HPV分型的檢測(cè).ppt

1、a,1,宮頸癌篩查的首選人乳頭瘤病毒（HPV）分型的檢測(cè)制作人：劉海峰,a,2,目錄,宮頸癌與HPV關(guān)系 HPV簡(jiǎn)介 HPV的生物學(xué)特點(diǎn) HPV感染特點(diǎn) HPV基因分型檢測(cè)原理 HPV基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 常用HPV檢測(cè)方法 HPV的基因分型 HPV標(biāo)本的采集處理與保存,宮頸癌與HPV關(guān)系,豪森，德國(guó)人， 2008年10月諾貝爾獎(jiǎng)獲得者 研究了人乳頭狀瘤病毒與宮頸癌的關(guān)系。據(jù)權(quán)統(tǒng)計(jì)，全球每分鐘就有一例宮頸癌新發(fā)病例，每2分鐘就有一名婦女死于宮頸癌，在中國(guó)每4分鐘就有一例宮頸癌新發(fā)病例，每天約80名婦女死于此疾病。近年來宮頸癌患病呈上升趨勢(shì)。,a,4,哪些人群更容易患宮頸癌,性生活過早的婦女 早孕多產(chǎn)或

2、多次人工流產(chǎn)的婦女 自身或性伴侶有多個(gè)性伴侶的婦女 曾經(jīng)貨正患有生殖道HPV、單純皰疹病毒、HIV感染或其它性傳播疾病的婦女。 吸煙、吸毒、營(yíng)養(yǎng)不良的婦女 有宮頸病變（長(zhǎng)期慢性宮頸炎、宮頸癌前病變、宮頸癌、子宮內(nèi)膜癌、陰道癌或外陰癌）病變的婦女,a,5,感染途徑,1、性傳播途徑 2、密切接觸 3、間接接觸：通過接觸感染者的衣物、生活用品等 4、醫(yī)源性感染：醫(yī)務(wù)人員在治療護(hù)理時(shí)防護(hù)不好，造 成自身感染或通過醫(yī)務(wù)人員傳給患者 5、母嬰傳播：是由嬰兒通過孕婦產(chǎn)道的密切接觸,a,6,常見宮頸癌篩查方法的對(duì)比,a,7,宮頸癌的首選 HPV檢測(cè),與細(xì)胞學(xué)檢查相比，HPV檢測(cè)具有更高的敏度 和重復(fù)性。國(guó)際權(quán)

3、威機(jī)構(gòu)歐洲生殖感染和腫瘤 研究組織推薦將HPV檢測(cè)作為宮頸癌篩查的首選方 法。,a,8,簡(jiǎn)介,什么是人類乳突病毒 ？ 人類乳突病毒（Human Papillomavirus，簡(jiǎn)稱HPV）是一種嗜上 皮性病毒，有高度的特異性，長(zhǎng)期以來，已知HPV可引起人類良性的 腫瘤和疣，如生長(zhǎng)在生殖器官附近皮膚和粘膜上的人類尋常疣、尖銳 濕疣以及生長(zhǎng)在粘膜上的乳頭狀瘤。像乙肝病毒一樣，HPV也是一種 DNA病毒。它原是多瘤空泡病毒科的一員，1999年國(guó)際病毒分類委員 會(huì)（ICTV）取消多瘤空泡病毒科，代之以乳頭瘤病毒科，因此，HPV 便歸屬此門下。,注：,如何對(duì)待HPV感染？,1.HPV 感染較為常見 2.多

4、數(shù) HPV 可以被清除,“一過性”感染不致宮頸病變 3.少數(shù)持續(xù)性感染會(huì)引發(fā)宮頸病變 4.HPV致CINI、CINII、CINIII到浸潤(rùn)癌需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間，一般是810年 5.致宮頸癌的是高危型HPV 6.HPV(+)只說明是一種感染，并非是一種疾病 7.沒有HPV感染可以不得宮頸癌 , 因此避免HPV感染可以避免發(fā)生宮頸癌 8.目前治療 HPV 感染的方針是“治病不治毒”, 對(duì)于HPV 感染的檢查與治療的輕視和過分恐懼都不適宜,a,10,HPV的生物學(xué)特點(diǎn),1、HPV為小DNA病毒，通常引起生殖器疣、子宮頸及肛門、生殖道 癌。目前已完全鑒別到的HPV有80種型，型與型之間的差異在于基因結(jié)

5、構(gòu)的不同，基因結(jié)構(gòu)的差異決定其存在部位及可能導(dǎo)致的皮膚病變類 型。 2、乳頭瘤病毒科的成員主要包括人乳頭瘤病毒、牛乳頭瘤病毒、 狗口腔乳頭瘤病毒、棉尾兔乳頭瘤病毒、多乳房小鼠乳頭瘤病毒和鹿 乳頭瘤病毒。 3、HPV呈球形，無包膜，20面體立體對(duì)稱結(jié)構(gòu)。HPV基因組是雙鏈 環(huán)狀，以共價(jià)閉合的超螺旋、開放的環(huán)狀DNA結(jié)構(gòu)。,a,11,HPV感染特點(diǎn),初次感染HPV大部分可自行消退。與病毒的侵襲能力和感染者的免疫狀態(tài)相關(guān)，連續(xù)多次的HPV感染會(huì)引發(fā)女性子宮頸發(fā)生病變，并可能導(dǎo)致子宮頸癌。 HPV感染后以整合和非整合兩種狀態(tài)存在于宿主細(xì)胞。 性行為和年齡是兩個(gè)HPV相關(guān)性腫瘤的高危因素。 感染高峰年齡

