抗菌藥物敏感試驗(yàn)

1、第四章抗菌藥物敏感性試驗(yàn)的意義1?？深A(yù)測(cè)的抗菌治療效果。指導(dǎo)抗菌藥物的臨床應(yīng)用。發(fā)現(xiàn)或提示細(xì)菌耐藥機(jī)制，幫助臨床醫(yī)生合理使用抗菌藥物。監(jiān)測(cè)細(xì)菌的持久性，分析耐藥菌的變化，預(yù)防和控制耐藥菌感染的發(fā)生和流行，以及抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)，常用方法：紙片擴(kuò)散法、微液稀釋法、E-TEST法，原理：將含有定量抗菌藥物的紙片粘貼在接種有試驗(yàn)菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分并溶解，然后在紙片周圍不斷擴(kuò)散形成遞減的梯度濃度， 在紙張周圍的抑菌濃度范圍內(nèi)抑制試驗(yàn)菌的生長(zhǎng)，形成一個(gè)無菌生長(zhǎng)的透明圈，即抑菌圈。 抑菌圈的大小反映了測(cè)試細(xì)菌對(duì)所測(cè)定藥物的敏感性，并與藥物對(duì)測(cè)試細(xì)菌的最低抑菌濃度呈負(fù)相關(guān)?？?/p>

2、比-鮑爾法，操作方法：1 .將56左右的無菌M-H瓊脂倒入直徑90毫米、厚度4毫米的平板中。無菌挑選培養(yǎng)1624小時(shí)的血液平板上的45個(gè)菌落。3。將其放入無菌生理鹽水中，并在麥克法蘭0.5號(hào)試管中校正其濁度。4。將無菌棉簽浸入細(xì)菌懸液中，輕輕擠壓試管上壁上的棉簽，擠出多余的細(xì)菌液。用棉簽分三個(gè)方向均勻擦拭瓊脂表面(每次60次)，使菌液均勻分布，最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。5。蓋上盤子，放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，310分鐘后放在標(biāo)準(zhǔn)的抗生素紙上。6.根據(jù)所選菌株選擇相應(yīng)的抗菌紙。腸桿菌科：氨芐西林、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢噻肟、環(huán)丙沙星、亞胺培南、氨曲南和慶大霉素；銅綠假單胞菌：頭孢他啶、慶大霉素

3、、哌拉西林、阿米卡星、環(huán)丙沙星、頭孢吡肟和亞胺培南；葡萄球菌：頭孢西丁、青霉素、紅霉素、萬古霉素、環(huán)丙沙星、慶大霉素和利福平；腸球菌：青霉素、萬古霉素、甲氧芐啶/磺胺異惡唑、慶大霉素、環(huán)丙沙星、紅霉素、氨芐西林不動(dòng)桿菌：頭孢他啶、亞胺培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢吡肟、頭孢曲松、環(huán)丙沙星和米諾環(huán)素；洋蔥伯克霍爾德菌：頭孢他啶、米諾環(huán)素、甲氧芐啶/磺胺異惡唑、美羅培南；嗜麥芽窄食單胞菌：甲氧芐啶/磺胺異惡唑、左氧氟沙星、米諾環(huán)素；嗜血桿菌：氨芐西林、甲氧芐啶/磺胺異惡唑、頭孢他啶、美羅培南、阿奇霉素、環(huán)丙沙星、頭孢克洛；淋病奈瑟菌：頭孢曲松、環(huán)丙沙星、青霉素、大觀霉素和四環(huán)素；肺炎鏈球

4、菌：紅霉素、苯唑西林、甲氧芐啶/磺胺異惡唑、克林霉素、左氧氟沙星、四環(huán)素、萬古霉素；肺炎鏈球菌以外的鏈球菌：紅霉素、青霉素、克林霉素、萬古霉素、頭孢曲松和左氧氟沙星。7.用無菌鑷子或分紙器將抗菌紙粘貼在M-H瓊脂表面。一旦紙被附上，它就不能被移動(dòng)；每張抗菌紙的中心距應(yīng)大于24毫米，紙與板內(nèi)邊緣的距離應(yīng)大于15毫米，8。孵育351624小時(shí)后。根據(jù)clsi(臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)研究所)標(biāo)準(zhǔn)，取抑菌圈直徑，據(jù)報(bào)道細(xì)菌對(duì)該抗生素敏感、耐藥、耐藥和耐藥。原理：聚乙烯板含有各種稀釋的抗菌藥物。在實(shí)驗(yàn)過程中，加入100升濃度為105 CFU/毫升的細(xì)菌溶液，并蓋上蓋板。結(jié)果觀察35 1620小時(shí)。無細(xì)菌沉淀的

