微生物學(xué)檢驗厭氧性細(xì)菌及檢驗.ppt

1、厭氧菌,概念: 是一大群必須在無氧環(huán)境條件下才能生長繁殖的細(xì)菌 特點: 種類多 分布廣 感染可發(fā)生于人體各個部位,厭氧菌特點,厭氧菌感染的臨床及細(xì)菌學(xué)特征,感染發(fā)生于黏膜附近 深部外傷 感染局部有氣體產(chǎn)生 分泌物有惡臭或暗血紅色 某些抗生素治療無效的感染 標(biāo)本直接涂片細(xì)菌染色不均 鏡檢見細(xì)菌,需氧培養(yǎng)無細(xì)菌培養(yǎng),厭氧菌感染的原因,局部形成厭氧微環(huán)境 局部或全身免疫功能下降 菌群失調(diào) 寄居部位發(fā)生改變,厭氧菌標(biāo)本采集與送檢,采集 部位恰當(dāng) 正確采集 避免污染 嚴(yán)格厭氧 及時送檢,運送 針筒運送法 無氧小瓶運送法 標(biāo)本充盈運送法 組織塊運送法 厭氧袋運送法 棉拭運送法,厭氧菌常用培養(yǎng)基,非選擇性培

2、養(yǎng)基 心腦浸液5脫纖維羊血氯化血紅素維生素K 選擇培養(yǎng)基 七葉苷膽汁平板培養(yǎng)脆弱類桿菌 卡那萬古凍溶血瓊脂平板培養(yǎng) FS培養(yǎng)基培養(yǎng)梭桿菌屬 VS培養(yǎng)基培養(yǎng)韋容球菌 CCFA培養(yǎng)基培養(yǎng)艱難梭菌,厭氧菌厭氧培養(yǎng)法,厭氧罐培養(yǎng)法 厭氧器袋法 厭氧手套箱法 皰肉培養(yǎng)法,標(biāo)本,增菌,分離培養(yǎng),挑取菌落,肉眼觀察 染色鏡檢,血標(biāo)本,需氧培養(yǎng),厭氧培養(yǎng),厭氧培養(yǎng),厭氧培養(yǎng),生長,不生長,生長,專性厭氧菌,專性厭氧菌,形態(tài)染色 菌落特征 生化反應(yīng) 藥敏鑒定 氣相色譜,厭氧菌標(biāo)本觀察和涂片鏡檢,肉眼觀察：觀察標(biāo)本的性狀（膿性、帶血、氣味、硫磺樣顆粒、壞死組織等） 涂片染色鏡檢：估計細(xì)菌數(shù)量、觀察細(xì)菌形態(tài)、染色性

3、，以便選擇培養(yǎng)基和培養(yǎng)方法,厭氧菌分離培養(yǎng),初代培養(yǎng)： 厭氧培養(yǎng)48h 次代培養(yǎng)：挑5個以上不同菌落做耐氧試驗，每個菌落接種2個平板，分別進(jìn)行需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)，挑取有氧培養(yǎng)中不生長、厭氧培養(yǎng)生長的菌落進(jìn)行鑒定,厭氧菌鑒定,菌體形態(tài)： 菌落性狀：形狀、色素、熒光、溶血 藥敏鑒定試驗： 卡那霉素：梭桿菌屬多敏感，類桿菌屬多耐藥 聚茴香腦磺酸鈉：快速鑒定厭氧消化鏈球菌 生化反應(yīng) 氣相色譜技術(shù),破傷風(fēng)芽孢梭菌主要性狀,革蘭陽性細(xì)長桿菌，有周鞭毛，芽孢位于菌體頂端，圓形大于菌體，呈“火柴棒狀” 專性厭氧 在血平板上呈擴(kuò)散生長，菌落邊緣不整齊，呈羽毛狀 在皰肉培養(yǎng)基中，肉渣變黑，有腐敗惡臭味,破傷風(fēng)芽孢

