第四章細(xì)菌的分型及其檢測(cè)技術(shù)

1、.,1,第四章 細(xì)菌的分型及其檢測(cè)技術(shù),邵麗軍,.,2,表型分型技術(shù),基因分型技術(shù),色譜與質(zhì)譜技術(shù),細(xì)菌自動(dòng)化鑒定技術(shù),血清學(xué)分型、生物化學(xué)分型、噬菌體分型、細(xì)菌素分型、耐藥譜分型等,質(zhì)粒圖譜分析、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)、核糖體分析、染色體酶切物脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型、序列分型、多位點(diǎn)序列分型技術(shù)等。,細(xì)菌分型,氣相色譜法、液相色譜法、毛細(xì)管電泳技術(shù)、飛行質(zhì)譜技術(shù)等。,自動(dòng)細(xì)菌鑒定和藥敏分析系統(tǒng)。,.,3,主要內(nèi)容,.,4,一、概述 二、細(xì)菌噬菌體分型的一般原則 三、噬菌體的分離、純化與增殖技術(shù) 四、細(xì)菌的噬菌體分型技術(shù) 五、噬菌體分型優(yōu)缺點(diǎn)（自學(xué)）,.,5,噬菌體(bacteriophage;pha

2、ge) 是一類能感染細(xì)菌、放線菌、真菌、螺旋體等微生物的病毒，屬于專性細(xì)胞內(nèi)寄生的微生物。 自然界分布廣泛，凡有細(xì)菌的場(chǎng)所，均可能存在相應(yīng)的噬菌體。,一、概述,.,6,噬菌體的基本形態(tài),.,7,根據(jù)與宿主菌的關(guān)系分類,.,8,.,9,液體培養(yǎng)基中 固體培養(yǎng)基上 噬菌體在細(xì)菌鑒定與分型方面的應(yīng)用,噬菌體與宿主菌共培養(yǎng),澄清,噬斑,噬菌體的作用具有種特異性，一種噬菌體只能裂解一種或與該種相近的細(xì)菌； 噬菌斑的形態(tài)、大小和透亮度的不同，可用于鑒定細(xì)菌的型別。,.,10,(1)細(xì)菌型別與分型噬菌體裂解特異性穩(wěn)定，分型結(jié)果重復(fù)性好。 (2) 噬菌體具有較高分型效率，能夠區(qū)分菌株間的細(xì)微差別，能滿足流行病

3、學(xué)研究的需要。 (3) 操作方法簡便易行，實(shí)驗(yàn)耗時(shí)短，結(jié)果記錄簡明。 (4) 方法應(yīng)能標(biāo)準(zhǔn)化，以利結(jié)果的比較。 (5)所用噬菌體應(yīng)易于獲得較高效價(jià)，能較長時(shí)間保存，噬斑清晰、大小適中，使之便于觀察和準(zhǔn)確記錄。,二、細(xì)菌噬菌體分型的一般原則,.,11,（一）噬菌體分離,三、噬菌體的分離、純化與增殖技術(shù),制備菌懸液,噬菌體富集培養(yǎng),制備裂解液,噬菌體確證試驗(yàn),接種適量樣品，12-24h,離心，上清過濾除菌，濾液無菌試驗(yàn),平板均勻涂布一層菌液，干燥后，表層布5-7點(diǎn) ，滴加濾液，一點(diǎn)生理鹽水，培養(yǎng)觀察噬斑,.,12,（二）噬菌體純化,稀釋裂解液,制備噬菌體與敏感菌混合管,培養(yǎng),純化,10-1至10-

4、55個(gè)稀釋度的噬菌體各0.1ml+0.2ml對(duì)數(shù)菌液，5min,選取噬斑較分散的平板，挑取典型噬斑，接種至含菌體培養(yǎng)液中過夜增殖噬菌體。分離純化單斑3次，至平板噬斑形態(tài)大小一致,制備底層瓊脂平板,制備上層瓊脂平板,各稀釋度混合管+3ml半固體培養(yǎng)基，均勻覆蓋平板表層,.,13,（三）噬菌體的增殖、保存,1、噬菌體增殖,2、去除菌體,3、噬菌體的保存,液體增殖法：定時(shí)加入對(duì)數(shù)期菌體 固體增殖法：同時(shí)加大菌體和噬菌體的濃度,細(xì)菌濾器法和三氯甲烷法,冷藏保存：無需防腐劑，分裝后7d，不宜超過4w 冷凍干燥：2年,.,14,（四）噬菌體的效價(jià)和裂解譜的測(cè)定,1、噬菌體效價(jià)的測(cè)定,噬菌體效價(jià)：是指1ml

