免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù).ppt

1、a，1，免疫細(xì)胞功能檢查技術(shù)，a，2，1淋巴細(xì)胞功能檢查，淋巴細(xì)胞功能測量可分為體內(nèi)實驗和體外實驗。體內(nèi)實驗主要是間接理解淋巴細(xì)胞對抗原、抗原或有絲分裂源的反應(yīng)。體外實驗主要包括抗原或有絲分裂初級刺激后淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)，細(xì)胞毒性試驗和淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)物測定，a，3，淋巴細(xì)胞，T細(xì)胞(負(fù)責(zé)細(xì)胞免疫功能)b細(xì)胞(執(zhí)行體液免疫功能)NK細(xì)胞(非特異性免疫功能)，a，4，1原理：淋巴細(xì)胞，DNA合成，分化，毛細(xì)細(xì)胞，刺激物，細(xì)胞變大，細(xì)胞漿擴張，液泡，細(xì)胞核明顯，核染色質(zhì)松弛，a，6淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的刺激物，非特異性刺激物：PHA - T細(xì)胞ConA - t，b細(xì)胞LPS - b細(xì)胞特異性刺激物：異種抗原

2、同種組織抗原，a，8，3。檢測方法，形態(tài)方法：刺激淋巴細(xì)胞(4-6天)毛細(xì)飽和同位素法：PHA淋巴細(xì)胞(54h) DNA合成期3HTdR與收集細(xì)胞混合，檢測射線，細(xì)胞內(nèi)3h-TDR，缺點：如果用肉眼觀察形態(tài)變化，則判斷容易受到主觀因素的影響，重復(fù)性和準(zhǔn)確性差。a，11，(2) 3H-TdR混合立法，a，12，優(yōu)點：3H-TdR混合立法靈敏度高，客觀性強，重復(fù)性好。缺點：雖然需要特定的設(shè)備條件，但也存在放射性核素污染問題。a，13，MTT，吸光度測定，(3) MTT比色法，a，14，(2) t細(xì)胞分泌功能測定，體外培養(yǎng)的t細(xì)胞受多種絲狀體或抗原刺激后，通過免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)分別獲

3、得細(xì)胞因子，a，15，(3) t細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性試驗，1 .原理：目標(biāo)細(xì)胞抗原，t細(xì)胞，殺傷活力觀察，致敏CTL，目標(biāo)細(xì)胞，a，16，形態(tài)方法：淋巴細(xì)胞腫瘤細(xì)胞數(shù)殘留腫瘤細(xì)胞，2。方法，意義：腫瘤患者CTL殺死腫瘤細(xì)胞的能力，a，17，a，18，51cr釋放方法，a，19，(4)活體檢查，特定抗原皮膚檢查PHA皮膚檢查，a，20，2，原理：a，23，2。方法：經(jīng)典溶血性斑塊形成試驗人工溶血斑塊試驗，a，24，3。臨床應(yīng)用和評價，溶血斑塊測試主要用于評估藥物和手術(shù)等因素對體液免疫功能的影響，以及免疫治療或免疫重建后身體產(chǎn)生抗體的能力。a，25，(c) b細(xì)胞抗體形成功能檢測酶聯(lián)免疫吸附法ELI

4、SPOT，1。原理：a，26，2。應(yīng)用及方法評價：該方法同時檢測抗體分泌細(xì)胞和抗體分泌量。優(yōu)點：穩(wěn)定性、特異性、抗原含量低?？梢酝瑫r檢測不同抗原誘導(dǎo)的不同抗體分泌，可以量化?？梢詸z測到組織切片分泌抗體的單個細(xì)胞。a，27，(4)體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特定抗原包括白喉毒素、破傷風(fēng)毒素、多價肺炎鏈球菌疫苗等。避免適當(dāng)數(shù)量的抗原或?qū)∪饷庖叩耐瑫r，在免疫前和免疫后1周、2周、3周分別采血分離血清，并測定被檢查者免疫前后相應(yīng)抗體的效價，判定被檢查者體內(nèi)b細(xì)胞功能。，a，28，染色數(shù)，離心LDH或AKP，離心沉淀測定活性細(xì)胞熒光，發(fā)光強度測定，CPM值，形態(tài)酶解釋法同位素化學(xué)發(fā)光，3，NK細(xì)胞活性測定，靶細(xì)胞溶

5、解，常用靶細(xì)胞3360 K562細(xì)胞株原理：a，32，2。方法：瓊脂糖平板法，濾膜滲透法，A，33，(b)吞噬及殺菌功能測定，1 .顯微鏡檢查法：a，34，2。溶菌法，a，35，NBT還原試驗，原理：n-n-c h n=n-r-，n-NH2 c n=NH，基于四唑NBT還原試驗，a，36，中性粒細(xì)胞，NBT，顆粒沉積在細(xì)胞質(zhì)中，a，37，2，巨噬細(xì)胞功能檢查，(a)木炭分裂試驗，正常小鼠肝臟中未干的細(xì)胞可吞噬90%碳粒子，將其去除因此，將印度墨汁(木炭顆粒懸浮液)定量地靜脈注射到老鼠身上，以一定的間隔重復(fù)靜脈血，測量血液中碳顆粒的濃度，并根據(jù)血液中碳顆粒分離的速度判定巨噬細(xì)胞的功能。a，38，(2)吞噬細(xì)胞對粒細(xì)胞抗原物質(zhì)的吞噬作用很強，以雞紅細(xì)胞(CRBC)、念珠菌、酵母細(xì)胞等為吞噬顆粒，用分離敷料收集人巨噬細(xì)胞或從腹腔積液中提取鼠巨噬細(xì)胞的吞噬作用。a，39，(3)巨噬細(xì)胞溶酶體酶測定，1。酸性磷酸酶測定硝酸鉛偶氮法2。非特異性酯酶測定一般為-萘乙酸法，a，40，(4)細(xì)胞毒性測定，用IFN-激活小鼠巨噬細(xì)胞，對標(biāo)記為125I-UdR的DBA/2小鼠肥大細(xì)胞瘤P815的殺傷活性觀察。a，41，(5)巨噬細(xì)胞的凝血活性測定，活化巨噬細(xì)胞產(chǎn)生與薄膜結(jié)合的凝血活