方法學(xué)驗證方案

1、1 / 19 文檔可自由編輯 *含量測定含量測定 方法學(xué)確認(rèn)方案方法學(xué)確認(rèn)方案 日期：2016 年 1 月 2 / 19 文檔可自由編輯 驗證方案審查與批準(zhǔn)驗證方案審查與批準(zhǔn) 您下面的簽字表明您已審閱此份驗證方案并同意實施。您下面的簽字表明您已審閱此份驗證方案并同意實施。 姓姓 名名職職 務(wù)務(wù)簽簽 名名日日 期期 起草人 姓姓 名名職職 務(wù)務(wù)簽簽 名名日日 期期 審核人 審核人 姓姓 名名職職 務(wù)務(wù)簽簽 名名日日 期期 批準(zhǔn)人 3 / 19 文檔可自由編輯 目目 錄錄 1.目的.4 2.范圍.4 3.驗證機(jī)構(gòu)與職責(zé).4 4.定義.4 5.參考文件.5 6.風(fēng)險因素分析.5 7.驗證準(zhǔn)備.5 8

2、.檢測方法的描述.5 9.驗證實施.6 10. 偏差與變更.8 11. 確認(rèn)結(jié)果評定與結(jié)論.9 12. 確認(rèn)周期.9 13. 附錄目錄.9 4 / 19 文檔可自由編輯 1 1 目的目的 對苦參膜中的含量測定檢測方法進(jìn)行確認(rèn)，確保方法的可行性，以便為 有效控制苦參膜的含量提供依據(jù)。 2 2 范圍范圍 本方案適用于本方案適用于*藥業(yè)股份有限公司齊墩果酸片含量測定方法的確認(rèn)。藥業(yè)股份有限公司齊墩果酸片含量測定方法的確認(rèn)。 3 3 驗證機(jī)構(gòu)與職責(zé)驗證機(jī)構(gòu)與職責(zé) 3.1驗證小組成員 姓 名 所在部門在驗證中擔(dān)任職務(wù)簽名日期 組長 組員 組員 3.2 職責(zé) 3.2.1驗證小組組長職責(zé) 3.2.1.1保證

3、確認(rèn)方案及各種檢查表的起草。 3.2.1.2保證在執(zhí)行前完成對確認(rèn)方案及各種檢查表的審核和批準(zhǔn)。 3.2.1.3負(fù)責(zé)對確認(rèn)小組成員進(jìn)行本方案的培訓(xùn)。 3.2.1.4保證完全按照確認(rèn)方案實施。 3.2.1.5確保能及時發(fā)現(xiàn)偏差，并按照已經(jīng)達(dá)成一致的偏差處理方法對其進(jìn)行 記錄、糾正、調(diào)查和最終確認(rèn)。 3.2.1.6確保確認(rèn)報告的生成、審核和批準(zhǔn)。 5 / 19 文檔可自由編輯 3.2.2QA 職責(zé) 3.2.2.1執(zhí)行前完成對確認(rèn)方案及各種檢查表的審核。 3.2.2.2負(fù)責(zé)確認(rèn)過程的監(jiān)控和檢查，保證確認(rèn)方案的實施，參與確認(rèn)結(jié)果評 價。 3.2.2.3參與確認(rèn)偏差的調(diào)查、處理、和評估。 3.2.2.4

4、確認(rèn)過程中，如有變更，保證按變更處理程序執(zhí)行。 3.2.3其它成員職責(zé) 3.2.3.1執(zhí)行前確認(rèn)確認(rèn)方案已批準(zhǔn)，并經(jīng)過培訓(xùn)。 3.2.3.2按確認(rèn)方案實施確認(rèn)，收集、整理確認(rèn)數(shù)據(jù)，完成確認(rèn)記錄和報告。 3.2.3.3參與確認(rèn)偏差的調(diào)查和處理，確認(rèn)通過偏差修訂和解決方案。 3.2.3.4確認(rèn)確認(rèn)過程中的變更在實施前已經(jīng)批準(zhǔn)。 4 4 定義定義 4.1線性：指在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān) 系的程度。 4.2準(zhǔn)確度：指用該方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接近的程度，一般用 回收率（%）表示。 4.3重復(fù)性：再規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度的供試品，用 6 個測定結(jié)果進(jìn)行評 價。 4.

