杜氏肌營養(yǎng)不良癥(DMD)

1、主講人：牟勝、王超、鄭爽、車Xi、蘇波、陶韋杰、杜氏肌營養(yǎng)不良癥(DMD)，屬于X連鎖隱性遺傳病，是男性中常見的遺傳病。發(fā)病率約為1/3 500活男孩，大多數(shù)婦女是致病基因的攜帶者。發(fā)病率很低，癥狀輕微。男性患者發(fā)病年齡小，潛伏發(fā)病，病程長，癥狀嚴(yán)重，死亡率高?；颊叱１憩F(xiàn)為進(jìn)行性肌肉萎縮和虛弱，伴有腓腸肌假肥大，大多數(shù)在3歲或5歲時(shí)發(fā)病，病程進(jìn)展迅速，大多數(shù)在20歲左右死于心肺衰竭。兒童有一個(gè)從躺到站的特殊過程(高爾標(biāo)志)，他們以鴨子的步態(tài)行走。糖尿病腎病-臨床表現(xiàn)，藥物治療：糖皮質(zhì)激素治療是唯一一種經(jīng)循證醫(yī)學(xué)證明有效并能延緩糖尿病腎病病程的藥物。短期口服激素療法可增強(qiáng)骨骼肌的力量和功能，并可

2、在較長時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定骨骼肌的力量和功能?；蛑委煟合傧嚓P(guān)病毒(AAV)，不直接引起人類疾病，免疫原性較低，被用作載體引入人工定制的Dys基因。康復(fù)治療、骨科治療、社會(huì)心理治療等。DMD-臨床治療，DMD-遺傳模式和特征，(1)通常只有男性患者的譜系，(2)當(dāng)父母雙方都沒有生病，女兒不會(huì)生病，但兒子可能會(huì)生病；(3)由于交叉遺傳，患者的同胞、叔伯、堂兄弟和侄子往往是這種疾病的患者；(4)由于男性患者的子女正常，可見返祖現(xiàn)象；(5)女性患者的父親必須是患者，母親必須是攜帶者。注意：在XR疾病中，男性致病基因只能從母親那里傳播，但將來只能傳播給女兒，沒有從男性到男性的傳播。也就是說，從父親傳給女兒，從母

3、親傳給兒子，這就是所謂的交叉繼承，D-M-D繼承模式和特點(diǎn)。D型肌營養(yǎng)不良癥是由肌營養(yǎng)不良蛋白(Dys)基因突變引起的，屬于一種常見的進(jìn)行性肌營養(yǎng)不良癥。已經(jīng)證實(shí)，人肌營養(yǎng)不良蛋白基因位于X染色體(Xp21.1 3)的短臂上，全長約2 220kb，包括79個(gè)外顯子和14kb的cDNA長度，是已知的最大的人基因。分子遺傳學(xué)和突變，Dys和肌營養(yǎng)不良蛋白組裝在一起，形成肌營養(yǎng)不良蛋白的結(jié)合蛋白復(fù)合物(DAPC)。DAPC形成了一個(gè)重要的結(jié)構(gòu)，通過肌膜傳遞信號，連接細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)肌動(dòng)蛋白骨架。Dys基因表達(dá)的缺乏將影響DAPC的形成并中斷分子橋，這至少導(dǎo)致兩個(gè)結(jié)果：第一，當(dāng)肌肉離心收縮時(shí)，細(xì)胞膜

4、變得更加脆弱并將被機(jī)械力破壞；其次，框架蛋白，尤其是對機(jī)械力敏感的離子通道，將失去平衡。這是導(dǎo)致疾病的機(jī)制。分子遺傳和突變。約3 0%的糖尿病患者為自發(fā)突變，其余為X染色體隱性遺傳。在各類突變中，單個(gè)或多個(gè)外顯子缺失突變的患者分別占65%和70%；無意義或幀移位引起的點(diǎn)突變占30%，重復(fù)占5%和15%。因此，DMD突變類型主要是缺失，其特征是Xp21外顯子缺失的異質(zhì)性。DMD-分子遺傳與突變、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查、生化檢查、基因診斷、DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷、染色體檢查(X，Y) X染色質(zhì)檢查X染色質(zhì)檢查可刮掉口腔粘膜和陰道粘膜的上皮細(xì)胞，或涂片絨毛或羊水中的胎兒脫落細(xì)胞，用硫堇或甲苯胺藍(lán)染色，并在光鏡下

5、計(jì)數(shù)X染色質(zhì)的數(shù)量。y染色質(zhì)檢查y染色質(zhì)檢查適用于具有一條或多條y染色體的個(gè)體或細(xì)胞群。實(shí)驗(yàn)室診斷和生化診斷可以定性和定量分析血清酶和蛋白質(zhì)。血清肌酸激酶(CK)含量是血清酶學(xué)檢查中最有價(jià)值的。DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷，基因診斷，DMD-實(shí)驗(yàn)室診斷，DMD-風(fēng)險(xiǎn)評估，DMD家族圖譜，DMD約為XR遺傳病女性攜帶者的三分之一，血清肌酐正常，2名為攜帶者，染色體核型XAXa，產(chǎn)前診斷有兩個(gè)時(shí)間窗，最好在1012孕周采集絨毛選擇絨毛進(jìn)行產(chǎn)前診斷有三個(gè)原因：(1)防止母體污染：DMD和SMA主要是缺失突變，母體污染會(huì)導(dǎo)致診斷錯(cuò)誤，如果不培養(yǎng)帶血羊水，會(huì)直接導(dǎo)致診斷錯(cuò)誤，而絨毛可以通過形態(tài)學(xué)檢查準(zhǔn)確選擇。(2

