不規(guī)則抗體篩選分析PPT課件

1、。1，抗體篩查試驗(yàn)，齊新華，2012年9月28日，2、臨床輸血技術(shù)規(guī)范明確規(guī)定，部分患者應(yīng)進(jìn)行“抗體篩查”檢測(cè)，第四章第十七條：“在下列情況下，抗體篩查檢測(cè)必須按國(guó)家臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行：1。交叉配血不相容；2、對(duì)有輸血史、妊娠史或短期國(guó)內(nèi)需求者進(jìn)行多次輸血。3。為什么要在輸血前進(jìn)行“抗體篩查”檢查？1.目前，已知紅細(xì)胞有26個(gè)抗原系統(tǒng)(21個(gè)已確認(rèn)，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等。)和500多種抗原(200多種已確認(rèn))。紅細(xì)胞抗原的多樣性決定了抗體的多樣性?？辜?、抗乙、抗丁(ABO和Rh血型)的檢測(cè)可以保證大多數(shù)患者輸血的安全性，但仍不能避免血型不合(ABO和Rh血型除

2、外)引起的溶血。有些患者有慢性(遲發(fā)性)溶血反應(yīng)，容易被忽視或不能引起臨床醫(yī)生的注意。(理論上講，每1U成人濃縮紅細(xì)胞應(yīng)能在15-30天內(nèi)提高Hb5-10g/L (0.5-1g/dl)，而不會(huì)損失或破壞(溶血)。如果給予3-4U紅細(xì)胞，患者的血紅蛋白將上升到低于10g/L，或者在幾天后(一周內(nèi))血紅蛋白仍將下降到原始水平或甚至更低。在這種情況下，有必要考慮是否存在慢性溶血反應(yīng)。)3 .有利于臨床顯著抗體的早期檢測(cè)和確認(rèn)，從而獲得足夠的時(shí)間選擇匹配血液，避免因缺乏匹配血液而延誤患者病情。1.什么是“抗體篩查”檢查1。不規(guī)則抗體的含義：一般來(lái)說(shuō)，除了抗甲和抗乙外，所有的紅血型抗體都被稱(chēng)為不規(guī)則抗體

3、。例如抗d、抗n、抗m、抗jk抗體。2.“抗體篩查”的含義：使用具有臨床顯著血型抗原的O型紅細(xì)胞檢測(cè)患者血清(包括多種抗體)；如果出現(xiàn)聚集，則表明患者有不規(guī)則抗體，可判斷為“抗體篩查”陽(yáng)性。6，抗體篩選技術(shù)要求檢測(cè)盡可能多的具有臨床意義的抗體。檢測(cè)盡可能少的無(wú)臨床意義的抗體。盡快完成抗體檢測(cè)。7。方法選擇：每種方法都有自己的特點(diǎn)，適用于不同的范圍和情況。鹽水法：可用于檢測(cè)干擾ABO分型的鹽水反應(yīng)性抗體，如MN和P血型抗體。然而，這種方法可以檢測(cè)無(wú)臨床意義的抗體，如冷凝集素抗和抗IH，它會(huì)漏掉IgG抗體。低離子多胺法(LIP-IAT):檢測(cè)時(shí)間短(35分鐘)，靈敏度和準(zhǔn)確度高，但不能消除臨床上無(wú)

4、關(guān)緊要的抗體的干擾。間接抗人球法是一種靈敏有效的抗體檢測(cè)方法，能有效避免無(wú)臨床意義的抗體干擾。缺點(diǎn)：這需要很長(zhǎng)時(shí)間和很多步驟。用于抗體篩選試劑的試劑、紅細(xì)胞懸液(1#、2#、3#)試劑紅細(xì)胞必須含有下列抗原：D、C、E、C、E、M、N、S、S、P1、LEA、LEB、K、K、FYA、FYB、JKA和JKB、10、實(shí)驗(yàn)步驟，取4個(gè)小試管，根據(jù)表格標(biāo)記并加入相應(yīng)的試劑。1# 2# 3#自身受試者血清2滴2滴2滴2滴2滴用于篩選的紅細(xì)胞懸液1# 1滴用于篩選的紅細(xì)胞懸液2# 1滴用于篩選的紅細(xì)胞懸液3# 1滴5%用于受試者的紅細(xì)胞懸液，混合均勻后，以3400rpm離心15秒鐘，并立即如前觀察結(jié)果。11

5、、注意事項(xiàng)，標(biāo)本編號(hào)清晰！試劑紅細(xì)胞保存在保存液中，應(yīng)在用生理鹽水或Liss溶液洗滌后24小時(shí)內(nèi)使用，否則，會(huì)因污染和抗原丟失而導(dǎo)致檢測(cè)錯(cuò)誤。血清和紅細(xì)胞懸液的添加量必須準(zhǔn)確，以免添加過(guò)多或過(guò)少，以免受到前帶和后帶的影響。轉(zhuǎn)速不應(yīng)過(guò)快或過(guò)慢，時(shí)間不應(yīng)過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，以免造成假陽(yáng)性或假陰性。，2020/8/14，12，13，聚芳烴法，原理：聚多胺是一種多價(jià)陽(yáng)離子聚合物，在溶液中有許多陽(yáng)離子基團(tuán)，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷。當(dāng)紅細(xì)胞和血清在低離子介質(zhì)中孵育時(shí)，IgG抗體與紅細(xì)胞上相應(yīng)的抗原結(jié)合，然后在促凝胺的作用下發(fā)生凝集。凝結(jié)和凝集在外觀上無(wú)法區(qū)分。加入檸檬酸鈉再懸浮后，檸檬酸鹽的負(fù)電荷中和了凝血胺