5、4中間精密度：在同一個實驗室，不同時間由不同分析人員或用不同設(shè)備 測定結(jié)果之間的精密度， 稱為中間精密度。 6 / 19 文檔可自由編輯 5 5 參考文件參考文件 5.1 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（2010 年修訂版） 5.2 藥品生產(chǎn)驗證指南 5.3 中國藥典（2015 年版）二部 5.4國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn) 5.5 公司相關(guān)文件： 5.5.1 苦參膜質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及檢驗規(guī)程（） 5.5.2 驗證管理（） 5.5.3 變更控制操作規(guī)程（） 5.5.4 偏差處理操作程序（） 5.5.5 糾正措施與預(yù)防措施操作規(guī)程（） 5.5.6 2016 年度驗證總計劃 6 6 風(fēng)險因素分析風(fēng)險因素分析 風(fēng)險

6、評估將采用失效模式及影響（FMEA）的工具來評估和衡量方法參數(shù)失 效后對產(chǎn)品分析結(jié)果的影響。評估過程將參照公司質(zhì)量風(fēng)險管理的要求，風(fēng) 險等級為低、中、高級別的必須給出合理的建議措施，之后再次對建議的風(fēng) 險控制措施進(jìn)行評估以確保風(fēng)險的降低，分析、評估結(jié)果見附錄 1風(fēng)險評估 表。 7 7 驗證準(zhǔn)備驗證準(zhǔn)備 7 / 19 文檔可自由編輯 7.1 確保所有方法 SOP 是最新版本且經(jīng)過批準(zhǔn)，將檢查結(jié)果記錄在附錄 2文件檢查內(nèi)。 7.2 確認(rèn)參與驗證的人員都經(jīng)過此方案和相關(guān) SOP 的培訓(xùn)，和識別所有簽 字和草簽本方案任何數(shù)據(jù)表的人員。將檢查結(jié)果記錄在附錄 3培訓(xùn)檢查和簽 名確認(rèn)內(nèi)。 7.3 確認(rèn)驗證過

7、程中用到設(shè)備、計量儀器都是經(jīng)過校驗，并在有效期內(nèi)，將 檢查結(jié)果記錄在附錄 4確認(rèn)用儀器/儀表校準(zhǔn)檢查內(nèi)。 8 8 檢測方法的描述檢測方法的描述 8.18.1 藥品與試劑的準(zhǔn)備藥品與試劑的準(zhǔn)備 *對照品（中國藥品生物制品檢定院提供），*（為*藥業(yè)股份有 限公司生產(chǎn)）；硅鎢酸試液、碘化汞鉀試液、苦味酸、氯仿、甲醇、濃氨、 稀碘化鉍鉀試液、鹽酸液（0.2mol/L）、氫氧化鈉液（1mol/L）、氫氧化鈉 滴定液（0.1mol/L）、硫酸滴定液（0.05mol/L）、甲基紅示液、磷酸、乙腈、 無水乙醇。 8.28.2 儀器分析條件儀器分析條件 電子天平（FA2014）、超聲池（KQ-300DE）、電熱

8、恒溫水浴鍋（DK-98- 1）、高效液相（LC-10ATVP) 8.38.3 檢測方法檢測方法 顯色鑒別、色譜鑒別、酸堿滴定法、高效液相色譜法 8.48.4 檢測操作檢測操作 8.4.18.4.1 鑒別鑒別 8 / 19 文檔可自由編輯 8.4.1.18.4.1.1 顯色鑒別顯色鑒別：樣品連續(xù)三批，A、B 兩位組員各取樣品 1 號、樣品 2 號 約 0.15g，分置三支試管中，加水 2ml 使溶解，分別加硅鎢酸試液、碘化汞鉀 試液及苦味酸試液 12 滴，分別生成白色、淡黃色及黃色沉淀。 8.4.1.28.4.1.2 薄層鑒別：薄層鑒別：樣品連續(xù)三批，A、B 兩位組員分別取本品 0.1g，加甲醇

