抗菌藥物敏感試驗

1、第四章抗菌藥物敏感性試驗的意義1?？深A測的抗菌治療效果。指導抗菌藥物的臨床應用。發(fā)現(xiàn)或提示細菌耐藥機制，幫助臨床醫(yī)生合理使用抗菌藥物。監(jiān)測細菌的持久性，分析耐藥菌的變化，預防和控制耐藥菌感染的發(fā)生和流行，以及抗菌藥物的敏感性試驗，常用方法：紙片擴散法、微液稀釋法、E-TEST法，原理：將含有定量抗菌藥物的紙片粘貼在接種有試驗菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分并溶解，然后在紙片周圍不斷擴散形成遞減的梯度濃度， 在紙張周圍的抑菌濃度范圍內(nèi)抑制試驗菌的生長，形成一個無菌生長的透明圈，即抑菌圈。 抑菌圈的大小反映了測試細菌對所測定藥物的敏感性，并與藥物對測試細菌的最低抑菌濃度呈負相關?？?/p>

2、比-鮑爾法，操作方法：1 .將56左右的無菌M-H瓊脂倒入直徑90毫米、厚度4毫米的平板中。無菌挑選培養(yǎng)1624小時的血液平板上的45個菌落。3。將其放入無菌生理鹽水中，并在麥克法蘭0.5號試管中校正其濁度。4。將無菌棉簽浸入細菌懸液中，輕輕擠壓試管上壁上的棉簽，擠出多余的細菌液。用棉簽分三個方向均勻擦拭瓊脂表面(每次60次)，使菌液均勻分布，最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。5。蓋上盤子，放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，310分鐘后放在標準的抗生素紙上。6.根據(jù)所選菌株選擇相應的抗菌紙。腸桿菌科：氨芐西林、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢噻肟、環(huán)丙沙星、亞胺培南、氨曲南和慶大霉素；銅綠假單胞菌：頭孢他啶、慶大霉素

3、、哌拉西林、阿米卡星、環(huán)丙沙星、頭孢吡肟和亞胺培南；葡萄球菌：頭孢西丁、青霉素、紅霉素、萬古霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素和利福平；腸球菌：青霉素、萬古霉素、甲氧芐啶/磺胺異惡唑、慶大霉素、環(huán)丙沙星、紅霉素、氨芐西林不動桿菌：頭孢他啶、亞胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢吡肟、頭孢曲松、環(huán)丙沙星和米諾環(huán)素；洋蔥伯克霍爾德菌：頭孢他啶、米諾環(huán)素、甲氧芐啶/磺胺異惡唑、美羅培南；嗜麥芽窄食單胞菌：甲氧芐啶/磺胺異惡唑、左氧氟沙星、米諾環(huán)素；嗜血桿菌：氨芐西林、甲氧芐啶/磺胺異惡唑、頭孢他啶、美羅培南、阿奇霉素、環(huán)丙沙星、頭孢克洛；淋病奈瑟菌：頭孢曲松、環(huán)丙沙星、青霉素、大觀霉素和四環(huán)素；肺炎鏈球

4、菌：紅霉素、苯唑西林、甲氧芐啶/磺胺異惡唑、克林霉素、左氧氟沙星、四環(huán)素、萬古霉素；肺炎鏈球菌以外的鏈球菌：紅霉素、青霉素、克林霉素、萬古霉素、頭孢曲松和左氧氟沙星。7.用無菌鑷子或分紙器將抗菌紙粘貼在M-H瓊脂表面。一旦紙被附上，它就不能被移動；每張抗菌紙的中心距應大于24毫米，紙與板內(nèi)邊緣的距離應大于15毫米，8。孵育351624小時后。根據(jù)clsi(臨床和實驗室標準研究所)標準，取抑菌圈直徑，據(jù)報道細菌對該抗生素敏感、耐藥、耐藥和耐藥。原理：聚乙烯板含有各種稀釋的抗菌藥物。在實驗過程中，加入100升濃度為105 CFU/毫升的細菌溶液，并蓋上蓋板。結果觀察35 1620小時。無細菌沉淀的

