艾滋病實驗室質(zhì)量管理與控制0520.ppt

1、艾滋病實驗室質(zhì)量管理與控制,一、質(zhì)量保證（QA),1、行政支持 行政部門和領(lǐng)導(dǎo)要關(guān)心艾滋病實驗室的建設(shè)和發(fā)展，保證實驗室負責人和主要技術(shù)人員隊伍的穩(wěn)定，保證實驗室建筑和設(shè)備需要，給予充足的經(jīng)費支持，并進行經(jīng)常性監(jiān)督檢查。,2、實驗室規(guī)范化建設(shè),艾滋病篩查中心實驗室及艾滋病篩查實驗室 （1）、建筑條件 實驗室或檢測區(qū)域應(yīng)分為清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)，應(yīng)符合二級生物安全實驗室（BSL-2）要求。 （2）、儀器設(shè)備條件 配備艾滋病病毒抗體篩查試驗所需設(shè)備，至少包括酶標讀數(shù)儀、洗板機、普通冰箱、水浴箱（或溫箱）、離心機、加樣器（儀）、消毒與污物處理設(shè)備、實驗室恒溫設(shè)備、安全防護用品和生物安全柜。,艾滋

2、病檢測點 （1）、建筑條件 需有艾滋病檢測區(qū)域或?qū)Ｓ脤嶒炁_，能開展簡便、快速檢測。 （2）、設(shè)備條件 需配備快速試驗所必須的物品，包括普通冰箱、消毒與污物處理設(shè)備、一次性消耗品、安全防護用品。,3、人員培訓(xùn)及其評價,實驗室工作人員上崗前必須接受省級以上艾滋病檢測技術(shù)培訓(xùn)并獲得合格證書。在工作中要定期或不定期接受復(fù)訓(xùn)。實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)應(yīng)定期對工作人員進行評價，包括工作的準確性、效率、執(zhí)行安全條例和規(guī)章制度情況、職業(yè)道德、出勤率以及上崗資格等。,4.標本采集、運送和處理,5、檢測方法和試劑的選擇,所用試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準、批批檢合格、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用經(jīng)臨床質(zhì)量評估敏感

3、性和特異性高的試劑。,6、設(shè)備維護與校準,（1）、酶標讀數(shù)儀、洗板機 每天：核對濾光片波長，檢查洗板機管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象。 每周：清潔儀器表面，保護光學(xué)零件不沾灰塵。 每月：檢查洗滌時各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對位良好，負壓是否符合規(guī)定要求 每年：檢查、清洗濾光片，如果出現(xiàn)破裂或霉點則要更換。根據(jù)儀器內(nèi)具有的校準程序或使用校準板，對濾光片的精密度進行校準并保留記錄。 實驗過程中發(fā)現(xiàn)異常情況，應(yīng)隨時進行處理，可根據(jù)使用情況更換必要的部件。,（2）、移液器 1年至少應(yīng)該標定1次，發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)隨時進行校準。 標定方法包括有色溶液光譜分析法、稱量校準法、同位素計數(shù)法以及使用配套校準盒等。校準多

4、道移液器時，必須保證每一個加樣頭都能夠連續(xù)、準確地加樣。移液器的精密度應(yīng)在廠家說明書規(guī)定的范圍內(nèi)。,（3）、冰箱和孵育箱 必須每天檢查冰箱及孵育箱（水浴箱）的溫度，并做好記錄。 （4）、定期檢查其它儀器設(shè)備 精密儀器及出具實驗結(jié)果的儀器必須定期校準，其它儀器定期檢查并做好記錄。,7、文件和文件管理,（1）、 標準操作程序 (SOP) 艾滋病實驗室要建立覆蓋主要工作內(nèi)容的SOP文件，應(yīng)至少建立以下SOP（10個） ：（a）樣品的接收、登記和處理，（b）檢測方法和步驟，（c）儀器的使用維護和校準，（d）實驗中的質(zhì)量控制，（e）結(jié)果解釋與報告，（f）保密程序，（g）檢測數(shù)據(jù)的記錄與保存，（h）追蹤和