4、梭菌臨床意義,致病物質(zhì)： 破傷風(fēng)痙攣毒素，屬神經(jīng)毒素，阻止中樞抑制性神經(jīng)介質(zhì)的釋放，導(dǎo)致骨骼肌強(qiáng)制性痙攣 所致疾病：破傷風(fēng) 感染途徑：傷口 致病條件：傷口內(nèi)形成厭氧微環(huán)境,破傷風(fēng)芽孢梭菌檢查方法,顯微鏡檢查：菌體形態(tài)、芽孢特征 分離培養(yǎng)：厭氧培養(yǎng)，菌落特征 動物實驗： 毒力試驗： 毒素注射小鼠小鼠出現(xiàn)癥狀 保護(hù)試驗： 毒素抗毒素注射小鼠小鼠無癥狀,產(chǎn)氣莢膜梭菌形態(tài)與培養(yǎng),革蘭陽性粗大桿菌，有莢膜，芽孢位于菌體中央或次級端，小于菌體，無鞭毛 專性厭氧 血平板菌落特征：圓形、凸起、光滑、濕潤，雙層溶血環(huán) 卵黃瓊脂平板：Nagler反應(yīng) 牛乳培養(yǎng)基：“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象 生化反應(yīng)：生化反應(yīng)活潑，分解多種

5、糖,產(chǎn)氣莢膜梭菌臨床意義,致病物質(zhì)：莢膜、多種毒素和侵襲性酶 所致疾?。?氣性壞疽 食物中毒 壞死性腸炎,產(chǎn)氣莢膜梭菌檢查方法,標(biāo)本涂片染色鏡檢：觀察形態(tài)、染色性、莢膜 分離培養(yǎng)：注意觀察雙圈溶血環(huán) 生化反應(yīng)：洶涌發(fā)酵現(xiàn)象 動物實驗： 培養(yǎng)物小鼠腹腔注射處死小鼠培養(yǎng)解剖小鼠肉眼觀察泡沫肝涂片染色鏡檢,肉毒梭菌形態(tài)與培養(yǎng),革蘭陽性粗大桿菌，有鞭毛，芽孢位于菌體次級端，大于菌體，呈“網(wǎng)球拍狀”無莢膜 專性厭氧 菌落大而不規(guī)則；消化肉渣，肉渣變黑，有腐敗惡臭,肉毒梭菌臨床意義,致病物質(zhì)：肉毒毒素，為神經(jīng)毒素，引起肌肉馳緩型麻痹。 毒素分為8個型別，我國以A型最多見 所致疾病 肉毒食物中毒 嬰兒肉毒病

6、,肉毒梭菌檢驗程序,標(biāo)本,分離培養(yǎng),可疑菌落,毒素測定,皰肉培養(yǎng),革蘭染色,生化反應(yīng),毒素測定,肉毒梭菌檢驗方法,標(biāo)本采集：可疑食物、嘔吐物等 分離培養(yǎng)：皰肉培養(yǎng)、分離培養(yǎng) 毒素測定 毒素定性檢驗： 毒素注射小鼠小鼠出現(xiàn)癥狀 毒素抗毒素注射小鼠小鼠無癥狀 毒素型別鑒定： 鑒定依據(jù)：形態(tài)、芽孢特征、皰肉培養(yǎng)物、肉毒毒素,艱難梭菌,革蘭陽性粗大桿菌、芽孢位于菌體次級端，無莢膜 嚴(yán)格厭氧 在果糖卵黃瓊脂平板上形成粗糙的黃色菌落 脂酶、卵磷脂酶 人和動物腸道中的正常菌群 腸道菌群失調(diào)時可引起偽膜性腸炎 糞便標(biāo)本直接涂片檢查見優(yōu)勢生長的革蘭陽性粗大桿菌并有芽孢，具有診斷價值,革蘭陰性無芽孢厭氧菌,類桿菌