5、井底最低抑菌濃度是抗菌劑對細菌的最低抑制濃度，其敏感性和耐藥性用CLSI標準判斷。然后取0.01毫升接種環(huán)，取肉眼觀察的液體進行無菌生長，接種于血瓊脂平板上進行二次培養(yǎng)。在35過夜培養(yǎng)后，觀察到最低抗菌濃度可殺死99.9個最初種植的細菌，這是細菌的最低殺菌濃度(MBC)。微稀釋試驗，操作方法：1?？咕幬锏南♂尯腿诨？咕幬锬敢旱南♂尅?00升不同濃度的抗生素加入到微型聚乙烯微孔板孔中，在不更換吸管的情況下，從低濃度到高濃度加入樣品。4。選擇1824小時的菌落，放入M-H肉湯中富集46小時。5。準備0.5麥克米倫比濁管，然后用133，360，200稀釋，使其最終濃度為105 CFU/毫升。

6、6。用微量取樣器將100升接種到96個孔中，并蓋上蓋子。同時作為陽性和陰性對照。7。手動查看濁度或通過儀器自動解釋濁度。根據(jù)CLSI標準，據(jù)報道細菌對某些抗菌藥物敏感、有耐藥性并具有中間性。原理：E試紙條是一個5毫米50毫米的無孔試劑載體，其一面固定有一系列預先制備好的呈連續(xù)指數(shù)增長濃度的稀釋抗菌藥物，另一面設有讀數(shù)和鑒別刻度?？咕幬锏奶荻瓤梢愿采w20個最低抑菌濃度稀釋濃度的寬度范圍。將測試條放在接種有細菌的瓊脂平板上，孵育過夜后，在測試條周圍清晰可見橢圓形抑菌圈。圓邊與試條相交處的刻度濃度為抗菌藥物抑制細菌的最小抑菌濃度，其敏感性、耐藥性和中介作用按CLSI標準進行判斷。E-TEST，1。

7、選擇殖民地1620小時，2。用無菌生理鹽水配制濁度為0.5麥克米倫濁度管的菌液。3.將無菌棉簽浸入細菌懸液中，輕輕擠壓試管上壁上的棉簽，擠出多余的細菌液。棉簽分三個方向均勻涂抹在瓊脂表面(每次60次)，使菌液均勻分布，最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。4。用鑷子將E-TEST試紙條的抗菌藥物的一面粘貼到瓊脂表面，刻度面朝外，直徑為140毫米的平板上可以放置6條，直徑為90毫米的平板上只能放置12條。5.孵育：35孵育1624小時。孵育后，形成一個橢圓形的抑菌圈，抑菌圈與試紙條相交處的刻度即為抗菌藥物對該細菌的最低抑菌濃度。第九節(jié)細菌的分類和命名一、分類原則：細菌的分類原則上可分為傳統(tǒng)分類和種屬分類。分類

8、方法：(1)人工分類：根據(jù)細菌的形態(tài)、生理生化特征，分為傳統(tǒng)分類和數(shù)值分類；(2)系統(tǒng)分類：根據(jù)細菌大分子物質(zhì)(核酸和蛋白質(zhì))結構的同源程度進行分類，稱為物種分類或自然分類。細菌鑒定和分類的具體方法包括表型分類：根據(jù)細菌的形態(tài)和生理特征進行分類。也就是說，選擇一些穩(wěn)定的生物學性狀，如細菌的形態(tài)結構、染色、培養(yǎng)特性、生化反應、抗原性等作為分類標記，為傳統(tǒng)分類奠定了基礎。分析與分類：利用電泳、色譜、質(zhì)譜等方法，分析了細菌組成、代謝物組成和圖譜的特征，為揭示細菌的表型差異提供了有力的手段?；蛐头诸悾核欠治黾毦z傳物質(zhì)和揭示細菌進化信息的最準確的分類方法。包括DNA堿基組成(G C mol%)、核酸分子雜交(DNA-DNA同源性、DNA-rRNA同源性)和16S rRNA同源性。其中，16S rRNA更為重要，因為它在進化過程中保守穩(wěn)定，很少發(fā)生變化，這是物種分類的重要依據(jù)。世界上最權威的細菌分類系統(tǒng)專著伯杰系統(tǒng)細菌學手冊(1984)和伯杰鑒定細菌學手冊(1994年第9版)反映了細菌種類分類的研究進展。新出版的伯杰系統(tǒng)細菌學手冊(第二版，2004年)已收集了16細菌和生物的分類與：綱、門、綱、屬、種和類型的分類相同。分類：屬，種類型，品系，二，種，類型和植物。種：具有相似生物學特性的種群組成是細菌最重要的分類，差異較大的稱為亞種或變種，菌株