5、處理，（i）實驗室的清理和消毒，（j）實驗室安全防護。,SOP 的應(yīng)包括的內(nèi)容 a.標題和編號 b.編寫和修改日期 c.編寫和修訂人員姓名 d.方法、目的和應(yīng)用范圍 e.相應(yīng)的職業(yè)規(guī)范 f.檢測設(shè)備和試劑 h.安全防護相關(guān)步驟 i.結(jié)果的解釋和報告 j.附錄，包括相關(guān)的附加文件如標準表格、設(shè)備和試劑盒說明書等。,SOP由各崗位工作人員起草，實驗室主任審定，并應(yīng)定期修訂。修訂應(yīng)該在實驗室主管人員（技術(shù)負責人）的領(lǐng)導(dǎo)下進行，每年至少1次。所有工作人員要在所從事工作的SOP文件上簽名表示已經(jīng)閱讀并掌握了有關(guān)內(nèi)容,（2）實驗原始記錄 應(yīng)按實驗要求，設(shè)計操作的原始記錄，標明空白對照、陽性對照、陰性對照、

6、外部對照以及待檢樣品的位置，便于指導(dǎo)實驗人員加樣。要注明試劑盒生產(chǎn)廠家、測定方法、試劑批號和效期、實驗操作步驟、操作人員和復(fù)核人員姓名及檢測日期。,（3）、標本的登記 收到標本后，及時登記有關(guān)參數(shù)，包括受檢者姓名或代號、檢測編號、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類別、檢驗結(jié)果、送檢日期、報告日期、備注 ( 必要時記錄通信地址 )等。,（4）、HIV標本的保存記錄 包括HIV標本的類型、貯存量、貯存溫度、貯存起始時間以及標本保管人、復(fù)核人姓名。,（5）、 文件存檔 實驗原始記錄、酶標打印數(shù)據(jù)、免疫印跡試驗的膜反應(yīng)條帶或其照片、標本登記、標本保存記錄以及儀器設(shè)備維修和校準記錄等都應(yīng)該妥善存檔保存1

7、5年以上。最好同時使用計算機保存各種文件和記錄。,二、質(zhì)量控制（QC),實驗室內(nèi)為達到質(zhì)量要求的操作技術(shù)和活動，適用于得出檢驗結(jié)果所有的步驟和活動。 有些實驗室工作人員僅注重畫質(zhì)控圖， 這是一種“狹義的” 質(zhì)控; 檢驗的全過程質(zhì)控 (簡稱：全程質(zhì)控) 是一種“廣義的” 質(zhì)控。 （室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評價）,1、統(tǒng)計質(zhì)量控制方法,Levey-Jennings控制圖方法 Westgard多規(guī)則控制方法 累計和方法 平均數(shù)和極差方法 趨勢分析方法 利用病人數(shù)據(jù)分析方法 “即刻法”質(zhì)控方法（Grubbs）,2、開展質(zhì)量控制,（1）在試驗質(zhì)量要求的基礎(chǔ)上進行質(zhì)量控制的計劃 （2）選擇適當?shù)馁|(zhì)控規(guī)則和質(zhì)

8、控物個數(shù) （3）選擇適當?shù)馁|(zhì)控物 （4）應(yīng)用統(tǒng)計質(zhì)量控制 （5）失控情況的處理,3、質(zhì)量控制方法的確定,應(yīng)考慮使用何種質(zhì)控物，分析多少個質(zhì)控物，質(zhì)控物放在何位置，應(yīng)用何種質(zhì)控規(guī)則，何時評價質(zhì)控規(guī)則，以達到盡可能地降低假失控、假警告概率。,控制規(guī)則的使用(用功效函數(shù)圖評價),1.單個規(guī)則:例如12S或1S .聯(lián)合控制規(guī)則：例如12S與1S聯(lián)合； 12S與S與R4S聯(lián)合； .Westgard多規(guī)則質(zhì)控：1S與S與R4S 與S與X 平均數(shù)和極差控制方法 1S與累積和聯(lián)合規(guī)則,質(zhì)控規(guī)則與誤差檢出率假失控概率,單個控制規(guī)則不能提供對隨機誤差和系統(tǒng)誤差都好的靈敏度聯(lián)合規(guī)則中一些規(guī)則對隨機誤差敏感，一些規(guī)則

