適宜技術(shù)應(yīng)對(duì)結(jié)核感染

1、1，1 .結(jié)核病背景資料2 .結(jié)核病病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室診斷3 .體外r-干擾素釋放試驗(yàn)4 .小結(jié)2 .背景結(jié)核病流行現(xiàn)狀全球三分之一(20億)感染結(jié)核菌中國肺結(jié)核患者達(dá)50億人潛伏感染、復(fù)發(fā)、細(xì)菌向人體復(fù)制、播種disseminn 發(fā)作Onset、康復(fù)恢復(fù)、時(shí)間表、診斷診斷、治療Treatment新型抗結(jié)核藥物(50% )、新型快速診斷技術(shù)(40% )、新型結(jié)核疫苗(10% )、JID 2012:205 (Suppl 2)、S147 . 1882年，德國細(xì)菌學(xué)家科霍(Robert Koch )證實(shí)結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核的病原菌。 本菌可侵犯全身各組織器官，但肺部感染最多。 在微生物分類上，結(jié)核分枝桿菌屬

2、于放線菌門、放線菌綱、放線菌目、分枝桿菌科、分枝桿菌屬分枝桿菌復(fù)合群的有人型、牛型、非洲型和田鼠型，人型結(jié)核分枝桿菌是人的主要病原菌。 (2)結(jié)核菌無內(nèi)毒素和外毒素，也不產(chǎn)生侵襲性酶，其致病性主要與細(xì)胞壁含有大量脂質(zhì)有關(guān)。 主要是磷脂：刺激單核細(xì)胞增殖，結(jié)核結(jié)節(jié)與干酪樣壞死形成相關(guān)的分枝菌酸：與抗酸染色性相關(guān)的索狀因子：破壞細(xì)胞線粒體膜，慢性肉芽腫形成相關(guān)的硫酸腦苷酯：抑制食溶體形成，具有抗蝕作用蠟質(zhì)d，刺激生物體的延遲型超敏反應(yīng)(3)結(jié)核菌主要引起細(xì)胞免疫反應(yīng)，屬于傳染性免疫，7，背景結(jié)核患者發(fā)現(xiàn)，癥狀：肺結(jié)核可疑癥狀者，主要有咳嗽、咳痰2周以上者，或有咯血癥狀者發(fā)現(xiàn)方式：原因病的就診、轉(zhuǎn)診

3、和原因病的推薦是發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核患者的主要方式. 背景-結(jié)核實(shí)驗(yàn)室的任務(wù)provideearlyandaccuratediagnosis早期提供正確的診斷initiationofrighttreatmentandinterventionearly制定正確的治療方案， 早期介入monitoringtherapyefficacyinapromp的t manner的快速監(jiān)測(cè)療效treatmentanddiagnosiscompanionintuberculosisdrugdevelopment與抗結(jié)核藥的開發(fā)同時(shí)、10、結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室的診斷技術(shù)概要、1 .結(jié)核抗體2 .結(jié)核蛋白芯片3 .體外r-干擾素試驗(yàn)4

4、 .結(jié)核桿菌分泌抗原、1 .涂片2 .培養(yǎng)3 .藥敏4 .菌型鑒定、細(xì)菌學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)，其他1.HPLC 2. 結(jié)核分枝桿菌形態(tài)學(xué)檢查，1 .直接涂抹法2 .離心切片法，1 .抗酸染色2 .熒光染色，1 .普通顯微鏡2 .熒光顯微鏡3 .自動(dòng)讀影技術(shù)，結(jié)核菌形態(tài)學(xué)檢查-離心切片技術(shù)，2015年7月至2015年15月結(jié)核菌形態(tài)學(xué)檢查-自動(dòng)讀影技術(shù)，2016年2月至2016年3月， 我院對(duì)308例涂膜進(jìn)行人工讀影和校正機(jī)自動(dòng)讀影對(duì)比試驗(yàn)的結(jié)果為286例，綜合適合率為92.58%。、14、結(jié)核病診斷金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、 分枝桿菌全自動(dòng)連續(xù)檢測(cè)系統(tǒng)-BACTEC MGIT 960操作簡單安