9、 10ml 使溶解，超聲提取 15 分鐘，靜置，取上清液作為供試品溶液；另取苦參 堿及氧化苦參堿對照品適量，加甲醇制成每 1ml 中各含 5mg 的溶液作為對照 品溶液，照薄層色譜法（附錄 B）試驗，取上述三種溶液各 23l，分別 點于同一以 0.5%羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠 G 薄層板上，以三氯甲烷-甲 醇-濃氨試液（5:0.6:0.3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀 試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的兩個斑 點。 8.4.8.4.2.32.3 酸堿滴定法：酸堿滴定法：連續(xù)三批樣品，兩位組員分別取樣品 1、樣品 2，各 10 片，剪碎，取一片重兩份，

10、各精密稱定，加氯仿 25ml 回流 3 次，每次 1 小時， 合并提取液，置水浴上揮干，殘渣用 0.2mol/L 鹽酸液 5ml 使溶解，濾過，濾 液置入分液漏斗中，用水 10ml 分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化 鈉約 6g 與 1mol/L 氫氧化鈉液 5ml,搖勻，用三氯甲烷振搖提取 5 次 （25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過。合并三 氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）10ml 及新沸過的冷水 20ml，振 搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗

11、滌 3 次，每次 10ml，合并 酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基 9 / 19 文檔可自由編輯 紅指示液 2 滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定。每 1ml 的硫酸液 （0.05mol/L）相當(dāng)于 26.44mg 的 C15H24N2O2。 本品每片含總生物堿以*80.0%110.0%。相對偏差（dr%）不得超過 0.6% 計算公式： 0 0 4 3 2 2 1 1 0 0 100 100 M mT C C V C C V C C1：硫酸滴定液的實際濃度（mol/L)； C2：硫酸滴定液的理論濃度（mol/L)； C3：氫氧化鈉滴定液的實際濃度（m

12、ol/L)； C4：氫氧化鈉滴定液的理論濃度（mol/L)； V1：加入硫酸滴定液的體積（ml)； V2：消耗氫氧化鈉滴定液的體積(ml)； T ：標(biāo)示量（26.44mg)； ：該批 20 片苦參膜的平均重量(g)；m M ：使用苦參膜的量（g)。 8.4.28.4.2 .4.4 高效液相色譜法高效液相色譜法 8.4.2.4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：用氨基鍵合硅膠為填充劑：以乙腈- 無水乙醇-3%磷 酸溶液（85:7.5:7.5）為流動相；柱溫 30，檢測波長為 220nm，流速 1.0mlmin，理論塔板數(shù)按氧化苦參堿峰計算，應(yīng)不低于 5000。 10 / 19 文檔可自由編輯 6.2

13、.2 對照品溶液的制備： 取*對照品適量，精密稱定，置同一量瓶中， 加乙腈-無水乙醇（85:15）制成每 1ml 含苦參堿 0.32mg 和氧化苦參堿 35g 的溶液，搖勻，即得。 8.4.2.2 供試品溶液的制備： 取已剪碎的樣品約 0.6g，精密稱定，置具塞錐 形瓶中，加濃氨水 0.5ml，精密加入三氯甲烷 25ml，稱定重量，超聲處理 30 分鐘，放冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液 5ml，水浴上 揮干，用乙腈-無水乙醇（85:15）定溶至 25ml 量瓶中，搖勻，用 0.45m 濾 膜濾過，即得。 6.2.4 測定法： 分別精密吸取對照品溶液 5l 與供試品溶液 510

14、l，注 入高效液相 色譜儀，測定，即得。 本品每片含*不得少于 22.0 mg。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過 2%。 計算公式: 2 21AA A 樣品平均片重稀釋倍數(shù) 樣品稱量對照品平均峰面積 對照品濃度樣品峰面積 gmgC/ : 對照品進(jìn)兩針的平均峰面積；A : 對照品第一針峰面積；1A : 對照品第二針峰面積。2A 9 9 驗證實施驗證實施 9.19.1 線性實驗線性實驗 11 / 19 文檔可自由編輯 目的：在設(shè)計的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程 度應(yīng)符合規(guī)定。 9.1.19.1.1 滴定法滴定法 9.1.1.1 實驗過程 同一人同時取同一批樣品，各 10 片，剪碎，取一片