5、液體中所含的活噬菌體的數(shù)量。用噬斑形成單位（plaque forming unit,pfu）表示。 單位：pfu/ml;測(cè)定方法：雙層瓊脂平板法,.,15,2、常規(guī)試驗(yàn)稀釋度測(cè)定,噬菌體的常規(guī)試驗(yàn)稀釋度 (routine test dilution, rtd)：是將噬菌體進(jìn)行10倍系列稀釋，各稀釋度噬菌體溶液點(diǎn)在宿主菌涂布的斑點(diǎn)上，經(jīng)培養(yǎng)后，能產(chǎn)生僅次于融合性裂解（cl）的最高稀釋度。 rtd測(cè)定意義：高濃度噬菌體會(huì)對(duì)宿主菌產(chǎn)生裂解外觀，為避免噬菌體對(duì)細(xì)菌這種非特異性破壞，使分型噬菌體顯示最高的特異性，將噬菌體間的交叉反應(yīng)降到最低，建議使用rtd或稱為臨界試驗(yàn)稀釋。 rtd 與pfu關(guān)系，均是

6、噬菌體效價(jià)的計(jì)量單位。受噬斑大小的影響，一般的rtd 約含 1 x 106 pfu/ml,.,16,3、裂解譜,裂解譜是指一種噬菌體的作用范圍。即確定該噬菌體在種內(nèi)或?qū)賰?nèi)的廣譜性，在種外或?qū)偻獾慕徊娣磻?yīng)性。 裂解模式是指各種細(xì)菌培養(yǎng)物被幾種噬菌體作用而出現(xiàn)的特殊的反應(yīng)模式，不同的細(xì)菌，可呈現(xiàn)不同的反應(yīng)模式。 裂解譜和裂解模式一般用噬菌體原液進(jìn)行試驗(yàn)，效價(jià)在103105rtd或1091011pfu/ml之間。分型試驗(yàn)一般用1 rtd的噬菌體。,.,17,制備菌懸液,菌液涂布平板,選點(diǎn)滴加不同噬菌體,不能混有雜菌,直接涂布或雙層瓊脂平板,斑點(diǎn)滴定的結(jié)果記錄如下: 融合性溶解程度:融合性溶解 (cl

7、) 、次融合性溶解(cl) 、半融合性溶解 (scl)、次半融合性溶解(scl) 、融合性不透明溶解，中心混濁，菌苔厚 (ol) 。 單個(gè)噬斑:大( l) 即1.5mm、正常 (n) 約1.0mm、小(s)0.11.0mm、細(xì)小(m) 0.1mm、微小()。細(xì)小和微小均僅能用放大鏡觀察。 噬斑的數(shù)量:05(-)、620()、140(+)、4160(+)、61120(+)、120(+)。,四、細(xì)菌噬菌體分型技術(shù),.,18,細(xì)菌素(bacteriocin) 是某些細(xì)菌產(chǎn)生的蛋白質(zhì)類抗菌物質(zhì)，這種物質(zhì)僅對(duì)與產(chǎn)生菌親緣關(guān)系近的細(xì)菌有抗菌作用，而對(duì)產(chǎn)生菌本身不敏感。如大腸菌素、綠膿菌素、蠟樣芽胞桿菌素等

