食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑迷迭香提取物征求意見稿

1、中 華 人 民 共 和 國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì) 發(fā)布中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部 發(fā)布gb 中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)201-實(shí)施201-發(fā)布食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑 迷迭香提取物（征求意見稿）食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑 迷迭香提取物1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于以迷迭香（rosmarinus officinalis l.）的莖、葉為原料，經(jīng)有機(jī)溶劑或超臨界二氧化碳萃取、精制等工藝生產(chǎn)的食品添加劑迷迭香提取物。2 技術(shù)要求2.1 感官要求感官要求應(yīng)符合表1的規(guī)定。表1 感官要求項(xiàng) 目要 求檢驗(yàn)方法狀態(tài)粉末或液體取適量試樣置于清潔、干燥的白瓷盤或燒杯中，在自然光線下觀察其狀態(tài)。2.2 理化指標(biāo)理化指標(biāo)應(yīng)符合表2

2、的規(guī)定。項(xiàng) 目指 標(biāo)檢驗(yàn)方法脂溶性水溶性總抗氧化成分（以鼠尾草酸和鼠尾草酚計(jì)），w/%10.0附錄a中a.2迷迭香酸，w/%5.0附錄a中a.3水分a，w/%5.0gb 5009.3蒸餾法或卡爾費(fèi)休法灰分，w/%3.0gb 5009.4鉛（pb）/（mg/kg）2gb 5009.75砷（as）/（mg/kg）3gb 5009.76殘留溶劑正己烷/（mg/kg） 甲醇/（mg/kg）2550附錄a中a.4a 僅針對(duì)水溶性粉末產(chǎn)品。注1：商品化的迷迭香提取物產(chǎn)品應(yīng)以符合本標(biāo)準(zhǔn)的迷迭香提取物為原料，可添加用于加工、貯存、標(biāo)準(zhǔn)化、溶解等工藝目的食用植物油和（或）符合食品添加劑質(zhì)量規(guī)格要求的乳化劑、抗結(jié)

3、劑等。注2：提取溶劑為甲醇、乙醇、丙酮和（或）正己烷。表2 理化指標(biāo)附錄a檢驗(yàn)方法 a.1 一般規(guī)定本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑和水在未注明其他要求時(shí)，均指分析純?cè)噭┖蚲b/t 6682規(guī)定的三級(jí)水。試驗(yàn)中所用標(biāo)準(zhǔn)溶液、雜質(zhì)測(cè)定用標(biāo)準(zhǔn)溶液、制劑和制品在未注明其他要求時(shí)，均按gb/t 601、 gb/t 602、 gb/t 603的規(guī)定制備。試驗(yàn)中所用溶液在未注明用何種溶劑配制時(shí)，均指水溶液。a.2 總抗氧化成分（以鼠尾草酸和鼠尾草酚計(jì)）的測(cè)定a.2.1 方法提要脂溶性迷迭香提取物中的主要抗氧化成分（鼠尾草酸和鼠尾草酚）在280 nm檢測(cè)波長(zhǎng)下有最大吸收峰，根據(jù)鼠尾草酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度和相應(yīng)的峰面積，可得出鼠尾草酸

4、的標(biāo)準(zhǔn)曲線公式，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線由試樣峰面積得到對(duì)應(yīng)的試樣溶液濃度。同時(shí)，由于在280 nm下，同濃度的鼠尾草酚的峰面積是鼠尾草酸的1.36倍。因此可以根據(jù)鼠尾草酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到鼠尾草酚的濃度。a.2.2 試劑和材料a.2.2.1 丙酮。a.2.2.2 乙腈。a.2.2.3 鼠尾草酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度98%。a.2.2.4 磷酸溶液：85%。a.2.3 儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器。a.2.4 參考色譜條件a.2.4.1 色譜柱：c18反相色譜柱（4.6 mm250 mm，5 m）；或其它等效的色譜柱。 a.2.4.2 流動(dòng)相a：水+0.1%磷酸溶液。 a.2.4.3 流動(dòng)相b：乙腈+

5、0.1%磷酸溶液。a.2.4.4 柱溫：30 。a.2.4.5 檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。a.2.4.6 流動(dòng)相流速：1.0 ml/min。a.2.4.7 進(jìn)樣量：10 l。a.2.4.8 梯度洗脫條件：見表a.1。表a.1 梯度洗脫條件時(shí)間（min）流動(dòng)相 a%流動(dòng)相 b%流速（ml/min）0.077231.01.077231.025.001001.030.001001.030.577231.035.077231.0a.2.5 分析步驟a.2.5.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線以丙酮溶解鼠尾草酸標(biāo)準(zhǔn)品，配制混合梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液，使鼠尾草酸濃度梯度在0.010 mg/ml1.000 mg/ml。在a.2.4參考