15、重樣品 1、樣品 2、樣品 3、樣品 4、樣品 5，各精密稱定，加氯仿 25ml 回流 3 次，每次 1 小時，合并 提取液，置水浴上揮干，殘渣用 0.2mol/L 鹽酸液 5ml 使溶解，濾過，濾液置 入分液漏斗中，用水 10ml 分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約 6g 與 1mol/L 氫氧化鈉液 5ml,搖勻，用三氯甲烷振搖提取 5 次 （25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過。合并三 氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）10ml 及新沸過的冷水 20ml

16、，振 搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次，每次 10ml，合并 酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基 紅指示液 2 滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定。每 1ml 的硫酸液 （0.05mol/L）相當(dāng)于 26.44mg 的 C15H24N2O2。 本品每片含總生物堿以氧化苦參堿(C15H24N2O)計，應(yīng)為標(biāo)示量的 80.0%110.0%。相對偏差（dr%）不得超過 0.6%。 9.1.1.2 以樣品滴定過程中消耗氫氧化鈉的體積為橫坐標(biāo)，以樣品含量為縱 坐標(biāo)，繪制回歸方程。 9.1.1.3 可接受標(biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù) dr0.6%）。 9.

17、1.1.4 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*滴定含量測定線性實驗記錄內(nèi)，見 12 / 19 文檔可自由編輯 附錄。 9.1.29.1.2 高效液相高效液相 9.1.2.1 對照品配制：取*一瓶精密稱取置 25ml 容量瓶中、*對照品兩瓶 精密稱取置 50ml 量瓶中，加乙腈：無水乙醇（85:15）溶解至刻度。分別精 密量取氧化苦參堿 0.5ml、苦參堿 5ml；氧化苦參堿 1ml、苦參堿 10ml；氧化 苦參堿 2ml、苦參堿 20ml，分別置 25ml 容量瓶中，加乙腈：無水乙醇 （85:15）至刻度。既得。 9.1.2.2 樣品制備：取已剪碎的樣品約 0.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 加濃氨水

18、 0.5ml，精密加入三氯甲烷 25ml，稱定重量，超聲處理 30 分鐘，放 冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液 5ml，水浴上揮干，用 乙腈-無水乙醇（85:15）定溶至 25ml 量瓶中，搖勻，用 0.45m 濾膜濾過， 即得。 9.1.2.3 測定法： 分別精密吸取對照品溶液 5l 與供試品溶液 510l， 注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品每片*，不得少于 22.0 mg。 9.1.2.4 以對照品的吸取量（峰面積）為橫坐標(biāo)，以樣品含量（峰面積）為 縱坐標(biāo)，繪制回歸方程 9.1.2.5 可接受標(biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù) RSD2%）。 9.1.2.6 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*高效含

19、量測定線性實驗記錄內(nèi)，見 附錄 5。 9.29.2 重復(fù)性實驗重復(fù)性實驗 目的：在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一批次的樣品品，用 5 個測定結(jié)果進(jìn)行評價，得 到的結(jié)果 RSD 應(yīng)符合要求。 9.2.19.2.1 滴定法：滴定法： 13 / 19 文檔可自由編輯 9.2.1.1 實驗過程 取同一批樣品，10 片，剪碎，取一片重樣品 1、樣品 2、樣品 3、樣品 4、樣 品 5 各精密稱定，加氯仿 25ml 回流 3 次，每次 1 小時，合并提取液，置水浴 上揮干，殘渣用 0.2mol/L 鹽酸液 5ml 使溶解，濾過，濾液置入分液漏斗中， 用水 10ml 分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約 6g