8、。 抗生素 抗菌素是細(xì)菌、真菌等微生物在生長過程中為了生存競(jìng)爭(zhēng)需要而產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì),這種物質(zhì)可保證其自身生存,同時(shí)還可殺滅或抑制其它微生物。細(xì)菌產(chǎn)生的有多粘菌素、抗菌肽等。,一、概述,.,19,細(xì)菌素特點(diǎn) 抗菌范圍很窄，在治療上應(yīng)用價(jià)值不大，但可進(jìn)行細(xì)菌分型和流行病學(xué)調(diào)查。 細(xì)菌素分型方法 利用不同型別的細(xì)菌素產(chǎn)生菌測(cè)定試驗(yàn)菌的細(xì)菌素敏感模式（檢測(cè)未知菌） 利用已知對(duì)不同型別細(xì)菌素敏感的菌株作為指示菌，測(cè)定試驗(yàn)菌產(chǎn)生細(xì)菌素的模式,.,20,（一）待測(cè)菌對(duì)細(xì)菌素敏感模式分型試驗(yàn)方法（綠膿菌素為例）,綠膿菌素制備,綠膿菌素敏感試驗(yàn),細(xì)菌素分型試驗(yàn),有清晰抑菌圈，圈內(nèi)無菌落者為完全抑菌;抑菌圈中尚有

9、部分菌落為不完全抑菌;無抑菌圈表示該菌對(duì)此種綠膿菌素不敏感。,二、細(xì)菌素分型方法,待測(cè)菌鋪滿平板，干燥后加細(xì)菌素標(biāo)準(zhǔn)品，觀察抑菌圈。,.,21,（二）平板交叉劃線分型法 適用于細(xì)菌素產(chǎn)生量不多的細(xì)菌 已知細(xì)菌素產(chǎn)生菌劃線接種培養(yǎng)基，培養(yǎng)24-48h 無菌水沖洗掉菌苔，放置2cm*2cm濾紙片，滴加三氯甲烷，滅菌 多種待測(cè)菌株與原產(chǎn)細(xì)菌素菌株成垂直交叉劃線接種，培養(yǎng)24-48h，觀察交叉點(diǎn)上是否有菌生長，判定待測(cè)菌菌型。,.,22,（三）待檢菌產(chǎn)生細(xì)菌素對(duì)指示菌敏感模式分型方法 方法同平板交叉劃線分型法 已知細(xì)菌素產(chǎn)生菌劃線接種培養(yǎng)基，培養(yǎng)24-48h 無菌水沖洗掉菌苔，三氯甲烷熏蒸滅菌 多種細(xì)

10、菌素敏感的指示菌依次垂直交叉劃線接種，培養(yǎng)24-48h，觀察交叉點(diǎn)菌生長情況，判定產(chǎn)生細(xì)菌素試驗(yàn)菌菌型。,.,23,一、概述 二、紙片擴(kuò)散法 三、稀釋法 四、結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn),.,24,細(xì)菌的藥物敏感試驗(yàn)(drug susceptibility test) 是指在體外測(cè)定抗菌藥物抑制或殺死細(xì)菌能力的試驗(yàn)，簡稱藥敏試驗(yàn)。 藥敏試驗(yàn)方法 紙片擴(kuò)散法、稀釋法、抗生素濃度梯度法（e-試驗(yàn)法）、聯(lián)合藥敏試驗(yàn)、自動(dòng)化檢測(cè)法、分子生物學(xué)方法等。,一、概述,.,25,（一）基本原理： 將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后會(huì)不斷地向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散，形

11、成遞減的濃度梯度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)待檢菌的生長被抑制，從而產(chǎn)生透明的抑菌圈。 抑菌圈的大小反映檢測(cè)菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)待檢菌的最低抑菌濃度（mic）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，mic愈小。,二、紙片擴(kuò)散法（k-b法）,.,26,(二)培養(yǎng)基和抗菌藥物紙片,1抗菌藥物紙片：商品化，選擇直徑為6.35mm，吸水量為20l的專用藥敏紙片，用逐片加樣或浸泡方法使每片含藥量達(dá)規(guī)定要求。含藥紙片密封貯存于超低溫冰箱。 2培養(yǎng)基：水解酪蛋白（m-h）培養(yǎng)基是兼性厭氧菌和需氧菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，4保存。,.,27,1. 在瓊脂平板上挑取形態(tài)相同的菌落45個(gè)，接種于35mlm-h肉湯中，36