7、屬 腸道和女性生殖道主要菌群 臨床最重要的無芽孢厭氧菌 普雷沃菌屬 卟啉單胞菌屬 梭桿菌屬：菌體細(xì)長，兩端尖細(xì)，中間膨大，革蘭染色可見菌體中有紫色顆粒,革蘭陽性無芽孢厭氧菌,丙酸桿菌屬 痤瘡丙酸桿菌寄居人和動物皮膚、皮脂腺等部位，與痤瘡有關(guān) 優(yōu)桿菌屬 乳桿菌屬：女性生殖道主要正常菌群 雙歧桿菌屬：人和動物腸道中重要的正常菌群，對維持人體內(nèi)微生態(tài)平衡發(fā)揮重要作用,厭氧性球菌,消化球菌屬：革蘭陽性球菌 消化鏈球菌屬：革蘭陽性球菌 韋榮球菌屬：革蘭陰性球菌,測驗1,正常人腸道中數(shù)量最多的細(xì)菌是 A 大腸埃希菌 B 乳酸桿菌 C 糞腸球菌 D 無芽孢厭氧菌 E 芽孢厭氧菌,測驗2,在無芽孢厭氧菌感染中

8、，臨床標(biāo)本檢出陽性率最高的是： A 脆弱類桿菌 B 雙歧桿菌 C 丙酸桿菌 D 梭形桿菌 E 消化鏈球菌,測驗3,下列對厭氧要求不嚴(yán)格的細(xì)菌是 A 雙歧桿菌 B 產(chǎn)氣莢膜梭菌 C 破傷風(fēng)梭菌 D 艱難梭菌 E 產(chǎn)黑色素類普雷沃菌,測驗4,下列哪種細(xì)菌是條件致病菌 A 脆弱類桿菌 B 淋病奈瑟菌 C 溶血性鏈球菌 D 腸產(chǎn)毒素性大腸桿菌 E 乙型副傷寒沙門菌,測驗5,在牛乳培養(yǎng)基產(chǎn)生“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象的是 A 破傷風(fēng)梭菌 B 產(chǎn)氣莢膜梭菌 C 肉毒梭菌 D 艱難梭菌 E 諾維梭菌,測驗6,關(guān)于艱難梭菌特點錯誤的是 A 革蘭陽性粗大桿菌 B 為腸道內(nèi)正常菌群 C 在組織和培養(yǎng)時不易形成芽孢 D 是偽

9、膜性腸炎最常見的病原菌 E 所致疾病與長期使用抗生素有關(guān),測驗7,菌體細(xì)長，兩端尖細(xì)，中間膨大，菌體中常有紫色顆粒（革蘭染色），可能的細(xì)菌是 A 產(chǎn)氣莢膜梭菌 B 具核梭桿菌 C 放線菌 D 雙歧桿菌 E 脆弱類桿菌,Nagler反應(yīng),在卵黃瓊脂平上，產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生的卵磷脂酶分解卵磷脂，菌落周圍出現(xiàn)白色混濁圈；若培養(yǎng)基中加入相應(yīng)抗體，則不出現(xiàn)混濁。此現(xiàn)象成為Nagler反應(yīng)。,“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象,產(chǎn)氣莢膜梭菌在牛乳培養(yǎng)基中分解乳糖產(chǎn)酸使酪蛋白凝固，同時產(chǎn)生的大量氣體使凝固的酪蛋白沖成蜂窩狀，氣勢兇猛，成為“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象。,破傷風(fēng)梭菌,雙圈溶血環(huán),產(chǎn)氣莢膜梭菌革蘭染色,肉毒梭菌革蘭染色,氣性壞

