核苷酸酶的檢測和臨床意義

1、5-核苷酸酶(5-NT)的檢測和臨床意義,1,PPT學(xué)習(xí)交流,一.定義,5-核苷酸酶全稱5-核糖核苷酸磷酸水解酶（5-Nucleoticlase, 5-NU或5-NT）。5-核苷酸酶(5-NT)是一種對底物特異性不高的水解酶，可作用于多種核苷酸。主要參與核酸的分解代謝。能特異性的催化核苷5-核苷酸酶和次黃嘌呤核苷酸。,2,PPT學(xué)習(xí)交流,5-NT在人體的運動，細胞生長發(fā)育，纖維蛋白合成，提高表皮或內(nèi)皮屏障功能，神經(jīng)傳遞及淋巴細胞的再循環(huán)及黏附，免疫應(yīng)答等方面均發(fā)揮重要的作用。,3,PPT學(xué)習(xí)交流,廣泛分布在肝、膽、胰、腸、心、腦、肺、腎、垂體、甲狀腺、前列腺、睪丸等臟器和組織中，定位在細胞膜上

2、，肝膽系統(tǒng)是血清中5-核苷酸酶的主要來源。在肝內(nèi)主要存在于膽小管和竇狀間隙內(nèi)。,二.來源和去路,4,PPT學(xué)習(xí)交流,5-NT要釋放入血必須要經(jīng)肝膽系統(tǒng)內(nèi)的高濃度膽汁酸去垢處理,5,PPT學(xué)習(xí)交流,三.檢測方法,鉬藍比色法 化學(xué)發(fā)光法 酶法 偶聯(lián)速率法,6,PPT學(xué)習(xí)交流,四.實驗原理,5-核苷酸酶（5-NT）催化5-次黃嘌呤核苷酸水解生成次黃苷和氨，次黃苷在嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）作用下生成次黃嘌呤，次黃嘌呤在黃嘌呤氧化酶（XOD）作用下生成尿酸和過氧化氫（H2O2），H2O2與4-氨基安替比林（4-AA）和TOOS在過氧化物酶（POD）作用下生成醌亞氨化合物，通過測定相應(yīng)波長處吸光度變化值

3、得出樣本中5-NT活性。,7,PPT學(xué)習(xí)交流,五.標(biāo)本的采集及保存,1細胞培養(yǎng)物：離心后收集上清液，并將標(biāo)本保存于-20。2血清：室溫放置2小時內(nèi)或2 - 8 24H，1000 x g離心20分鐘。3血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于1000 x g離心15分鐘。 4.2 - 8 可放置24小時， -20可放置一星期，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進行此項檢測。,8,PPT學(xué)習(xí)交流,六.參考范圍,速率法：正常成人血清5-NT酶活性為：0-11U/L 鉬藍雙色法：健康成年人5-NT活性為2-17U/L，兒童稍低。60歲以上老人的均值約為青

4、壯年的2倍。,9,PPT學(xué)習(xí)交流,七.臨床意義, 5-NT活性增高常見于原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肝癌、膽道癌、胰腺癌、膽道阻塞、膽管炎、急、慢性肝炎、肝硬化、藥物性肝損傷。其活性增高可達26倍，且與病情嚴重程度呈正相關(guān)。 5-NT是診斷肝腫瘤非常靈敏的酶學(xué)指標(biāo)。在病變早期，當(dāng)肝功能、肝掃描和有關(guān)肝病檢查陰性時本酶活性已明顯增高。對于AFP陰性病例，其與AFP互補診斷肝癌的陽性率可達94。,10,PPT學(xué)習(xí)交流, 特異性高，能協(xié)助判斷堿性磷酸酶（ALP）增設(shè)是肝膽系統(tǒng)疾病，還是骨髓系統(tǒng)疾?。ㄈ绻前?、骨肉瘤、骨轉(zhuǎn)移癌、佝僂病等）。ALP在肝膽系統(tǒng)疾病和骨骼系統(tǒng)疾病時均可增高。除5-NT除肝膽系統(tǒng)疾病增高外，骨骼系統(tǒng)疾病一般均不升高。,11,PPT學(xué)習(xí)交流, 有助于鑒別診斷肝細胞性黃疸和阻塞性黃疸。后者5-NT明顯高于前者。 5-NT已作為肝功能常規(guī)項目檢查進入臨床，將能使臨床醫(yī)生更全面地了解患者肝臟情況，提高其臨床應(yīng)用價值。,12