知識點1 總大腸菌群檢驗

總大腸菌群檢驗主講人：胡肖容檢測原理及程序乳糖發(fā)酵檢驗伊紅美藍平板分離檢驗革蘭氏檢驗MPN檢驗報告一、大腸菌群檢驗原理與程序

大腸菌群是水體糞便污染的指示菌。天然水體的細菌性污染主要源于生活污水中的糞便，其中可能病原菌種類很多，而大腸菌群是數(shù)量最大的，可以用作水體糞便污染狀況的指示菌。大腸菌群的類別特征：37℃24~48h能利用乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，好氧和兼性厭氧，Ｇ-，無芽胞。能在伊紅美藍培養(yǎng)基上產(chǎn)生特征性菌落：有核心，帶金屬光澤，深紫色；深黑色、不帶或略帶金屬光澤；淡紫紅色、中心較深。1、檢驗程序：

乳糖發(fā)酵檢驗伊紅美藍平板分離檢驗

革蘭氏染色（1）制備培養(yǎng)基

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：

成分：蛋白胨10g、牛肉膏3g、乳糖5g、氯化鈉5g、水1000ml，溴甲酚紫乙醇液（16g/L）1ml。

制法：調(diào)pH7.2~7.4后加入溴甲酚紫乙醇液，分裝于裝有倒管的試管中（每管10ml）。115℃20min。

二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液：除水外加倍。2、準備工作：伊紅美藍培養(yǎng)基：

成分：蛋白胨10g、磷酸氫二鉀2g、瓊脂20g、水1000ml，乳糖10g；伊紅水溶液（20g/L）20ml、美藍水溶液（5g/L）13ml。

制法：調(diào)pH7.2后加入乳糖，115℃20min。倒平板前加入伊紅美藍。制備無菌生理鹽水。（2）培養(yǎng)皿、試管、移液管等玻璃器皿的滅菌；

生活飲用水——原始水樣，接種10ml到雙料液中（或加1個10倍無菌生理鹽水稀釋液，接種1ml到單料液中）。

出廠自來水——原始水樣接種10ml到雙料液中，1ml10倍無菌生理鹽水稀釋液接種到單料液中。

水源水——10倍無菌生理鹽水遞交稀釋到10－3，3濃度各1ml接種到單料液中；污染嚴重可加大稀釋度。每個樣品接種均為5重復。二、乳糖發(fā)酵檢驗

36℃培養(yǎng)24h。產(chǎn)酸（變黃色）產(chǎn)氣者報告為乳糖檢驗陽性，進入下一步檢測。取發(fā)酵液接種到伊紅美藍培養(yǎng)基平板（劃線分離），36℃培養(yǎng)24h。具備下列大腸菌群典型菌落特征的為陽性管：

有核心，帶金屬光澤，深紫色；

深黑色、不帶或略帶金屬光澤；

淡紫紅色、中心較深。三、伊紅美藍平板分離檢驗大腸菌群Ｇ-或復發(fā)酵（乳糖蛋白胨培養(yǎng)液培養(yǎng)）產(chǎn)酸產(chǎn)氣。四、革蘭氏染色檢驗經(jīng)過前面三個環(huán)節(jié)的檢驗，得到證實的各稀釋度的大腸菌群陽性管數(shù)；查閱總大腸菌群MPN檢索表，得到MPN/100ml值；再乘以測定3稀釋