6、色譜條件下，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣一次。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性關(guān)系應(yīng)達(dá)到r2 0.99。記錄標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性公式y(tǒng) = ac + b。其中，c是鼠尾草酸的濃度，y是這個(gè)濃度對(duì)應(yīng)的峰面積，a和b分別為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率和截距。a.2.5.2 試樣溶液的制備稱取試樣140 mg 180 mg（精確至0.0001 g），溶于20 ml丙酮，定容至25 ml容量瓶中，充分混勻后經(jīng)0.22 m微孔濾膜過(guò)濾。a.2.5.3 測(cè)定在a.2.4參考色譜條件下，對(duì)試樣液進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣一次。參考附錄b中圖b.1迷迭香提取物色譜圖中鼠尾草酸和鼠尾草酚的相對(duì)位置確定出兩者的響應(yīng)峰，并且記錄兩

7、者的峰面積y1和y2。a.2.6 結(jié)果計(jì)算a.2.6.1 鼠尾草酸的濃度c1試樣溶液中鼠尾草酸的濃度c1以毫克每毫升（mg/ml）計(jì)，按式（a.1）計(jì)算：（a.1） 式中：y1試樣溶液中的鼠尾草酸的峰面積；a 鼠尾草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線公式中的斜率；b 鼠尾草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線公式中的截距。a.2.6.2 鼠尾草酚的濃度c2試樣溶液中鼠尾草酚的濃度c2以毫克每毫升（mg/ml）計(jì)，按式（a.2）計(jì)算：（a.2）式中：y2試樣溶液中的鼠尾草酚的峰面積；a 鼠尾草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線公式中的斜率；b 鼠尾草酸標(biāo)準(zhǔn)曲線公式中的截距；1.36在280 nm下，同濃度的鼠尾草酚的峰面積是鼠尾草酸的1.36倍。a.2.6.3 總抗氧

8、化成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)wi總抗氧化成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1以鼠尾草酸和鼠尾草酚計(jì)，按式（a.3）計(jì)算：（a.3）式中：c1試樣溶液中鼠尾草酸的濃度，單位為毫克每毫升（mg/ml）；c2試樣溶液中鼠尾草酚的濃度，單位為毫克每毫升（mg/ml）；v試樣定容體積，單位為毫升（ml）；m試樣的質(zhì)量，單位為毫克（mg）。試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于5 %。a.3 迷迭香酸的測(cè)定a.3.1 方法提要水溶性迷迭香提取物用甲醇溶解，以甲醇磷酸溶液為流動(dòng)相，用以ods為填料的液相色譜柱和紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器，對(duì)試樣中的迷迭香酸進(jìn)行反相高效液相色譜分離和

9、測(cè)定，與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間比較定性，峰面積外標(biāo)法定量。a.3.2 試劑和材料a.3.2.1 甲醇。a.3.2.2 迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度98%。a.3.2.3 磷酸溶液：0.5 ml磷酸加入100 ml水。a.3.2.4 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至0.0001 g），用2 ml甲醇溶解并用蒸餾水定容至10 ml，混勻，置冰箱中保存。此溶液1 ml含迷迭香酸1.0 mg。a.3.3 儀器和設(shè)備高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。a.3.4 參考色譜條件a.3.4.1 色譜柱：以ods為填充物的色譜柱（4.6 mm250 mm，5 m）；或其它等效的色譜柱。a.3

10、.4.2 流動(dòng)相：甲醇:磷酸溶液=45:55；a.3.4.3 流速：0.6 ml/min；a.3.4.4 柱溫：40c；a.3.4.5 檢測(cè)波長(zhǎng)：283 nm；a.3.4.6 保留時(shí)間：18 min。a.3.5 分析步驟a.3.5.1 試樣溶液的制備準(zhǔn)確稱取試樣200 mg（精確至0.0001 g），用水溶解并定容至100 ml， 經(jīng)0.45 m微孔濾膜過(guò)濾，即得試樣溶液。a.3.5.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0, 2.5 l, 5 l, 10 l, 15 l, 20 l，在規(guī)定色譜條件下，進(jìn)行色譜分析，根據(jù)迷迭香酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的不同進(jìn)樣量及相應(yīng)色譜峰面積，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)，迷迭香酸

