第一章+實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和技術(shù).ppt

1、第一章 基本設(shè)備和實(shí)驗(yàn)技術(shù),準(zhǔn)備室,培養(yǎng)室,細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)室,生化分析室,無菌室,一、 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置,基本實(shí)驗(yàn)室,輔助實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備, 培養(yǎng)基的 配制,洗滌 與滅菌等,離體材料 的無菌操 作,又稱 接種室,控制條件 下的離體 培養(yǎng),常規(guī)設(shè)備： 天平、冰箱、酸度計(jì)、離心機(jī)、純水器,二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具,滅菌設(shè)備：高壓滅菌鍋、干熱消毒柜 過濾滅菌裝置,二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具,培養(yǎng)容器：培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿等,二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具,無菌操作設(shè)備：超凈工作臺,二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具,接種器具：鑷子、剪刀、解剖刀等,二、實(shí)驗(yàn)室所需的設(shè)備、用具,cm,60cm,14cm,定時(shí)器,培養(yǎng)設(shè)備：培養(yǎng)箱

2、、培養(yǎng)架等,三、常用技術(shù),（一）洗滌技術(shù),新購玻璃器皿的洗滌： 1%HCl浸泡過夜 洗衣粉刷洗 自來水沖洗 蒸餾水漂洗 使用過的玻璃器皿的洗滌： 去除酸洗步驟，其它同上 有污染物的玻璃培養(yǎng)器皿： 高壓滅菌 洗衣粉刷洗 自來水沖洗 蒸餾水漂洗 金屬器具：用酒精擦洗，并保持干燥。,（二）滅菌技術(shù),1) 接種室的滅菌,接種室滅菌 紫外燈照射(無菌室、超凈臺)：波長260nm，距離小于1.2m，15-30min。每周一次. 熏蒸滅菌(無菌室):100ml/20m2甲醛+5g/20m2 高錳酸鉀；新的實(shí)驗(yàn)室或長期不用的實(shí)驗(yàn)室.濕度較大的季節(jié)要定期進(jìn)行. 噴霧消毒(超凈臺;無菌室)：75%酒精或3%來蘇兒

3、,2)接種工具、容器的滅菌,干熱滅菌：160-180,1.5-2.0h 濕熱滅菌：121, 20-30min 在無菌操作時(shí)，把鑷子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精燈火焰上灼燒滅菌。冷卻后，立即使用。操作中可采用250或500ml的廣口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。,3) 培養(yǎng)基的滅菌,高壓濕熱滅菌：121, 18-20min,4)不耐熱類物質(zhì)的滅菌,過濾滅菌（ Filter sterilization）：某些激素（如天然生長素IAA、玉米素ZT、赤霉素GA等）、維生素、抗生素等不耐熱或射線照射的物質(zhì)。,Filter sterilization-過濾滅菌,濾膜0.45

4、m以下,1.過濾器先滅菌，滅菌溫度121，20min。 2.細(xì)菌濾膜的網(wǎng)孔直徑一般小于0.45m和0.22m,Filter sterilization,滅菌的原則：消毒劑與外植體應(yīng)接觸足夠長的時(shí)間以除去外植體表面的微生物，但應(yīng)盡量減少對外植體細(xì)胞的破壞。,4)外植體的滅菌,常用外植體滅菌步驟,沖洗植物材料除去泥土等大的顆粒； 切成適宜的大小; 浸入70-75乙醇，0.5-1min； 用2-5NaClO溶液（加1滴表面活性劑）表面 消毒5-30min；或HgCl2 (0.1 0.2%) 2-10 min 用無菌水沖洗至少3遍,每次1-2min; 滅菌的材料可用無菌紙吸干。,（三）無菌接種技術(shù),1. 外植體的選擇,常用外植物體的來源,自然環(huán)境下 生長的植物,無菌環(huán)境下 生長的植物,溫室環(huán)境下 生長的植物,1.外植體的選擇 來源：健壯、無病蟲害、發(fā)育正常 大?。阂暸囵B(yǎng)目的而定 部位（生理狀態(tài)及發(fā)育年齡） 取材季節(jié)：生長開始的季節(jié)。（蘋果）,組織清洗 70%酒精浸1030s 滅菌劑處理 無菌水涮洗,Note:此步驟應(yīng)在超凈臺上完成,2、外植體無菌處理,3、無菌接種,接種前的準(zhǔn)備,酒精擦拭,旋轉(zhuǎn)灼燒,取外植體,接種,蓋好瓶塞,修剪外植體,接種,培養(yǎng)物污染可能的原因,培養(yǎng)容器 培養(yǎng)基本身 外植體 接種室的環(huán)境