動物實驗基本技術(shù)和方法 (NXPowerLite)課件

第八章動物實驗基本技術(shù)和方法動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)一、實驗前準(zhǔn)備理論準(zhǔn)備：了解動物實驗基礎(chǔ)知識制定研究計劃和方案查閱關(guān)于實驗方法的參考文獻(xiàn)條件準(zhǔn)備：儀器、器械、藥品運輸實驗和飼養(yǎng)場所動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)二、抓取和固定小鼠動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)大鼠動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)豚鼠動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)家兔動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)犬動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)貓的抓取動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)猴動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)三、性別、發(fā)情、配種與懷孕鑒定動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)四、編號和標(biāo)記1、染色法：淺色動物3.5-5％苦味酸溶液（黃色）0.5%中性紅或堿性品紅溶液（紅色）2％硝酸銀溶液（咖啡色，涂后光照10分鐘）煤焦油酒精溶液（黑色）龍膽紫溶液（紫色）動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)2、打耳孔法：小型動物動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)3、剪趾法：小型動物動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)4、剪尾法：大、小鼠，僅限與兩組間區(qū)分5、烙印法：刺號鉗，中、大型動物6、針刺法：中、大型動物7、號牌法：耳標(biāo)簽、項圈、腿圈，中、大型動物8、剪毛法：大動物9、籠子標(biāo)號動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)五、分組隨機(jī)化分組：避免人為影響例：將14只小鼠隨機(jī)分成兩組。①先將小鼠編為I～14號，②在隨機(jī)數(shù)字表上任點一數(shù)，按任意方向連續(xù)抄12個隨機(jī)數(shù)字。編排如下；動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物編號1234567891011121314隨機(jī)數(shù)日1622779439495443548217379323歸組BBABAABABBAAAA③奇數(shù)代表A織，偶數(shù)代表B組④A組：356811121314B組：1247910⑤調(diào)整分組：接剛才隨機(jī)數(shù)字23繼續(xù)抄表得隨機(jī)數(shù)字78，用78除以8（因為需要把C組的8個數(shù)字調(diào)整掉一個），得余數(shù)6，所以把A組的第6個動物，即12號動物調(diào)整到B組動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)⑥最終分組A組：3568111314B組：124791012動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)例：12只大鼠隨機(jī)分為3組①大鼠編號1~12②在隨機(jī)數(shù)字表上任點一數(shù)，按任意方向連續(xù)抄12個隨機(jī)數(shù)字。③每個數(shù)分別用3除，記錄余數(shù)，④根據(jù)余數(shù)分組大鼠編號：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12隨機(jī)數(shù)字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79，69，10余數(shù)：2，0，1，2，0，2，0，0，1，1，0，1組別：B，C，A，B，C，B，C，C，A，A，C，A動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)⑤A：3，9，10，12B；1，4，6C：2，5，7，8，11⑥調(diào)整分組：接剛才隨機(jī)數(shù)字10繼續(xù)抄表得隨機(jī)數(shù)字61，用61除以5（因為需要把C組的5個數(shù)字調(diào)整掉一個），得余數(shù)1，所以把C組的第1個動物，即2號動物調(diào)整到B組。⑦最終分組A：3，9，10，12B；1，2，4，6C：5，7，8，11動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)六、去毛1、剪毛：彎頭剪毛剪2、拔毛：大小鼠尾靜脈、家兔耳緣靜脈注射3、剃毛：將剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸溫肥皂水潤濕，用剃刀順著被毛方向剃毛，用電動剃毛推剪，則逆被毛向剃毛。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)4、化學(xué)脫毛：常用脫毛劑①8%硫化鈉水溶液②硫化鈉3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水調(diào)成糊狀③硫化鋇50克，氧化鋅25克，淀粉25克，加水100毫升調(diào)成糊狀④硫化鈉10克，生石灰15克，加水到100毫升，適合犬和其他大動物。