免疫組化抗原修復(fù)簡介ppt課件.ppt

1、免疫組化抗原修復(fù)簡介,為何要進(jìn)行抗原修復(fù) 抗原修復(fù)的種類 抗原修復(fù)的原理 抗原修復(fù)的操作 抗原操作的應(yīng)用,為何要進(jìn)行抗原修復(fù),常規(guī)的石蠟切片的組織要經(jīng)過福爾馬林固定和石蠟包埋，雖然上述過程能良好的保存標(biāo)本在光鏡下的形態(tài)，但是會不同程度地破壞組織的抗原，降低組織的抗原與抗體的免疫反應(yīng)率。,抗原修復(fù)的種類,熱修復(fù)（HIER） 蛋白酶修復(fù)（PIER） 雙修復(fù)（特殊抗原和雙染） 不修復(fù),抗原修復(fù)的原理,抗原修復(fù)目前常用的有熱修復(fù)（HIER），蛋白酶修復(fù)（PIER）和不修復(fù)。不同的修復(fù)的原理不同。 熱修復(fù)的原理 蛋白酶修復(fù)原理,熱修復(fù)(HIER)的原理,“石說”：固定通過改變蛋白結(jié)構(gòu)降低免疫反應(yīng)性，AR

2、逆轉(zhuǎn)大部分福爾馬林導(dǎo)致的蛋白修飾，冷卻后，會重建“近天然”的結(jié)構(gòu)，免疫反應(yīng)的恢復(fù)是通過蛋白表位的復(fù)性。,熱修復(fù)的特點(diǎn),易于施行 易于標(biāo)準(zhǔn)化,蛋白酶修復(fù)(PIER)原理,蛋白酶的消化通過破壞福爾馬林造成的蛋白交聯(lián)，實(shí)現(xiàn)抗原的修復(fù)。 該方法的缺點(diǎn)是：破壞組織的完整性，會破壞抗原，而且酶的濃度，反應(yīng)時(shí)間，反應(yīng)溫度造成很大的差異，標(biāo)準(zhǔn)化難度較大。,抗原修復(fù)的操作,熱修復(fù)（HIER） 蛋白酶修復(fù)（PIER） 雙重修復(fù),熱修復(fù)（HIER）,高壓修復(fù) 煮沸法修復(fù) 微波修復(fù) 水浴加熱,高壓修復(fù),切片先脫蠟水化 將修復(fù)液注入高壓鍋，將液體煮沸 放入切片（甩開水分） 蓋上蓋子，等噴氣，計(jì)時(shí)1.52分鐘（800W1

3、000W） 冷卻，沖洗玻片上的修復(fù)液,1.5-2min,10min,高壓鍋直接修復(fù),高壓鍋隔水間接修復(fù),煮沸法修復(fù),將修復(fù)液注入不銹鋼鍋中 煮沸后，加入切片（甩干水分） 用保溫檔，處理20分鐘左右 冷卻，沖洗玻片上的修復(fù)液,蛋白酶修復(fù)（PIER）,切片脫蠟水化 切片上滴加酶，放入孵育盒，處理一定時(shí)間 時(shí)間到，取出切片，沖洗。,雙重修復(fù),脫蠟水化后，對切片進(jìn)行胰酶消化 然后，對切片進(jìn)行熱修復(fù),抗原操作的應(yīng)用,時(shí)間 溫度 冷卻 細(xì)節(jié),MOC31（上皮糖蛋白-2，EGP-2),EGFR(CLONE:EGFR.113),HBcAg(兔多抗),C/H,NO,結(jié)論,正確的修復(fù)對抗體的表達(dá)十分重要 抗原修復(fù)是一個(gè)個(gè)性化的