12、培養(yǎng)48h，與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比較，可用肉湯或生理鹽水稀釋至與0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管濁度相同 2.在15min內(nèi)，用無菌棉簽蘸取菌液，并在管壁上擠去多余的菌液后涂布于m-h瓊脂平板上（注意：涂布要均勻、致密），待干 3. 鑷子滅菌冷卻后，夾取不同藥敏紙片，按一定間隔貼在平板的不同區(qū)域，即兩紙片間距不小于24 mm，紙片距平板邊緣不小于15mm。 36溫箱培養(yǎng)1618h觀察結(jié)果。,（三）試驗(yàn)步驟,.,28,.,29,（四）結(jié)果判斷和報(bào)告 用精確度為1mm的游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，作出“敏感”、“耐藥”或“中介”的判斷。,幾種抗生素抑菌環(huán)解釋標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)的最低抑菌濃度,.,30,“敏感”（sens

13、itive，s）：表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制； “耐藥”（resistant，r）：表示測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效。 “中介”（intermediate，i）：表示測(cè)試菌對(duì)常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效。,.,31,（五）質(zhì)量控制,采用質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株和測(cè)試菌在同一條件下做藥敏試驗(yàn)，質(zhì)控菌株的抑菌圈在允許范圍內(nèi)，結(jié)果可信。 目的：檢查試驗(yàn)條件（如培養(yǎng)基、含藥紙片和接種菌量）、操作技術(shù)等是否合格 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株：大腸桿菌atcc 25922、糞腸球菌atcc 29212、金黃色葡萄

14、球菌atcc 25923等,.,32,稀釋法是體外定量測(cè)定抗菌藥物抑制細(xì)菌生長活性的方法，所獲結(jié)果比較準(zhǔn)確，常被用作校正其他方法的標(biāo)準(zhǔn)。 原理是用一系列不同濃度的藥物與等量細(xì)菌作用，找出能抑制細(xì)菌生長的最低濃度或殺滅細(xì)菌的最低濃度，其結(jié)果用最小抑菌濃度 (mic) 或最小殺菌濃度(mbc)表示p101。 分為肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法。,三、稀釋法,.,33,肉湯稀釋法,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11,.,34,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11,.,35,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11,.,36,特殊性：結(jié)核分枝桿菌生長緩慢，在細(xì)菌生長之前藥物已擴(kuò)散而

15、無法影響細(xì)菌的生長。 方法：絕對(duì)濃度法、比例法、放射測(cè)量法等。 絕對(duì)濃度法:是我國實(shí)驗(yàn)室普遍使用方法。將濃度遞減的藥物與等量培養(yǎng)基混合制成含藥培養(yǎng)基，不含藥培養(yǎng)基為對(duì)照，分別接種待測(cè)菌和標(biāo)準(zhǔn)菌，培養(yǎng)4w，菌落數(shù)多于20個(gè)為陽性（據(jù)此判定mic）。受試菌與標(biāo)準(zhǔn)菌mic的菌落數(shù)比值2判為敏感，8為耐藥。 比例法：who、國際防癆和肺病聯(lián)合會(huì)推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法。將不同稀釋度的待測(cè)菌接種于相同濃度的含藥培養(yǎng)基，檢測(cè)耐藥性。,四、結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn),.,37,一、核糖體分型 二、脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型 三、序列分型 四、多位點(diǎn)序列分型技術(shù),.,38,實(shí)質(zhì)：核酸探針雜交分型技術(shù)。 核糖體rna（rrna）基因最

16、為保守，在基因組上存在多個(gè)拷貝，以rrna基因片段為探針，檢出含有rrna基因的dna片段，通過分型雜交后的rrna指紋圖，進(jìn)行菌種分型和近源菌株的鑒定。 原理：樣本dna經(jīng)酶切消化，凝膠電泳分離片段，轉(zhuǎn)印到膜上進(jìn)行southern印跡雜交分析。以rrna基因片段為探針，雜交產(chǎn)生菌株特異性的dna指紋圖，與平行樣本或數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)達(dá)到分型目的。,一、核糖體分型,.,39,.,40,實(shí)驗(yàn)過程 探針的設(shè)計(jì)：一般以16s rrna和23s rrna作為探針，現(xiàn)已商品化 菌體的分離培養(yǎng)與dna提取 菌體dna酶切及電泳 southern 印跡雜交,全自動(dòng)微生物核糖體基因分型系統(tǒng)。 優(yōu)點(diǎn)是高效簡便、快速