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)七、給藥1、自動口服：加入飼料或飲水2、投喂藥片：掰開口，放到舌根部3、灌胃（i.g)：動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)4、直腸給藥5、呼吸道給藥6、滴鼻7、點眼8、經(jīng)皮膚給藥：常用于檢測藥物、毒物、化妝品等的透皮吸收、局部作用、至敏作用等。家兔和豚鼠選擇脊柱兩側(cè)皮膚，大小鼠常采取浸尾方式。9、皮內(nèi)注射(i.d)：一般用于接種或過敏實驗。將藥液注射在真皮和表皮之間。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)10、皮下注射(s.c)：頸背部、腋下、腿、側(cè)腹11、肌肉注射(i.m)：股部肌肉動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)12、腹腔注射(i.p)：下腹部腹中線兩側(cè)13、靜脈注射(i.v)：小鼠：尾靜脈大鼠：尾靜脈、陰莖靜脈、舌下靜脈、淺背側(cè)跖靜脈動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)尾靜脈注射：大小鼠有上、左、右3根尾靜脈陰莖靜脈注射動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)舌下靜脈注射淺背側(cè)跖靜脈注射猴的后肢皮下靜脈注射動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)豚鼠：淺背側(cè)跖靜脈、耳靜脈注射家兔：耳靜脈注射豬：耳緣靜脈猴：前肢橈靜脈、后肢隱靜脈注射動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)貓、狗：前肢內(nèi)側(cè)頭靜脈、后肢外側(cè)小隱靜脈注射狗前肢內(nèi)側(cè)頭靜脈狗后肢外側(cè)小隱靜脈動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)14、腦腔注射：（1）小鼠小指夾鼠尾，拇指和是指置小鼠頭兩側(cè)固定，中指和無名指壓住鼠身，在注射處消毒后，右手持注射器，以食指固定針芯，垂直刺入針頭深度約5～7mm（2）兔將兔用固定器固定好，剃去頭頂?shù)谋幻?，左手將頭皮繃緊，消毒后，右手持錐子，自頭頂正中稍偏一側(cè)部位，錐穿頭骨，即換以左手固定錐子，右手持注射器，使針頭沿錐尖刺入，慢慢拔出錐子，即刻將針頭刺入約10～20mm，即可推液動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)15、關(guān)節(jié)腔注射：16、椎管內(nèi)注射：注射入蛛網(wǎng)膜下腔17、淋巴囊內(nèi)注射：蛙和蟾蜍動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)18、小腦延髓池注射：動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)八、采血1、大小鼠：眶靜脈叢（竇）：少量多次采大小鼠血。小鼠0.2～0.3ml，大鼠0.4～0.6ml摘眼球：用于一次大量采小鼠血，可得到4～5％體重的血量尾靜脈：用于少量多次采大小鼠血動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)剪頭：用于一次性大量采小鼠血，可得到0.5～1.0ml的血量大血管：包括頸動脈（靜脈），股動脈（靜脈），腋下動脈（靜脈），腹主動脈。此方法不常用于小鼠采血，而多用于大鼠一次性大量采血?？傻?ml左右血量。心臟采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（開胸）或多次采血（不開胸）。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)2、家兔：耳緣靜脈：可反復(fù)采血，每次5～10ml。耳中央靜脈：可反復(fù)采血，每次10～15ml。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)心臟采血：可用于一次性（開胸）或多次采血（不開胸）。一次性開胸采血可得到80～100ml血量頸動靜脈采血：用于一次性采血，需要手術(shù)，可得血量80～10ml。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)3、豚鼠：心臟采血：可用于一次性（開胸）或多次采血（不開胸）。一次性開胸采血可得到5～10ml血量。背跖靜脈采血：用于少量反復(fù)采血。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)4、犬貓：和靜脈注射部位相同，前肢內(nèi)側(cè)頭靜脈、后肢外側(cè)小隱靜脈。也可頸靜脈（動脈）或心臟采血5、豬：心臟采血或耳大靜脈采血6、羊：頸靜脈采血7、猴：前肢頭靜脈、后肢皮下靜脈或耳緣靜脈等。8、禽類：翼下靜脈動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)常用抗凝劑：肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。純品肝素1mg＝125U，10U~20U抗1ml血凝集，但通常應(yīng)用2~3倍劑量。用法：可配成1%肝素溶液，用時取0.1ml于試管內(nèi)，100℃烘干，每管可抗凝5~10ml血?；蛴?%肝素溶液濕潤采血注射器。