植物組織培養(yǎng).ppt

1、植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?熟悉植物組織培養(yǎng)流程 了解培養(yǎng)基的配制方法 掌握無菌操作技術(shù),【實(shí)驗(yàn)原理】,植物組織培養(yǎng)是指植物的任何器官、 組織或 細(xì)胞，在人工預(yù)知的控制條件下，放在含有營養(yǎng) 物質(zhì)和植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)等組成的培養(yǎng)基中，使 其生長、分化并形成完整植株的過程。其理論依 據(jù)是植物細(xì)胞具有全能性。,【實(shí)驗(yàn)材料及儀器】,實(shí)驗(yàn)材料：野生虎杖植株的幼芽、葉片、莖段 實(shí)驗(yàn)器材：高壓滅菌鍋，超凈工作臺(tái)，電子天 平，酒精燈， 三角瓶，鑷子，剪刀， 燒杯 實(shí)驗(yàn)藥品：MS培養(yǎng)基，蔗糖，瓊脂，0.1%升 汞，NAA，6-BA，NaOH，HCl， CPPU，TDZ,【實(shí)驗(yàn)步驟】,1.MS培養(yǎng)基母液的配制

2、按照表1配制MS培養(yǎng)基母液,表1. MS基本培養(yǎng)基的配制,MS培養(yǎng)基的配制,取1000ml燒杯，分別取各種成分的母液100ml， 加入燒杯，稱取蔗糖30g，瓊脂6.5g，按照需要的濃 度分別加入各種植物生長調(diào)節(jié)劑，加水至800ml。加 熱使瓊脂溶解，定容至1000ml，用10NaOH調(diào)節(jié) pH至5.65.8。,培養(yǎng)基的滅菌,將配好的培養(yǎng)基迅速分裝至50ml三角瓶中，用 棉花塞好，用牛皮紙或報(bào)紙包扎。放入高壓滅菌鍋 中，121、滅菌20min。,植物材料的消毒,選取野生虎杖材料，用水洗凈，用70酒精浸泡15-30s，然后放入0.1的升汞溶液中浸泡20min，進(jìn)行材料消毒，然后用無菌水反復(fù)沖洗多次

3、。,接種,將消毒好的外植體材料在超凈工作臺(tái)中用鑷子接 種于已滅菌的培養(yǎng)基中，光照下進(jìn)行培養(yǎng)。,【注意事項(xiàng)】,1、實(shí)驗(yàn)所使用的器材要嚴(yán)格滅菌，注意無菌操作，避免因 染菌導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗； 2、配制貯存母液時(shí)，要計(jì)算好各種成分?jǐn)U大倍數(shù)后逐次加入，在第一種成分完全溶解后再加入第二種成分，切忌“一鍋煮”。有機(jī)成分配好后要裝入棕色瓶中在冰箱內(nèi)保存，其它三種母液可在常溫下保存，但最多不能超過一個(gè)月； 3、pH值對(duì)培養(yǎng)基的硬度有影響，pH過高培養(yǎng)基變硬，pH過低培養(yǎng)基不能凝固，所以要調(diào)整好培養(yǎng)基的pH值； 4、材料消毒時(shí)不要在酒精中停留過長時(shí)間； 5、接種后進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，為確保實(shí)驗(yàn)成功，可以首先進(jìn)行7- 10d的暗培養(yǎng)，然后再進(jìn)