17、、以標(biāo)準(zhǔn)化；缺點(diǎn)是費(fèi)用高。,.,41,脈沖場(chǎng)凝膠電泳（pfge）技術(shù)是細(xì)菌分型較靈敏的方法，通過檢測(cè)染色體上所有酶切位點(diǎn)的變化，反映全部基因的相關(guān)性，提供可靠的基因分型依據(jù)。 優(yōu)點(diǎn)：重復(fù)性好，分辨力強(qiáng)，是基因分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在識(shí)別和追蹤醫(yī)院感染暴發(fā)和流行上具有實(shí)用價(jià)值。 與普通凝膠電泳區(qū)別：普通電泳分離dna分子的上限是50kb，而pfge能分離10-800kb的dna片段。,二、脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型,.,42,pfge分型原理是將細(xì)菌包埋于凝膠塊中，用溶菌酶和蛋白酶k消化菌體和蛋白質(zhì)，釋放完整的染色體dna，采用稀有切點(diǎn)酶酶切dna，產(chǎn)生有限數(shù)目的高分子量限制性片段。在特定的電泳系統(tǒng)中，定時(shí)

18、改變電場(chǎng)方向，反復(fù)循環(huán)，使dna在凝膠網(wǎng)孔中呈曲線泳動(dòng)而得到分離，形成特定的電泳條帶圖譜。不同菌株的電泳圖譜具有高度特異性，染色后目測(cè)形成的片段條帶，而識(shí)別特異的菌株。,.,43,.,44,操作步驟,細(xì)菌菌株的培養(yǎng),結(jié)果處理,凝膠塊制備,菌體裂解,膠塊洗滌,脈沖式電泳,酶切,.,45,.,46,.,47,原理：通對(duì)待測(cè)菌的全基因序列進(jìn)行分析，與genebank中的已知序列進(jìn)行比較，實(shí)現(xiàn)分型。 方法：sanger雙脫氧鏈終止法、化學(xué)修飾法、自動(dòng)測(cè)序技術(shù),三、序列分型,.,48,定義：是高通量測(cè)序技術(shù)和群體遺傳學(xué)結(jié)合的產(chǎn)物，通過測(cè)序技術(shù)揭示保守基因的等位基因突變，實(shí)現(xiàn)對(duì)病原菌的分型與鑒定。 特點(diǎn)：

19、簡便易行，重復(fù)性好，且可通過網(wǎng)絡(luò)實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間數(shù)據(jù)共享和比較。,多位點(diǎn)序列分型技術(shù)（mlst）,.,49,原理,.,50,分析方法,.,51,步驟,.,52,mlst和pfge分型技術(shù)比較,.,53,色譜法或稱層析法是一種物理或物理化學(xué)的分離分析方法，是多組分混合物分離分析的最重要分析方法。 在所有色譜體系中都包含兩大部分，即流動(dòng)相和固定相，以液體為流動(dòng)相者稱為液相色譜(lc) ，以氣體為流動(dòng)相者稱為氣相色譜 (gc) 。 色譜和質(zhì)譜通過對(duì)細(xì)菌代謝組和蛋白質(zhì)組分析，進(jìn)行細(xì)菌鑒定。,.,54,氣相色譜法可分為氣-液色譜 (glc) 和氣-固色譜 (gsc) 。前者是分配色譜，后者是吸附色譜。 特點(diǎn)