5、井底最低抑菌濃度是抗菌劑對(duì)細(xì)菌的最低抑制濃度，其敏感性和耐藥性用CLSI標(biāo)準(zhǔn)判斷。然后取0.01毫升接種環(huán)，取肉眼觀察的液體進(jìn)行無菌生長(zhǎng)，接種于血瓊脂平板上進(jìn)行二次培養(yǎng)。在35過夜培養(yǎng)后，觀察到最低抗菌濃度可殺死99.9個(gè)最初種植的細(xì)菌，這是細(xì)菌的最低殺菌濃度(MBC)。微稀釋試驗(yàn)，操作方法：1?？咕幬锏南♂尯腿诨？咕幬锬敢旱南♂尅?00升不同濃度的抗生素加入到微型聚乙烯微孔板孔中，在不更換吸管的情況下，從低濃度到高濃度加入樣品。4。選擇1824小時(shí)的菌落，放入M-H肉湯中富集46小時(shí)。5。準(zhǔn)備0.5麥克米倫比濁管，然后用133，360，200稀釋，使其最終濃度為105 CFU/毫升。

6、6。用微量取樣器將100升接種到96個(gè)孔中，并蓋上蓋子。同時(shí)作為陽性和陰性對(duì)照。7。手動(dòng)查看濁度或通過儀器自動(dòng)解釋濁度。根據(jù)CLSI標(biāo)準(zhǔn)，據(jù)報(bào)道細(xì)菌對(duì)某些抗菌藥物敏感、有耐藥性并具有中間性。原理：E試紙條是一個(gè)5毫米50毫米的無孔試劑載體，其一面固定有一系列預(yù)先制備好的呈連續(xù)指數(shù)增長(zhǎng)濃度的稀釋抗菌藥物，另一面設(shè)有讀數(shù)和鑒別刻度。抗菌藥物的梯度可以覆蓋20個(gè)最低抑菌濃度稀釋濃度的寬度范圍。將測(cè)試條放在接種有細(xì)菌的瓊脂平板上，孵育過夜后，在測(cè)試條周圍清晰可見橢圓形抑菌圈。圓邊與試條相交處的刻度濃度為抗菌藥物抑制細(xì)菌的最小抑菌濃度，其敏感性、耐藥性和中介作用按CLSI標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷。E-TEST，1。

7、選擇殖民地1620小時(shí)，2。用無菌生理鹽水配制濁度為0.5麥克米倫濁度管的菌液。3.將無菌棉簽浸入細(xì)菌懸液中，輕輕擠壓試管上壁上的棉簽，擠出多余的細(xì)菌液。棉簽分三個(gè)方向均勻涂抹在瓊脂表面(每次60次)，使菌液均勻分布，最后沿平板內(nèi)緣涂抹一周。4。用鑷子將E-TEST試紙條的抗菌藥物的一面粘貼到瓊脂表面，刻度面朝外，直徑為140毫米的平板上可以放置6條，直徑為90毫米的平板上只能放置12條。5.孵育：35孵育1624小時(shí)。孵育后，形成一個(gè)橢圓形的抑菌圈，抑菌圈與試紙條相交處的刻度即為抗菌藥物對(duì)該細(xì)菌的最低抑菌濃度。第九節(jié)細(xì)菌的分類和命名一、分類原則：細(xì)菌的分類原則上可分為傳統(tǒng)分類和種屬分類。分類

8、方法：(1)人工分類：根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)、生理生化特征，分為傳統(tǒng)分類和數(shù)值分類；(2)系統(tǒng)分類：根據(jù)細(xì)菌大分子物質(zhì)(核酸和蛋白質(zhì))結(jié)構(gòu)的同源程度進(jìn)行分類，稱為物種分類或自然分類。細(xì)菌鑒定和分類的具體方法包括表型分類：根據(jù)細(xì)菌的形態(tài)和生理特征進(jìn)行分類。也就是說，選擇一些穩(wěn)定的生物學(xué)性狀，如細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)、染色、培養(yǎng)特性、生化反應(yīng)、抗原性等作為分類標(biāo)記，為傳統(tǒng)分類奠定了基礎(chǔ)。分析與分類：利用電泳、色譜、質(zhì)譜等方法，分析了細(xì)菌組成、代謝物組成和圖譜的特征，為揭示細(xì)菌的表型差異提供了有力的手段?；蛐头诸悾核欠治黾?xì)菌遺傳物質(zhì)和揭示細(xì)菌進(jìn)化信息的最準(zhǔn)確的分類方法。包括DNA堿基組成(G C mol%)、核酸分子雜交(DNA-DNA同源性、DNA-rRNA同源性)和16S rRNA同源性。其中，16S rRNA更為重要，因?yàn)樗谶M(jìn)化過程中保守穩(wěn)定，很少發(fā)生變化，這是物種分類的重要依據(jù)。世界上最權(quán)威的細(xì)菌分類系統(tǒng)專著伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)(1984)和伯杰鑒定細(xì)菌學(xué)手冊(cè)(1994年第9版)反映了細(xì)菌種類分類的研究進(jìn)展。新出版的伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)(第二版，2004年)已收集了16細(xì)菌和生物的分類與：綱、門、綱、屬、種和類型的分類相同。分類：屬，種類型，品系，二，種，類型和植物。種：具有相似生物學(xué)特性的種群組成是細(xì)菌最重要的分類，差異較大的稱為亞種或變種，菌株