5、全可靠性性能優(yōu)異的高性能價(jià)格比m=mycobacterium g=growthi=indica tte檢測(cè)對(duì)象CO2 O2檢測(cè)手段顏色熒光發(fā)光元素培養(yǎng)基改良Middle Brook 7H9營養(yǎng)添加劑抗菌劑安全、結(jié)核病診斷金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、簡單的工作流程、17、結(jié)核病診斷金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、BACTEC MGIT 960陽性結(jié)果判定1 .抗酸染色2 .普通培養(yǎng)血液平板3.MPB64抗原檢查、18、結(jié)核病診斷金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)、BACTEC 9120只能進(jìn)行血液培養(yǎng)。 標(biāo)本：血液，無菌體液，我可以！ 普通細(xì)菌真菌分枝桿菌，19，結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗(yàn)，結(jié)核桿菌體外藥敏試驗(yàn)，MIC測(cè)

6、定法，固體培養(yǎng)法，液體儀器法，液體微量法判斷的閾值是1%藥敏試劑為： SIRE Kit (Streptomycin，Isoniazid， Rifampin and Ethambutol) 4-13日pza工具包4-21日siresusceptibibity在內(nèi)的I， e (在低濃度耐藥品性的情況下，可用于高濃度試驗(yàn))、BACTEC MGIT 960藥敏系統(tǒng)、 21、結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗(yàn)、MGIT Plastic Tubes、mgit plastic tubes ba ctec 960 pza kit， 960 direct LIS、BACTEC 960 for GD、手動(dòng)鏡頭、BACTEC

7、 460TB、BACTEC 9000MB， 2003 bdisalways epicenter for the 960， 22，結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗(yàn)，drugfreeisoniazidethambutolinoculummedia0.2mcg/ml2.0mcg/ml10-310-52690 % resistant 34.60.1 interpretationresistantsusceptible，23，結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗(yàn)， 收集了結(jié)核分枝桿菌液體微量藥敏、結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗(yàn)、結(jié)核分枝桿菌液體微量顯色法藥敏試驗(yàn)我院2015年8月至11月臨床分離菌株511例，采用液體微量顯色法分

8、析利福平、異煙肼、鏈霉素、乙醇、卷曲、25、結(jié)核分枝桿菌體外藥敏試驗(yàn)、結(jié)核分枝桿菌液體微量顯色法藥敏試驗(yàn)對(duì)比試驗(yàn)收集臨床分離菌株和國家參比室質(zhì)量控制菌株117例，采用液體微量顯色法和羅氏比例法分別用利福平、異煙肼、鏈霉素、乙醇醇、卡霉素、氧氟沙星、乙基乙基收集了結(jié)核分子生物學(xué)診斷、一、結(jié)核分枝桿菌探針溶解曲線技術(shù)、27、結(jié)核分子生物學(xué)診斷、結(jié)果判斷、結(jié)核分子生物學(xué)診斷、我院樣品庫臨床分離菌株154例，經(jīng)溶解曲線法耐藥性基因突變分析以及羅氏比例法耐藥性試驗(yàn)，對(duì)耐藥性結(jié)果不一致的11株菌進(jìn)行基因序列、29、結(jié)核分子生物學(xué)診斷、二、結(jié)核分枝桿菌RNA檢測(cè)(TB-RNA) RNA作為臨床分子診斷靶的優(yōu)

9、點(diǎn)： RNA拷貝數(shù)DNA拷貝數(shù)更有臨床意義的：生命力旺盛的病原體RNA轉(zhuǎn)錄活躍RNA遠(yuǎn)不如DNA，導(dǎo)致病原體死亡， RNA快速降解的結(jié)核分子生物學(xué)診斷，修訂了今年我院住院患者179例，分析涂膜、培養(yǎng)和TB-RNA檢測(cè)報(bào)告，我院涂膜、培養(yǎng)陽性率分別為15.1%和37.9%。 TB-RNA的總陽性率為35.8%。31、結(jié)核分子生物學(xué)診斷、三、EasyNAT TB-DNA檢測(cè)(恒溫?cái)U(kuò)增法)原理：將病原體DNA擴(kuò)增、核酸雜交和核酸試紙條檢測(cè)三項(xiàng)技術(shù)有機(jī)一體化，恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)中加入了兩對(duì)TB特異性引物、一對(duì)特異性探針，同時(shí)完成的檢測(cè)對(duì)象片段：的目標(biāo)是結(jié)核、32、結(jié)核分子生物學(xué)診斷、操作規(guī)程、結(jié)核分子生物學(xué)