20、： 高分離效能（短時(shí)間同時(shí)分離測(cè)定復(fù)雜組分混合物） 高選擇性（能分離分析性能極為相似的物質(zhì)） 高靈敏度（痕量分析10-11-10-13g，甚至一個(gè)細(xì)菌代謝物） 高分離速度（一個(gè)分析周期幾分鐘至十幾分鐘） 定量結(jié)果準(zhǔn)確 易于自動(dòng)化 應(yīng)用范圍廣,一、氣相色譜法在細(xì)菌學(xué)研究中的應(yīng)用,.,55,氣相色譜法與傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法區(qū)別：不需細(xì)菌分離培養(yǎng)過程，通過對(duì)細(xì)菌組成成分和分解代謝產(chǎn)物分析，鑒定細(xì)菌科、屬、種、株。鑒定時(shí)不需活菌。,.,56,氣相色譜法鑒定細(xì)菌的途徑： 分析細(xì)菌細(xì)胞裂解產(chǎn)物 分析細(xì)菌細(xì)胞的酸性或堿性條件下的水解物 分析培養(yǎng)物中的揮發(fā)性產(chǎn)物，如氣體、酸、醇 分析培養(yǎng)物中的代謝產(chǎn)物 分析細(xì)菌培養(yǎng)基

21、質(zhì)降解代謝產(chǎn)物 分析細(xì)菌在血清、臨床標(biāo)本或生物制品中的活力,.,57,氣相色譜法在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用： 分析細(xì)菌細(xì)胞成分（如分析菌體脂肪酸，鑒定菌體親緣關(guān)系） 分析細(xì)菌在體外培養(yǎng)物中的代謝產(chǎn)物（如厭氧菌產(chǎn)生的短鏈脂肪酸色譜圖、需氧菌的有機(jī)酸色譜圖等） 臨床標(biāo)本中檢出和鑒定細(xì)菌（如檢測(cè)腦脊液中的乳酸，對(duì)細(xì)菌性腦膜炎做出明確診斷等） 熱裂解氣相色譜法鑒定細(xì)菌（將樣品干燥高溫裂解，碎片色譜圖鑒定微生物，如沙門菌屬十種血清型鑒別） 高分辨氣相色譜法分析冷凍條件下細(xì)菌的揮發(fā)性有機(jī)產(chǎn)物（鑒定引起冷凍品腐敗的微生物）,.,58,液相色譜法基于混合物中各組分對(duì)固定相和流動(dòng)相親和力的差異分離組分的。,二、液相色

22、譜法在細(xì)菌學(xué)研究中的應(yīng)用,.,59,.,60,分類,1、按吸附力分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠滲透色譜和離子色譜等 2、按固定相分液固色譜、液液色譜和鍵合相色譜（正常相色譜法和反相液相色譜）。,.,61,反相高效色譜法根據(jù)菌種間某些特征大分子的結(jié)構(gòu)、大小、電荷分布等方面存在的固有差異對(duì)菌體進(jìn)行快速鑒別（如對(duì)分枝桿菌細(xì)胞壁脂質(zhì)中分枝菌酸進(jìn)行分析，根據(jù)色譜圖鑒別菌種）。 變性高效液相色譜技術(shù)（dhplc）：近年來發(fā)展起來的一種快速、靈敏、準(zhǔn)確、高通量篩選dna序列變異的基因檢測(cè)技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于臨床基因診斷、突變檢測(cè)、分型鑒別等診斷檢測(cè)中，也適合于大批量檢測(cè)環(huán)境或食品樣品中的致病微生物

23、的靶基因。,.,62,毛細(xì)管電泳(ce)，又叫高效毛細(xì)管電泳或毛細(xì)管分離法，是八十年代問世的一種高效的液相分離方法，是經(jīng)典電泳技術(shù)和現(xiàn)代微柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物。即以毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，根據(jù)樣品各組分遷移速度和分配上的差異而進(jìn)行分離。,三、毛細(xì)管電泳在細(xì)菌學(xué)研究中的應(yīng)用,.,63,傳統(tǒng)電泳分析：操作煩瑣，分離效率低，定量困難，無法與其他分析相比。,高效毛細(xì)管電泳在技術(shù)上采取了兩項(xiàng)重要改進(jìn)： 1、采用了內(nèi)徑在25100 m，外徑300400m的毛細(xì)管，使產(chǎn)生的熱量能夠較快散發(fā)，大大減小了溫度效應(yīng)，使電場(chǎng)電壓可以很高 2、采用了高達(dá)數(shù)千伏的電壓，電場(chǎng)推動(dòng)力大，使柱效遠(yuǎn)高于高效液相色譜，理論塔板數(shù)高達(dá)幾十萬塊/米，,1、ce技術(shù)要點(diǎn),.,64,2