復(fù)方丹參注射液的研制

復(fù)方丹參注射液的研制

根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究，丹參具有抑制血小板聚集、抗凝、減輕心肌缺血、重新注入病變、抗炎、提高身體免疫、減少動(dòng)脈硬化和降血脂的作用。然而，藥物a能改善微循環(huán)、血液流變性、抗炎、抗炎、抗鉻等藥物的作用。大量臨床試驗(yàn)證實(shí)，丹參與藥物a劑合用能有效治療缺血性腦梗死、心臟病、心絞痛等缺血性血管疾病，副作用小。患者適應(yīng)性好，臨床實(shí)用價(jià)值高。筆者擬將丹參與藥物A開發(fā)成復(fù)方丹參注射液,以滿足臨床需要。丹參中有效成分達(dá)30余種,分為脂溶性和水溶性兩類。研究表明,從丹參中分離得到的水溶性成分主要有丹參素(丹參酸甲)、丹參酸乙、丹參酸丙、原兒茶醛、丹酚酸A、丹酚酸C和迷迭香酸等。其中丹參素和原兒茶醛是丹參水溶性成分中的主要藥效成分。筆者擬建立丹參素的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),以此評(píng)價(jià)丹參的提取工藝。1養(yǎng)血治療,養(yǎng)血清心丹參為唇形科植物(RadixSalviaemiltiorrhizae)的干燥根及莖。其味苦、溫?zé)?入心、肝經(jīng),具活血化瘀、安神寧心之功效。丹參素作為丹參主要水溶性成分之一,具有抑制血小板聚集、抗凝、擴(kuò)張冠脈、改善心臟功能、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗氧化損傷和降血脂等作用。丹參制劑在制備過程中,由于受到提取工藝的影響,丹參中原有的丹參素等有效成分,或提取不完全或受到破壞而損失,達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限量。筆者應(yīng)用高效液相的分析方法,以提取液中丹參素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),用正交實(shí)驗(yàn)法選擇最佳提取方法。1.1rheodyne進(jìn)樣器626高效液相泵;AlltechUVIS201紫外可見檢測(cè)器;TL9000色譜工作站,Rheodyne手動(dòng)進(jìn)樣器。丹參藥材(北京志誠堂藥業(yè)有限公司),丹參素鈉(上海醫(yī)科大學(xué)提供),乙醇(分析純,北京化工廠),鹽酸(分析純,北京化工廠),氫氧化鈉(分析純,北京化工廠),去離子水(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部)。1.2丹參材料的前處理1.2.1不同投料生藥材后人參素的回收試驗(yàn)結(jié)果筆者將藥材分別以根莖、飲片及粗粉(過30目)各10g,加水煎煮3次,合并3次煎液測(cè)定丹參素的累積煎出量,并計(jì)算累計(jì)煎出丹參素量與投料生藥材的比例,試驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可知,未經(jīng)處理的丹參原藥材經(jīng)3次水煎煮,丹參素的累計(jì)煎出量明顯少于飲片和粗粉的累計(jì)煎出量;飲片與粗粉的累計(jì)煎出量未見明顯差異。藥材飲片易得,不需處理,且丹參素提取量與粉碎后的丹參粗粉無明顯差異。筆者根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果選擇飲片的方式進(jìn)行投料,在工業(yè)生產(chǎn)規(guī)模時(shí),可根據(jù)生產(chǎn)成本及設(shè)備選擇相適應(yīng)的藥材預(yù)處理方式。1.2.2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)筆者通過正交試驗(yàn)法,對(duì)丹參的提取工藝開展研究,研究因素包括加水量、提取時(shí)間和提取次數(shù),各因素的水平數(shù)見表2。根據(jù)篩選的試驗(yàn)因素及水平數(shù),以提取液中丹參素含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo),選擇L9(34)表頭設(shè)計(jì)各組試驗(yàn)。各試驗(yàn)方案見表3。煎液合并,過濾,濾液濃縮成每毫升含原藥材1g,正交篩選試驗(yàn)結(jié)果見表4。結(jié)果表明最佳工藝條件為:A2B2C3,各因素對(duì)提取方法的影響程度依次為C>A>B,按篩選出的最佳工藝條件重復(fù)3次試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見表5。試驗(yàn)結(jié)果表明,取丹參藥材以10倍量水煎煮3次,每次1.5h,提取液中丹參素含量較高,該工藝經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)證明穩(wěn)定可行。1.3提取丹參溶液，消除各種疾病1.3.1醇沉過程中人參素含量的變化利用水與乙醇的溶解性能不同,水煎液用乙醇沉淀法可將其大部分雜質(zhì)除去,此方法為中藥提取時(shí)常用的方法。藥材水煎液成份十分復(fù)雜,在濃縮水煎液中,加入一定量的乙醇,不溶于冷乙醇的成份如淀粉、樹膠、粘液質(zhì)、糖類和蛋白質(zhì)等從溶液中沉淀析出,濾過除去,達(dá)到除雜目的。