10、疽,破傷風(fēng),支 原 體,概念：支原體是一類缺乏細(xì)胞壁、形態(tài)上呈高度多形性、可通過濾菌器，并能在無生命培養(yǎng)基中生長繁殖的最小的原核細(xì)胞型微生物。,形態(tài)染色,無細(xì)胞壁，能通過濾菌器 高度多形性 革蘭陰性，不易著色 常用吉姆薩染色，呈淡紫色,培養(yǎng)特性,細(xì)胞膜含膽固醇 營養(yǎng)要求高 二分裂繁殖為主 生長緩慢 “荷包蛋”樣菌落,生化反應(yīng),分解葡萄糖糖：生殖道支原體、肺炎支原體 不分解葡萄糖、利用精氨酸：人型支原體、口腔支原體等,肺炎支原體,其頂端結(jié)構(gòu)能黏附宿主上皮細(xì)胞 從宿主細(xì)胞膜獲取營養(yǎng)，并產(chǎn)生有毒代謝產(chǎn)物，或引起超敏反應(yīng)，使細(xì)胞損傷 多經(jīng)呼吸道感染 引起原發(fā)性非典型性肺炎,泌尿生殖道感染支原體,種類：

11、 人型支原體、生殖道支原體、溶脲脲原體 傳播途徑： 性傳播 垂直傳播 所致疾?。?非淋病性尿道炎 早產(chǎn)、流產(chǎn),微生物學(xué)檢查,分離培養(yǎng)：菌落特征、形態(tài)觀察、生化反應(yīng) 冷凝集試驗：檢測冷凝集素 PCR技術(shù)：采用基因擴(kuò)增技術(shù)檢測支原體的DNA,支原體與細(xì)菌的區(qū)別,立克次體,立克次體是一類嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞型微生物。 是引起斑疹傷寒、恙蟲病、Q熱的病原體。,立克次體共同特點,大小介于細(xì)菌和病毒之間，革蘭染色陰性，多呈球桿狀 專性細(xì)胞內(nèi)寄生 以節(jié)肢動物為傳播媒介 多引起人畜共患病 對抗生素敏感,生物學(xué)特性,形態(tài)染色：球桿狀、常用Giemsa染色，在感染的細(xì)胞中排列不規(guī)則 培養(yǎng)方法：動物接種、雞胚接

12、種、細(xì)胞培養(yǎng) 抗原構(gòu)造：與變形桿菌OX菌株有共同抗原（用于外斐反應(yīng)）,致 病 性,致病物質(zhì) 內(nèi)毒素：與細(xì)菌內(nèi)毒素毒性作用相似 磷脂酶A :溶解宿主細(xì)胞膜和溶酶體膜 致病機(jī)制:侵犯小血管內(nèi)皮細(xì)胞，,節(jié)肢動物叮咬,侵犯小血管 內(nèi)皮細(xì)胞,第一次菌血癥,侵犯全身 小血管內(nèi)皮細(xì)胞,第二次菌血癥,高熱 頭痛 皮疹,所 致 疾 病,普氏立克次體,所致疾?。毫餍行园哒顐?傳染源：病人 傳播媒介：人虱 傳播方式：,人虱,人虱,人,人,流行性斑疹傷寒傳播方式,所致疾?。旱胤叫园哒顐?傳染源：鼠等 傳播媒介：鼠蚤 傳播方式：,莫氏立克次體,鼠,鼠,鼠蚤,鼠蚤,人,地方性斑疹傷寒傳播方式,鼠虱,免疫性,以細(xì)胞免疫

13、為主 病后免疫力牢固,微生物學(xué)檢查,標(biāo)本采集：血液 分離培養(yǎng): 接種豚鼠 血清學(xué)試驗：外斐反應(yīng),衣原體,是一類能通過細(xì)菌濾器、嚴(yán)格的細(xì)胞內(nèi)寄生、有獨特發(fā)育周期的原核細(xì)胞型微生物。,衣原體共同特征,革蘭陰性、圓形或橢圓形 有細(xì)胞壁 有獨特的發(fā)育周期，二分裂繁殖 細(xì)胞內(nèi)寄生 對抗生素敏感 種類：,沙眼衣原體 肺炎衣原體 鸚鵡熱衣原體,生物學(xué)特性,形態(tài)染色與發(fā)育周期： 原體（感染型） 始體（繁殖型） 培養(yǎng)特性： 專性細(xì)胞內(nèi)寄生 雞胚卵黃囊接種,致病性與免疫性,致病物質(zhì) 內(nèi)毒素 、外膜蛋白 所致疾病 沙眼 包涵體性結(jié)膜炎 非淋病性泌尿生殖道感染 性病淋巴肉芽腫 呼吸道感染 免疫性：病后免疫力不牢固,微