20、與 1mol/L 氫 氧化鈉液 5ml,搖勻，用三氯甲烷振搖提取 5 次（25、20、10、10、10ml）,每 次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌，再依次分別通過同 一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液 （0.05mol/L）10ml 及新沸過的冷水 20ml，振搖提取后，分取酸層，氯仿層 再用新沸過的冷水洗滌 3 次，每次 10ml，合并酸液與洗滌液，置水浴上加熱， 除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基紅指示液 2 滴，用氫氧化鈉滴定 液（0.1mol/L）滴定。每 1ml 的硫酸液（0.05mol/L）相當(dāng)于 26.44mg 的

21、C15H24N2O2。 本品每片含總生物堿以*80.0%110.0%。相對偏差（dr%）不得超過 0.6%。 9.1.1.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù) dr0.6%）。 9.1.1.3 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*滴定含量測定重復(fù)性實驗記錄內(nèi)， 見附錄 5。 9.2.29.2.2 高效高效 9.2.2 實驗過程 14 / 19 文檔可自由編輯 9.1.2.1 對照品配制：對照品溶液的制備： 取苦參堿、氧化苦參堿對照品母 液適量，置同一量瓶中，加乙腈-無水乙醇（85:15）制成每 1ml 含苦參堿 0.32mg 和氧化苦參堿 35g 的溶液，搖勻，即得。 9.1.2.2 樣品制備：取同一批樣品 10 片

22、，剪碎并分別取樣品 1、樣品 2、樣品 3、樣品 4、樣品 5 約 0.6g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨水 0.5ml， 精密加入三氯甲烷 25ml，稱定重量，超聲處理 30 分鐘，放冷，加三氯甲烷補(bǔ) 足損失重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液 5ml，水浴上揮干，用乙腈-無水乙醇 （85:15）定溶至 25ml 量瓶中，搖勻，用 0.45m 濾膜濾過，即得。 9.1.2.3 測定法： 分別精密吸取對照品溶液 5l 與供試品溶液 510l， 注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品每片含苦參總堿以苦參堿(C15H24N2O) 與氧化苦參堿（C15H24N2O2）的總量計，不得少于 22.0 mg。 9

23、.1.2.4 可接受標(biāo)準(zhǔn)（相關(guān)系數(shù) RSD2%）。 9.1.2.5 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*高效含量測定重復(fù)性實驗記錄內(nèi)， 見附錄 5。 9.39.3 中間精密度實驗中間精密度實驗 9.3.1 目的：含量測定中，一個實驗室內(nèi)不同的人、在不同時間（通常是不 同天）測定得到的結(jié)果 RSD 應(yīng)符合要求。 9.3.19.3.1 滴定含量滴定含量 9.3.1.1 實驗過程 9.3.1.2 兩名實驗人員分別在不同時間（通常是不同天）各取同一批號苦參 膜 10 片，精密稱定，剪碎，各精密稱取本品 3 份（每份約 0.6g），加氯仿 25ml 回流 3 次，每次 1 小時，合并提取液，置水浴上揮干，殘渣用 0

24、.2mol/L 15 / 19 文檔可自由編輯 鹽酸液 5ml 使溶解，濾過，濾液置入分液漏斗中，用水 10ml 分次洗滌容器， 洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約 6g 與 1mol/L 氫氧化鈉液 5ml,搖勻，用三 氯甲烷振搖提取 5 次（25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同 一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫 脂棉層濾過。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）10ml 及新沸 過的冷水 20ml，振搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次， 每次 10ml，合并酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去

25、殘留的三氯甲烷，放冷 至室溫，加甲基紅指示液 2 滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定。每 1ml 的硫酸液（0.05mol/L）相當(dāng)于 26.44mg 的 C15H24N2O2。 9.3.1.3 可接受標(biāo)準(zhǔn)（同一人實驗結(jié)果 RSD%2.0%；兩人間的 RSD%2.0%） 9.3.1.4 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*滴定含量測定中間精密實驗記錄內(nèi)， 見附錄 5。 9.3.29.3.2 高效高效 9.3.2.1 兩名實驗人員用同一批對照品分別在不同時間（通常是不同天）各取 同一批號苦參膜 10 片，精密稱定，剪碎，各精密稱取本品 3 份（每份約 0.6g），置具塞錐形瓶中，加濃氨水 0.5m