10、診斷，2015年6月，我科參加了CTCTC“EasyNAT結(jié)核分枝桿菌核檢試劑盒現(xiàn)場應(yīng)用評(píng)價(jià)”項(xiàng)目，結(jié)果如下：注*:1例培養(yǎng)陽性最終鑒定為非結(jié)核分枝桿菌。 四、Gen-Xpert MTB/RIF可將進(jìn)行標(biāo)本處理、實(shí)時(shí)PCR和利福平耐藥性檢測(cè)的完整平臺(tái)痰標(biāo)本直接裝入模塊，無需與任何試劑混合處理即可實(shí)現(xiàn)標(biāo)本液化、去污、富集、DNA提取、rpoB實(shí)時(shí)放大、 結(jié)核分子生物學(xué)診斷，Xpert MTB/RIF和PCR TB-DNA檢測(cè)的比較：陽性符合率99.03，陰性符合率92.61，總符合率95.31，36，結(jié)核分子生物學(xué)診斷，涂膜陽性肺結(jié)核3360xpert檢查率結(jié)核分子生物學(xué)診斷，Xpert MTB

11、/RIF和BD960液體培養(yǎng)比較實(shí)驗(yàn)：陽性適合率95.52，陰性適合率95.51，總適合率=95.51，結(jié)核分子生物學(xué)診斷，Xpert MTB/RIF和比例法藥敏比較實(shí)驗(yàn)：陽性適合率96 39，結(jié)核分子生物學(xué)診斷，WHO關(guān)于Xpert MTB/RIF的建議Xpert MTB/應(yīng)采用RIF作為MDR-TB的高風(fēng)險(xiǎn)組，早期發(fā)現(xiàn)并有效控制疫情MDR-TB患者。 Xpert MTB/RIF在MDR和HIV問題不嚴(yán)重的地區(qū)，可以用于基于顯微鏡檢查的后續(xù)檢查，特別是涂陰標(biāo)本的進(jìn)一步檢查。40、體外r干擾素釋放試驗(yàn)、蛋白水平、結(jié)核菌素試驗(yàn)(TST )、T-SPOT.TB，quantiferon-tbgold

12、in-tube (qft-tube )特異性僅對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合組敏感，大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗(BCG ) 與無交叉反應(yīng)的美國FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306 )國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508 )敏感度幾乎對(duì)免疫力下降/無法抑制的肺外結(jié)核患者具有高檢出率的美國FDA數(shù)據(jù)：敏感度95.6%(175/183 )國內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：敏感度95.3 43、體外r干擾素釋放試驗(yàn)、實(shí)驗(yàn)效果圖避免臨床無效藥品檢驗(yàn)靈敏度的提高有利于臨床對(duì)結(jié)核病的早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，避免疾病的傳播和擴(kuò)散提前48小時(shí)產(chǎn)生結(jié)果，45、體外r干擾素釋放試驗(yàn)、陰性結(jié)果對(duì)患者體內(nèi)結(jié)核菌的特異效果假陰性結(jié)果：感染

13、階段不同的少數(shù)免疫系統(tǒng)功能不全/疾病實(shí)驗(yàn)工作不正常。陽性結(jié)果提示患者體內(nèi)存在對(duì)結(jié)核菌特異效應(yīng)t細(xì)胞，患者存在結(jié)核感染。 但是，是否為活性結(jié)核癥，有必要結(jié)合臨床癥狀及其檢查指標(biāo)進(jìn)行綜合判斷。 假陽性結(jié)果：感染4種環(huán)境分枝桿菌時(shí)： M.kansasii(堪薩斯)、M.szulgai (蘇)、M.marinum (海)、M.gordonae (戈登)。 WHO 2014潛伏結(jié)核感染管理指南： 1、在HIV感染者、與肺結(jié)核患者密切接觸的成人和兒童、開始接受抗腫瘤壞死因子(TNF )治療的患者、接受透析治療的患者、準(zhǔn)備接受器官或血液移植的患者以及矽肺患者中開展LTBI系統(tǒng)檢查和治療。 LTBI檢查推薦使用干擾素釋放試驗(yàn)(IGRA )或結(jié)核菌素皮試驗(yàn)(TST )。 2 .對(duì)監(jiān)護(hù)權(quán)、醫(yī)療從業(yè)者、結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家的移民、流浪漢、吸毒者，可以有條件地開展LTBI系統(tǒng)的檢查和治療。 3 .對(duì)于糖尿病人、酒精依賴者、吸煙中毒者、低體重者，如果他們不屬于上述1和2的情況，則不建議通常開展LTBI的系統(tǒng)檢查。47、體外r干擾素釋放試驗(yàn)、LTBI篩選和診斷提案流程、48、體外r干擾素釋放試驗(yàn)、Menzies等人在200