6、:17-33歲；每年新感染的病例，高峰年齡為2024歲。,a,12,HPV基因分型檢測(cè)原理,采用PCR體外擴(kuò)增和DNA反向點(diǎn)雜交相結(jié)合的DNA芯片技術(shù)。 利用HPV的基因特點(diǎn)設(shè)計(jì)特異引物，可以擴(kuò)增出23種HPV基因型的目標(biāo)片段，再將擴(kuò)增產(chǎn)物與固定在膜條上的包括18種高危型和5種低危型在內(nèi)的分型探針進(jìn)行雜交，依據(jù)雜交信號(hào)的有無來判斷是否有這些HPV基因型的存在。,a,13,HPV基因結(jié)構(gòu)特點(diǎn),為雙鏈環(huán)狀DNA，長(zhǎng)約8kb，由8個(gè)ORF框組成，按基因功能可分為長(zhǎng)控制區(qū)（上游調(diào)控區(qū)）、早期基因區(qū)（E1、E2、E4-E7）編碼六個(gè)早期蛋白和晚期基因區(qū)（L1、L2）編碼兩個(gè)晚期蛋白。 E1、E2與病毒的

7、復(fù)制有關(guān)，E6、E7是癌基因，分別與抑癌基因P53、pRb結(jié)合并導(dǎo)致其失活，這是高危型HPV感染與子宮頸癌發(fā)生的重要分子機(jī)制。 L1、L2編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白形成病毒外殼，L2蛋白在病毒感染靶細(xì)胞的過程中及其感染后的生命周期中都發(fā)揮著重要的作用。不同型別HPV L2蛋白8-81、90-115和280-333(以HPV16為基準(zhǔn))區(qū)域的氨基酸序列高度保守 。,a,14,HPV基因結(jié)構(gòu)圖,a,15,常用HPV檢測(cè)方法的分析,一、染色鏡檢： 將疣狀物作組織切片或生殖道局部粘液涂片，用帕尼科拉染劑染色 后，光鏡下觀察到特征性空泡細(xì)胞或角化不良細(xì)胞和角化過度細(xì)胞，可 初步HPV診斷。 二、HPVDNA檢測(cè)

8、： 根據(jù)不同標(biāo)本采用點(diǎn)雜交或原位雜交檢測(cè)HPV-DNA。亦可選擇適當(dāng)?shù)?特異序列，合成引物做PCR后進(jìn)行雜交，PCR具有敏感，特異及可選擇不 同型別的引物擴(kuò)增后分型等優(yōu)點(diǎn)。 三、血清學(xué)試驗(yàn)： 應(yīng)用重組技術(shù)表達(dá)抗原檢測(cè)患者血清中l(wèi)gG抗體。或抗原免疫動(dòng)物制 備免疫血清或單克隆抗體檢測(cè)組織或局部粘液中HPV抗原。,四、HPV基因檢測(cè),a,17,常見HPV的基因分型,依據(jù)HPV與宮頸癌發(fā)生相關(guān)性高低可分為高危型和低危型 經(jīng)美國(guó)FDA確認(rèn)的HPV高危型有：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68 等14種 低危型有：HPV6、11、42、43、44等5種

9、 現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的HR類型中基本都包含有：HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，68，73，82等17種,a,18,HPV亞型及地域分布,目前已有120多種HPV基因型被確定，其中40多種亞型與生殖道感染有關(guān)，同類型的不同類型的HPV感染可導(dǎo)致不同的臨床病變。 HPV有嚴(yán)格的嗜上皮特性，只能感染人的皮膚和粘膜層，根據(jù)HPV的組織嗜異性，將其分為皮膚類和粘膜類。后者又根據(jù)其致病力不同分為低危型和高危型。低危型包括6、11、42、43、44等亞型，主要引起肛門皮膚及男性外生殖器、女性大小陰唇、尿道口、陰道部位的外生性疣類病變和低度子宮頸上皮內(nèi)瘤。高危型包括16、18、31、33、35、45、52、53、56、58等十多種亞型，除了可引起外生殖器疣外，還可引起外生殖器癌、宮頸癌及高度子宮頸上皮內(nèi)瘤，尤其是宮頸癌。研究表明，HPV引起的肛門癌、陰莖癌、女陰癌和宮頸癌中，以宮頸癌最多，99.7%的宮頸癌中都能發(fā)現(xiàn)高危性HPV感染，其中以16、18型為主，約占發(fā)病的65%，是誘發(fā)宮頸癌首要潛在病因。,a,19,HPV引起的常見疾病與HPV亞型,a,20