26、l，精密加入三氯甲烷 25ml，稱定 重量，超聲處理 30 分鐘，放冷，加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過，精密吸取 續(xù)濾液 5ml，水浴上揮干，用乙腈-無水乙醇（85:15）定溶至 25ml 量瓶中， 搖勻，用 0.45m 濾膜濾過，即得。 16 / 19 文檔可自由編輯 9.3.2.2 測定法： 分別精密吸取對照品溶液 5l 與供試品溶液 510l， 注入高效液相色譜儀，測定，即得。本品每片含苦參總堿以苦參堿(C15H24N2O) 與氧化苦參堿（C15H24N2O2）的總量計，不得少于 22.0 mg。 9.3.2.3 可接受標(biāo)準(zhǔn)（同一人實驗結(jié)果 RSD%2.0%；兩人間的 RSD%2.0%）。

27、 9.3.2.4 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*高效含量測定中間精密度實驗記錄 內(nèi)，見附 5。 9.49.4 含量測定準(zhǔn)確度實驗含量測定準(zhǔn)確度實驗 9.4.1 目的：含量測定中，用已確定的方法測定的結(jié)果與真實值或參考值接 近的程度，一般用回收率（%）表示，得到的結(jié)果 RSD 應(yīng)符合要求。 9.4.2 實驗過程 精密稱取同一已知含量的供試品 9 份（每份約 0.6g），分別置于圓底燒瓶中， 分成三組，分別向第一組的每一份供試品中加入濃度為（35g/ml）的氧化 苦參堿對照品 2 ml；向第二組的每一份供試品中加入濃度為（35g/ml）的 氧化苦參堿對照品 5ml；向第三組的每一份供試品中加入濃度為（3

28、5g/ml） 的氧化苦參堿對照品 7 ml。加氯仿 25ml 回流 3 次，每次 1 小時，合并提取液， 置水浴上揮干，殘渣用 0.2mol/L 鹽酸液 5ml 使溶解，濾過，濾液置入分液漏 斗中，用水 10ml 分次洗滌容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化鈉約 6g 與 1mol/L 氫氧化鈉液 5ml,搖勻，用三氯甲烷振搖提取 5 次 （25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一飽和氯化鈉液 5ml 振搖洗滌，再依次分別通過同一裝有無水硫酸鈉 1g 的脫脂棉層濾過。合并三 17 / 19 文檔可自由編輯 氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）10ml 及新沸過的冷

29、水 20ml，振 搖提取后，分取酸層，氯仿層再用新沸過的冷水洗滌 3 次，每次 10ml，合并 酸液與洗滌液，置水浴上加熱，除去殘留的三氯甲烷，放冷至室溫，加甲基 紅指示液 2 滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定。每 1ml 的硫酸液 （0.05mol/L）相當(dāng)于 26.44mg 的 C15H24N2O2。 9.4.2.1 測定法 將測得的總含量減去供試品中已知含量，計算每組的回收率。 9.4.2.2 可接受標(biāo)準(zhǔn)（實驗結(jié)果回收率 98.0%102.0%）。 9.4.2.3 記錄：將實驗結(jié)果記錄在*滴定含量測定準(zhǔn)確度實驗記錄內(nèi)， 見附錄 8。 9.4.39.4.3 高效高效 9.4.3.1 對照品制備：對照品溶液的制備： 取苦參堿、氧化苦參堿對照品 母液適量，置同一量瓶中，加乙腈-無水乙醇（85:15）制成每 1ml 含苦參堿 0.32mg 和 35g 的溶液，搖勻，即得。 9.4.3.2 供試品制備： 精密稱取同一已知含量的供試品 9 份（每份約 0.6g），置具塞錐形瓶中，加 濃氨水 0.5ml，精密加入三氯甲烷 25ml，稱定重量，超聲處理 30 分鐘，放冷， 加三氯甲烷補(bǔ)足損失重量，濾過，精密吸取續(xù)濾液 5ml，水浴上揮干，用乙腈 -無水乙醇（85:15