黃連、黃連、甘草等合用中藥抗菌作用(1)試驗溶液的制備黃連試液精密量取上述制備的黃連煎劑1ml,置10ml容量瓶中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。黃連和甘草試驗溶液精密量取上述制備的黃連與甘草煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。試驗溶液為黃連和大黃精密量取上述制備的黃連與大黃煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。黃連和蜂蜜試液精密量取上述制備的黃連與金銀花煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。黃連和黃鼠尾試驗溶液精密量取上述制備的黃連與黃芩煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。黃連和梔子測試溶液精密量取上述制備的黃連與梔子煎劑1ml,置10ml容量中,加磷酸緩沖液至刻度,搖勻即得。(2)菌懸液的制備取檢驗菌(金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌),接種于普通肉湯瓊脂斜面,37℃培養(yǎng)18h,用10ml肉湯培養(yǎng)基洗下菌苔,稀釋成0.1倍的均勻懸液備用。(3)膜加菌抑菌圈為度按《中國藥典》95版二部附錄方法制備雙碟,菌層加菌是以獲得清晰的抑菌圈為度。在不銹鋼管中加上述供試液10ml后,37℃培養(yǎng)16~18h,測定抑菌圈直徑,統(tǒng)計結(jié)果見表1、表2。4不同配伍藥物的配伍對抑菌作用影響黃連為常用中藥,大量出現(xiàn)在中藥復(fù)方中,也常與其它藥物組成配伍藥對。近年來,對黃連與甘草等中藥配伍后的沉淀反應(yīng)研究較多,但大多是從定性方面進行研究,本研究對其進一步的定量研究表明,黃連與甘草等不同中藥配伍因發(fā)生沉淀反應(yīng),其有效成分小檗堿的損失是不同的;并進一步對其配伍藥效學(xué)研究表明,黃連與甘草等不同中藥配伍,其抗微生物作用變化與小檗堿的損失具有一定的相關(guān)性,但也存在一定的差異。對金黃色葡萄球菌作用表明:黃連與甘草、梔子配伍后,因小檗堿的損失,抑菌作用降低較多;黃連與金銀花、黃芩配伍,雖小檗堿損失分別達51.85%和61.20%,但其抑菌作用降低反而較與甘草、梔子配伍時少;而與大黃配伍時僅略有降低。對痢疾桿菌作用表明:黃連與甘草、梔子配伍后,抑菌作用降低較大;與金銀花、大黃配伍時,抑菌作用降低較前兩者低;與黃芩配伍時抑菌作用降低不大。分析以上作用的原因:其一,因配伍后,小檗堿沉淀損失致使各種配伍藥對抑菌效應(yīng)均有不同程度降低。其二,在配伍藥物中,因甘草、梔子對金黃色葡萄球菌和痢疾桿菌均無作用,致使因小檗堿的損失,兩者與黃連配伍后,對兩種細菌的抑菌作用均降低較多;因金銀花、大黃、黃芩對金黃色葡萄球菌和痢疾桿菌均有一定的作用,彌補了因小檗堿的損失而出現(xiàn)的抑菌作用的下降,其中因黃芩對痢疾桿菌作用強于對金黃色葡萄球菌的作用,雖配伍后小檗堿的損失達61.20%,而抑菌作用降低不多;大黃因?qū)α〖矖U菌作用弱于金黃色葡萄球菌,致使配伍后對痢疾桿菌的作用降低較大。分析結(jié)果表明:黃連與甘草等配伍后,小檗堿的損失與抑菌作用的減弱