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文檔簡介

1、BCA 法定量蛋白質(zhì)濃度,為什么選用BCA法？ 操作簡便，快速，靈敏度高，準(zhǔn)確，試劑穩(wěn)定性好，經(jīng)濟實用，抗干擾能力強,基本原理,BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量： 在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu1+（biuret reaction）。BCA與Cu1+結(jié)合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562 nM處有高的光吸收值并與蛋白質(zhì)濃度成正比，據(jù)此可測定蛋白質(zhì)濃度。,試劑盒組成,實驗步驟,1. 先將solutionA 搖晃混勻，根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積solution A加1體積solutionB試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻。BCA工作液在2

2、4小時內(nèi)穩(wěn)定。,2.稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：完全溶解蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品（5mg/mlBSA,-20保存）取10微升用PBS稀釋至100微升（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為 0.5mg/ml。 將稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品（0.5mg/ml）按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升分別加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補足到20微升。,加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液不足道20ul。 即：將蛋白質(zhì)樣品作適當(dāng)稀釋（最好多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋,4.各孔加入200微升BCA工作液，用加樣槍輕輕吹打混勻（注意：不要弄出氣泡影響讀數(shù)），37放置30-60分鐘。 冷卻到室溫后，用酶標(biāo)儀測定A562nm，或540-

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