6、):的早期診斷，如胎兒受累，更便于處理(夫妻雙方的知情選擇)，且在分析失敗或出現(xiàn)問題的情況下，可在晚些時(shí)候取羊水；在妊娠中期，如果出現(xiàn)血性污染，需要進(jìn)行羊水培養(yǎng)。回旋余地太小，很難重新取樣。(3)成功率高。從：絨毛中提取的DNA質(zhì)量高，成功率高。產(chǎn)前診斷-時(shí)機(jī)，由于基因突變的復(fù)雜性，在產(chǎn)前診斷前應(yīng)進(jìn)行先證者預(yù)分析，以確定基因突變的細(xì)節(jié)和父母的遺傳多態(tài)性標(biāo)記是否提供了雜合性信息，從而確定該家系產(chǎn)前診斷的方式和策略。首先，應(yīng)分析家族成員21號染色體上的STR標(biāo)記。這個(gè)測試的優(yōu)點(diǎn)是：首先，它可以檢測21三體綜合征，因?yàn)樵袐D在第二次分娩時(shí)通常年齡較大，并且生下21三體綜合征孩子的風(fēng)險(xiǎn)大大提高；第二是判

7、斷是否存在母體污染以及污染的程度。有時(shí)，“胎兒材料”完全是母性的；第三，檢查分析的DNA材料中是否有任何混淆。后兩點(diǎn)是產(chǎn)前診斷錯(cuò)誤的主要原因。產(chǎn)前診斷-策略，確定胎兒性別，如果胎兒是男性，應(yīng)分析先證者的遺傳突變或多態(tài)性標(biāo)記，以確定胎兒是否獲得突變等位基因；如果你是女性，你可以停止基因診斷，因?yàn)榕噪s合子通常不會(huì)生病。產(chǎn)前診斷-策略、多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)探針連接多重?cái)U(kuò)增(MLPA)、變性高效液相色譜(DHPLC)、肌營養(yǎng)不良蛋白免疫組織化學(xué)、DMD -產(chǎn)前基因診斷方法，DMD是一種缺失突變，占基因突變的55e%，主要分布在5-末端和中央缺失熱點(diǎn)，當(dāng)在其缺失突變熱點(diǎn)進(jìn)行基因檢測時(shí)

8、，至少有一半的患者可以被檢測到。目前，它是診斷缺失型糖尿病最簡單、最有效的方法，已成為糖尿病/骨密度患者基因診斷和產(chǎn)前基因診斷的首選。此外，該技術(shù)可以根據(jù)缺失外顯子是全編碼還是移位編碼來判斷患者的預(yù)后。產(chǎn)前診斷-缺失突變檢測方法多重聚合酶鏈反應(yīng)可檢測男性缺失患者，對女性攜帶者和非缺失突變患者無效。目前，STR-PCR技術(shù)已成為非缺失型糖尿病家系連鎖分析的首選方法。這種方法在先證者或先證者死亡但攜帶陽性者的家庭中更有價(jià)值，但先證者死亡的零星病例意義不大，是一種概率性診斷。選擇的STR位點(diǎn)越多，分析結(jié)果越可靠。多重PCR和STR多態(tài)性單倍型連鎖分析相結(jié)合是檢測缺失和重復(fù)的理想方法，可以對胎兒進(jìn)行初

9、步的產(chǎn)前基因診斷，但不能檢測新生兒突變引起的散發(fā)性DMD，可以通過其他方法解決。產(chǎn)前診斷是一種非缺失突變檢測方法。MLPA是目前檢測缺失和重復(fù)突變的一種新方法，特別是用于篩選致病突變未知的女性攜帶者的基因突變。它可以綜合分析DMD基因79個(gè)外顯子的缺失或重復(fù)突變，擴(kuò)大了傳統(tǒng)mPCR法檢測缺失的范圍。它簡單高效，但技術(shù)要求高，成本高。產(chǎn)前診斷探針連接多重?cái)U(kuò)增(MLPA)，DHPLC技術(shù)是通過離子對反相液相色譜分析區(qū)分異源雙鏈核酸分子和同源雙鏈核酸分子的DNA片段，并篩選DNA的變化，它不需要放射性同位素和溴化乙錠凝膠，相對高效、經(jīng)濟(jì)、自動(dòng)化程度高。產(chǎn)前診斷變性高效液相色譜(DHPLC)，不同程度抗肌營養(yǎng)不良蛋白的缺乏是DMD的基本病理基礎(chǔ)。因此，在DMD患者或攜帶者中抗肌營