11、含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。a.3.5.3 測(cè)定準(zhǔn)確吸取試樣溶液10 l，在規(guī)定色譜條件下，進(jìn)行色譜分析，以保留時(shí)間定性，峰面積外標(biāo)法定量。a.3.6 結(jié)果計(jì)算試樣中迷迭香酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w2，按公式（a.4）計(jì)算：（a.4）式中：c由標(biāo)準(zhǔn)曲得出的試樣溶液中迷迭香酸的濃度，單位為微克每毫升（g/ml）； v試樣溶液定容體積，單位為毫升（ml）； m試樣的質(zhì)量，單位為克（mg）；1000質(zhì)量換算系數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果以平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值為準(zhǔn)。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不大于算術(shù)平均值的2.5 %。a.4 殘留溶劑（正己烷、甲醇）的測(cè)定 a.4.1 試劑和材料a.4.1.1 gb/t

12、 6682規(guī)定的一級(jí)水。a.4.1.2 氯化鈉溶液：10 g氯化鈉溶解于100 ml水中。a.4.1.3 待測(cè)組分標(biāo)準(zhǔn)品：正己烷和甲醇，色譜純。a.4.1.4 內(nèi)標(biāo)溶液：160 g/g正丙醇溶液。a.4.2 儀器和設(shè)備氣相色譜儀：配備氫火焰離子檢測(cè)器（fid）和頂空進(jìn)樣器。a.4.3 參考色譜條件a.4.3.1 色譜柱：石英毛細(xì)管柱（ 0.15 m15 m），涂層為6%氰丙基苯基和94%二甲基聚硅氧烷，涂層厚度為0.84 m?；蛲刃阅艿纳V柱。a.4.3.2 載氣：氦氣。a.4.3.3 載氣流速：0.8 ml/min。a.4.3.4 柱溫：40 保持5 min，以25 /min升溫至250

13、，保持6 min。a.4.3.5 進(jìn)樣口溫度：250 。a.4.3.6 檢測(cè)器溫度：300 。a.4.3.7 進(jìn)樣量：1.0 ml。a.4.4 參考頂空進(jìn)樣條件a.4.4.1 試樣加熱溫度：90 。a.4.4.2 試樣加熱時(shí)間：10 min。a.4.4.3 試樣攪拌轉(zhuǎn)速：400 rpm。a.4.4.4 分流比：1:50a.4.4.5 注射器溫度：120 。a.4.4.6 壓射速度：1 ml/sa.4.5 分析步驟a.4.5.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的制備用待測(cè)組分標(biāo)準(zhǔn)品（正己烷和甲醇），分別制備260 g/g的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。a.4.5.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的制備按表a.2稱取葵花籽油，加入標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液、氯化鈉溶

14、液和內(nèi)標(biāo)溶液，制備標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，分別注入20 ml進(jìn)樣瓶中。表a.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的制備方法葵花籽油/mg標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液/mg氯化鈉溶液/mg內(nèi)標(biāo)溶液/mg2505027001000250100265010002502002550100025050022501000250100017501000a.4.5.3 試樣溶液的制備稱取0.25 g試樣（精確至0.0001 g），加入氯化鈉溶液2750 mg和內(nèi)標(biāo)溶液1000 mg，注入20 ml進(jìn)樣瓶中。a.4.5.4 測(cè)定在a.4.3和a.4.4參考操作條件下，分別對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液系列和試樣溶液進(jìn)行色譜分析。a.4.6 結(jié)果計(jì)算a.4.6.1 平均響應(yīng)因子fi標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均響應(yīng)因子f，按式（a.5）計(jì)算：（a.5）式中：cs每一標(biāo)準(zhǔn)溶液中溶劑的濃度，單位為微克每克（g/g）；ci每一標(biāo)準(zhǔn)溶液中正丙醇（內(nèi)標(biāo)物）的濃度，單位為微克每克（g/g）；ri每一標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖中正丙醇（內(nèi)標(biāo)物）的峰面積值；rs每一標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖中溶劑的峰面積值；5標(biāo)準(zhǔn)溶液系列數(shù)。a.4.6.2 待測(cè)組分含量wi試樣中待測(cè)組分含量wi以毫克每千克（mg/kg）計(jì)，按式（a.6）計(jì)算：（a.6）式中：ru試樣溶液色譜圖中溶劑的峰面積值；r0試樣溶液色譜