筆者將丹參提取液合并,過濾,濾液濃縮成每毫升含1g生藥材,加入95%乙醇,使含醇量達(dá)60%,0℃~4℃靜置48h后濾過,濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20~1.25。濃縮后濾液加入95%乙醇,使醇濃度分別為60%、70%和80%,0℃~4℃靜置48h后濾過,濾液回收乙醇,并濃縮至無醇味。筆者分別測(cè)定各醇沉后濾液中丹參素含量,考察不同二次醇沉濃度對(duì)丹參素含量的影響,結(jié)果見表6。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,隨著第二次醇沉?xí)r乙醇濃度的提高,雜質(zhì)沉淀量相應(yīng)增加,但丹參素含量也相應(yīng)降低。兼顧除去雜質(zhì)和盡量減少丹參素?fù)p失這兩方面要求,筆者選擇第二次醇沉的濃度為70%。1.3.2正交試驗(yàn)篩選為充分破壞丹參提取液中的鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)及不穩(wěn)定成分,同時(shí)提高有效成分丹參素的含量,進(jìn)一步對(duì)提取液進(jìn)行酸堿處理,并擬定各因素水平,開展正交試驗(yàn)研究。試驗(yàn)因素水平見表7,正交L9(34)各試驗(yàn)方案見表8。取經(jīng)醇沉處理后濾液200mL,用1mol/LNaOH溶液分別調(diào)至規(guī)定pH,加熱煮沸,放至室溫,過濾,濾液用10%HCl調(diào)至規(guī)定pH,0℃~4℃冷藏靜置48h,過濾,濾液補(bǔ)水,使每毫升含原藥材4g,即得。測(cè)定各組試驗(yàn)藥液中丹參素含量,并與藥物A配伍觀察溶液澄明度。根據(jù)篩選的試驗(yàn)因素及水平數(shù),選擇L9(34)表頭設(shè)計(jì)各組試驗(yàn)。正交篩選試驗(yàn)結(jié)果見表9。由表9可見各因素對(duì)酸堿處理方法的影響程度依次為:A>C>B,試驗(yàn)表明最佳工藝條件為:A2B3C3,按篩選出的最佳工藝條件重復(fù)3次試驗(yàn),結(jié)果見表10。酸堿處理方法為:取醇沉后濾液,用1mol/LNaOH溶液將pH值調(diào)至8,加熱煮沸1.5h,放冷至室溫,過濾,濾液用10%HCl調(diào)pH至3,0℃~4℃冷藏靜置48h,過濾,濾液補(bǔ)水,使每1mL含原藥材4g。以上述方法制備的丹參提取液丹參素含量較高,與藥物A配伍溶液澄明度好,因此確定上述工藝為酸堿處理工藝,并且該工藝經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)證明穩(wěn)定可行。1.4醇沉濃縮-液濃縮法取丹參藥材(飲片)加10倍量水煎煮3次,每次煎煮1.5h;合并煎液,過濾。得到的水煎液濃縮成每毫升含原藥材1g,用95%乙醇沉淀2次,第一次使其沉淀液含醇量為60%,第二次使其沉淀液含醇量為70%,每次醇沉后于0℃~4℃靜置48h后濾過,第一次醇沉濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20~1.25,第二次醇沉濾液濃縮至無醇味,經(jīng)2次醇沉處理后濾液濃縮至每毫升含原藥材4g,用1mol/LNaOH將pH調(diào)至8,加熱煮沸1.5h,過濾,用10%HCl溶液將濾液pH值調(diào)至3,0℃~4℃冷藏48h后過濾,即得。上述工藝過程重復(fù)3次,分別測(cè)定提取液中丹參素含量,試驗(yàn)結(jié)果見表11。采用上述工藝制備的三批丹參提取液丹參素含量較高,與藥物A配伍后溶液澄明度符合規(guī)定,該工藝重現(xiàn)性較好,證明該提取工藝穩(wěn)定可行。復(fù)方丹參注射液的穩(wěn)定性研究尚在進(jìn)行中。2試驗(yàn)討論2.1參外工作及其分析方法筆者開發(fā)的劑型為注射劑,因此在丹參提取過程中主要是以水提為主。丹參的水溶性主要成分為丹參素和原兒茶醛,因丹參素是丹參注射劑抑制血小板聚集和血栓形成的主要成分之一,故選取丹參素作為丹參提取的標(biāo)準(zhǔn)。因此在建立分析方法時(shí),主要以丹參素為研究對(duì)象開展相應(yīng)的分析方法學(xué)研究。在文獻(xiàn)報(bào)道中,丹參提取物成分較為復(fù)雜,針對(duì)丹參素的分析研究方法有紫外分光光度法、高效液相色譜法和薄層色譜法等。根據(jù)現(xiàn)有試驗(yàn)條件,采用高效液相色譜法對(duì)提取液中的丹參素進(jìn)行含量測(cè)定方法學(xué)的研究。2.2以二次醇沉回收三批有效成藥工藝筆者通過正交試驗(yàn)方法,以丹參素含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),對(duì)藥材的投料形式,提取方法和除雜方法開展研究,并確定最終的提取工藝如下:取丹參藥材(飲片)加10倍量水煎煮3次,每次煎煮2h;合并煎液,過濾。得到的水煎液濃縮成每毫升含原藥材1g,用95%乙醇沉淀兩次,第一次使其沉淀液含醇量為60%,第2次使其沉淀液含醇量為70%,每次醇沉后于0℃~4℃靜置48h后濾過,第一次醇沉濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20~1.25,第二次醇沉濾液濃縮至無醇味,經(jīng)二次醇沉處