肝素可改變蛋白質(zhì)等電點，當(dāng)用鹽析法分離蛋白作分類測定時，不可用肝素抗凝。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)枸櫞酸鈉：使凝血必需的鈣離子失活。常用3~5%水溶液，堿性較強(qiáng)。草酸鹽合劑：草酸銨1.2g，草酸鉀0.8g，福爾馬林1.0ml，加蒸餾水至100ml。使凝血必需的鈣離子失活。每毫升血加草酸鹽合劑0.1ml。氟化鈉：每毫升血加6mg。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)九、其他體液采集1、胸水、腹水采集：穿刺2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，膽汁3、精液采集：中、大動物用假陰道，小動物穿刺附睪來采集精液。4、腦脊液采集：手術(shù)或小腦延髓池抽取5、骨髓采集：大動物活體穿刺，小動物處死后取股骨或胸骨骨髓動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)6、尿液采集：代謝籠收集導(dǎo)尿管采集膀胱穿刺壓迫排尿動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)十、麻醉1、麻醉方法：全麻吸入麻醉，靜脈注射、腹腔注射。局麻浸潤麻醉。根據(jù)手術(shù)，按皮下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等順序逐步深入注射到術(shù)野周圍。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)2、麻醉前準(zhǔn)備：禁食8~12h，防止嘔吐，可飲水根據(jù)實驗部位和種類，給動物脫毛。犬、豬、猴等大動物可在麻醉前給予一些藥物以減少動物緊張，減少支氣管分泌動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)阿托品：減少支氣管和唾液腺分泌，防止氣管阻塞。副作用：加快心率。用量：肌肉或皮下注射0.04mg/kg安定：產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用，加強(qiáng)麻醉效果，使骨骼肌松弛。用量：2.5~5mg/kg嗎啡：產(chǎn)生鎮(zhèn)靜作用。副作用：抑制呼吸中樞。用量：皮下注射1~2mg/kg，肌肉注射10~20mg/kg.動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)3、麻醉藥物：全麻藥物乙醚：強(qiáng)揮發(fā)性、易燃。乙醚是最常用的吸入麻醉劑，各種動物適用。機(jī)制：抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)。特點：安全范圍大，肌肉完全松弛，對肝腎毒性小，麻醉誘導(dǎo)期和蘇醒期較長。副作用：局部刺激大，引起上呼吸道黏膜分泌增加，導(dǎo)致呼吸道阻塞，可用阿托品對抗解救。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)巴比妥類：種類很多，有巴比妥鈉，戊巴比妥鈉，硫噴妥那，苯巴比妥鈉等。適用于各種動物。特點；安全范圍廣，毒性小，麻醉潛伏期短，麻醉維持時間長。可腹腔或靜脈給藥。機(jī)理：阻斷神經(jīng)沖動傳遞到大腦。副作用：過量使用可導(dǎo)致呼吸肌麻痹而死亡，同時抑制末梢循環(huán)，導(dǎo)致血壓降低，并影響基礎(chǔ)代謝，導(dǎo)致體溫降低動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)氯胺酮：常用其鹽酸鹽。特點：麻醉潛伏期短，麻醉維持期僅10~20min，麻醉淺，安全性高，可重復(fù)給藥。機(jī)制：阻斷大腦聯(lián)絡(luò)途徑。副作用：興奮心血管系統(tǒng)，使血壓升高，心率加快，偶爾引起嘔吐。水合氯醛：作用特點和巴比妥類相似。但安全范圍小，麻醉劑量和中毒劑量接近，對皮膚和黏膜有較強(qiáng)刺激。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)局麻藥物普魯卡因：是無刺激性的局麻藥物。特點：麻醉速度快，注射后1~3分鐘就可產(chǎn)生麻醉?？梢跃S持30~45分鐘。對皮膚和黏膜穿透力很弱，需要注射給藥才能產(chǎn)生局麻效果。它可以使血管舒張，易被吸收入血液而失去效果。在其溶液中加入腎上腺素（每100ml加入0.1%腎上腺素0.2~0.5ml）可以使麻醉時間延長1~2小時。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)利多卡因：效力和穿透力比普魯卡因強(qiáng)的卡因：化學(xué)結(jié)構(gòu)和普魯卡因類似，效力和穿透力比普魯卡因強(qiáng)。動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)

4、實驗動物的急救呼吸停止：人工呼吸尼可剎米：適用于各種原因的中樞性呼吸衰竭，每次0.25g~0.5g，靜脈注射。戊四氮：對抗巴比妥類和氯丙嗪過量導(dǎo)致的呼吸衰竭，每次0.1g，靜脈注射或心內(nèi)注射美解眠：對抗巴比妥類和水合氯醛中毒，每次50mg，靜脈緩慢注射動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)心跳停止：心臟按摩針刺或脈沖電刺激腎上腺素：用于心臟驟停的急救。每次0.5~1.0ml靜脈注射碳酸氫鈉：糾正急性酸中毒?？勺⑸淠I上腺素后立即靜脈注射5%碳酸氫鈉1~2ml/kg動物實驗基本技術(shù)和方法(NXPowerLite)十一、處死1、頸椎脫臼法：小鼠、大鼠2、空氣栓塞法：兔、貓、犬等大動物3、放血法：心臟放血或大血管放血4、斷頭法：小鼠、大鼠5、吸入二氧化碳6、注射巴比妥類藥物動物實驗基本技術(shù)和方法(