14、生物學(xué)檢查,直接鏡檢: 結(jié)膜病灶刮片Giemsa染色，查包涵體 免疫熒光染色查衣原體 碘液 分離培養(yǎng) 雞胚卵黃囊接種 核酸檢測,螺旋體,是一類細(xì)長、柔軟、彎曲呈螺旋狀、運動活潑的原核細(xì)胞型微生物。 種類： 鉤端螺旋體 疏螺旋體 密螺旋體,特 征,有細(xì)胞壁 有DNA 和RNA 以二分裂方式繁殖 對抗生素敏感,鉤端螺旋體,引起鉤端螺旋體病,生物學(xué)性狀,形態(tài)染色 細(xì)長、螺旋細(xì)密、兩端彎曲如鉤 常用Fontana鍍銀染色，染成棕褐色 運動活潑 培養(yǎng)：適宜溫度2830，常用柯氏培養(yǎng)基，生長緩慢 抵抗力：一般，對青霉素敏感，在水中存活時間長,致病性,致病物質(zhì)： 溶血素、細(xì)胞毒因子、內(nèi)毒素樣物質(zhì) 所致疾病：

15、 鉤端螺旋體病人畜共患疾病 傳染源：鼠類、豬 傳播途徑：經(jīng)粘膜或破損皮膚 經(jīng)胎盤傳播,臨床特征: 鉤體血癥：“眼紅腿疼淋巴大；寒熱酸痛一身乏” 臨床類型： 流感傷寒型 黃膽出血型 肺出血型 腎功衰竭型等,免疫性,病后對同型鉤體有牢固免疫力 以體液免疫抗感染為主,尿、血標(biāo)本,鏡檢,分離培養(yǎng),血清學(xué)鑒定,動物試驗,檢測核酸,微生物學(xué)檢查,微生物學(xué)檢查,血清學(xué)診斷 檢測特異性抗體,顯微鏡凝集溶解試驗,酶聯(lián)免疫吸附試驗,防治原則,防鼠、滅鼠，加強(qiáng)對帶菌家畜的管理 流行地區(qū)易感人群接種疫苗 治療首選青霉素,梅毒螺旋體,是引起梅毒的病原體 梅毒屬性傳播疾病,生物學(xué)性狀,形態(tài)染色:兩端尖直、螺旋細(xì)密規(guī)則、運

16、動活潑 培養(yǎng)特性：不易人工培養(yǎng) 抗原性： 特異性抗原:刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性凝集抗體 復(fù)合抗原：刺激機(jī)體產(chǎn)生梅毒反應(yīng)素 抵抗力:極弱，對青霉素、四環(huán)素等敏感,致病性,致病物質(zhì)：莢膜樣物質(zhì)、粘多糖酶 所致疾病梅毒 后天梅毒經(jīng)性接觸傳染 臨床分期 一期梅毒：外生殖器硬性下疳 二期梅毒：全身梅毒疹 三期梅毒：皮膚粘膜潰瘍、侵犯內(nèi)臟器官或組織 先天梅毒經(jīng)胎盤傳給胎兒 胎兒表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎 出生后表現(xiàn)為鋸齒形牙、鞍形鼻等,免疫性,以細(xì)胞免疫為主 抗磷脂抗體（梅毒反應(yīng)素）對機(jī)體無保護(hù)作用，僅供血清學(xué)試驗。,微生物學(xué)檢查,硬性下疳、梅毒疹 滲出液,鏡檢梅毒螺旋體,血清標(biāo)本,非特異性試驗,查梅毒反應(yīng)素,特異性試驗,測定梅毒螺旋體 特異性抗體,防治原則,加強(qiáng)性衛(wèi)生教育和嚴(yán)格社會管理。 梅毒確診后