6、的正電荷，使紅細(xì)胞凝集消失，但真正的凝集并未消失。(見(jiàn)圖)。14、實(shí)驗(yàn)步驟，取4個(gè)小試管，根據(jù)表格標(biāo)記并加入相應(yīng)的試劑。1# 2# 3#受試者的血清2滴2滴2滴2滴篩選紅細(xì)胞懸浮液1# 1滴篩選紅細(xì)胞懸浮液2# 1滴篩選紅細(xì)胞懸浮液3# 1滴受試者的5%紅細(xì)胞懸浮液1滴LIM溶液(12滴)0.6毫升0.6毫升0.6毫升0.6毫升并在室溫下放置1分鐘。然后加入1滴凝聚胺試劑，混合均勻，以3400轉(zhuǎn)/分鐘離心15秒鐘，輕輕扣住觀察是否有凝集。向每個(gè)試管中加入1滴重懸液，輕輕搖動(dòng)，觀察凝集是否分散。15，注意事項(xiàng)，盡量不要使用肝素進(jìn)行抗凝，如有必要，再加入一滴聚胺。肝素是一種大分子陰離子物質(zhì)，能中和

7、多胺陽(yáng)離子，導(dǎo)致假陰性。收到標(biāo)本時(shí)，詢(xún)問(wèn)血液是正在輸注還是剛剛輸注。如果是，詢(xún)問(wèn)臨床醫(yī)生液體中是否含有止血?jiǎng)?，KCL和VitC。這些藥物會(huì)干擾多胺的作用，導(dǎo)致假陰性和事故。血清的添加量不應(yīng)增加，否則會(huì)增加致敏過(guò)程中的離子強(qiáng)度，降低致敏效果。只需要一滴凝結(jié)劑，這可能導(dǎo)致懸浮液不能溶解非特異性凝集、假凝集和假陽(yáng)性?？唇Y(jié)果：陰性結(jié)果-紅細(xì)胞在1分鐘內(nèi)迅速完全分散。它可以在顯微鏡下觀察。陽(yáng)性結(jié)果-紅細(xì)胞未完全分散，弱凝集可能在30分鐘內(nèi)明顯減弱或消失，以即時(shí)結(jié)果為準(zhǔn)。轉(zhuǎn)速不應(yīng)過(guò)快或過(guò)慢，時(shí)間不應(yīng)過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，以免造成假陽(yáng)性或假陰性。抗球蛋白試驗(yàn)，原理：抗體分子和補(bǔ)體成分都是球蛋白。用這些球蛋白免疫動(dòng)物，

8、產(chǎn)生抗體，即抗人球蛋白。抗球蛋白試劑可與紅細(xì)胞致敏的人球蛋白(抗體分子和補(bǔ)體分子)反應(yīng)，致敏的紅細(xì)胞將通過(guò)橋接凝集。見(jiàn)圖，17，抗球蛋白試驗(yàn)，18，實(shí)驗(yàn)步驟，1# 2# 3#受試者自體血清2滴2滴2滴2滴篩選紅細(xì)胞懸液1# 1滴篩選紅細(xì)胞懸液2# 1滴篩選紅細(xì)胞懸液3# 1滴受試者5%紅細(xì)胞懸液1滴混合均勻，然后用生理鹽水洗滌3次(如何洗滌)30分鐘，最后用吸水紙吸收鹽水，然后加入1滴抗球蛋白血清，19，結(jié)果的意義，篩選存在于紅細(xì)胞1、2和3的紅細(xì)胞血清中的抗體，或同時(shí)存在于自身抗體中的自身抗體和同種抗體。20、注意事項(xiàng)，必須進(jìn)行間接抗人球蛋白試驗(yàn)。必須同時(shí)檢測(cè)自身抗體，即患者血清和自體紅細(xì)胞之間的反應(yīng)，以確定是否存在相同的抗體、自身抗體或兩者都存在。觀察水浴溫度、血清與細(xì)胞比例的準(zhǔn)確性、反應(yīng)時(shí)間、轉(zhuǎn)速等。觀察結(jié)果時(shí)，輕輕搖動(dòng)試管，避免弱凝集導(dǎo)致假陰性。如果抗體篩查出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)，則需進(jìn)一步明確抗體的特異性(判斷抗體的臨床意義，并給予協(xié)調(diào)輸血，以防止溶血性輸血反應(yīng)，預(yù)測(cè)新生兒溶血病)。有人建議，最好是做抗人球的方法，21、抗體特異性鑒定(理解)首先在做抗體篩選試驗(yàn)時(shí)，要用光譜細(xì)胞來(lái)確定抗體特異性，一般有8-16種光譜細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法與抗體篩選實(shí)驗(yàn)相同。實(shí)驗(yàn)原理是：血型是紅細(xì)胞膜上特異性抗原的類(lèi)型。在ABO血型系統(tǒng)中，紅細(xì)胞膜上有兩種抗原：甲和乙，而血清抗體是抗甲和抗乙的.血型鑒定