9、對系統(tǒng)誤差敏感 發(fā)展聯(lián)合規(guī)則的方法如下： 從考慮的控制規(guī)則中排除那些具有較高假失控概率的規(guī)則 從余下的規(guī)則中選擇至少一個規(guī)則對隨機誤差敏感，至少一個規(guī)則對系統(tǒng)誤差敏感 使用功效函數(shù)圖評價這種聯(lián)合規(guī)則的性能 選擇控制測定值個數(shù)(N)，其將給出檢出感興趣誤差的適當概率 （可耐受的假失控概率：工業(yè)選擇低至0.002的概率；臨床檢驗中一般0.01-0.05的假失控概率是合理的）,HIV抗體ELISA檢驗 質(zhì)量控制的實踐,（一）質(zhì)控物的制備和保存 質(zhì)控物的成分應(yīng)與檢測樣本的基質(zhì)相似或相同，為減少基質(zhì)效應(yīng)，應(yīng)盡可能的模擬。 1、內(nèi)對照和外對照 2、制備 3、保存,4、外部對照質(zhì)控物的使用 每一次實驗必須使

10、用外部對照質(zhì)控血清，以便監(jiān)控實驗的精密度和穩(wěn)定性，同時可以了解試劑盒的批間或板間差異，并可用于統(tǒng)計質(zhì)量控制。,5、外部對照質(zhì)控物的質(zhì)量要求 質(zhì)控物的管間或瓶間變異必須小，并且質(zhì)控物的成分應(yīng)在穩(wěn)定狀態(tài)中。質(zhì)控物應(yīng)無菌，并不含有影響ELISA反應(yīng)的防腐劑。,（二）、質(zhì)控圖的建立及應(yīng)用,最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，Westgard質(zhì)控圖。 1、質(zhì)控圖參數(shù) 平均值、標準差、控制限,質(zhì)控物的平均值和標準差應(yīng)建立在實驗室常規(guī)使用方法對質(zhì)控物重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個批次的檢測，每個批次中不少于4個質(zhì)控物測定結(jié)果，

11、以建立一個臨時性的平均值和標準差，當達到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時性的平均值和標準差。(NCCLS),2、質(zhì)控規(guī)則及使用 實驗室在報告實驗結(jié)果之前必須評價質(zhì)控數(shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計算機審核結(jié)果來決定。目前許多質(zhì)控規(guī)則已被采用，常用的是12S和13S規(guī)則。,（1）告警（12S）：當質(zhì)控物的測定值超出 +2s范圍時，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進一步觀察。若將12S做失控標準，有較高的假失控概率，所以一般不采用。 （2）失控（13S）：當質(zhì)控物的測定值超出 +3s范圍時，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實驗結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差或外部對照滴度下降造成。(隨機誤差引起的可能

12、性小于.),（3）位移：連續(xù)幾次（7-10次）外部對照S/CO值都落在均值的一側(cè)則稱為位移，提示實驗條件發(fā)生了較大的變化。 （4）趨勢：連續(xù)幾次（5-7次）外部對照S/CO值幾乎按一個方向分布時稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。,質(zhì)控規(guī)則的使用應(yīng)檢出隨機誤差和系統(tǒng)誤差，即具有高的檢出分析誤差的能力，同時應(yīng)具有較低的假失控概率。 考察試驗系統(tǒng)的可靠性應(yīng)采用多標準質(zhì)控方案，多規(guī)則質(zhì)控方法能提高誤差檢出，并具有低的假失控概率。,3、質(zhì)控圖的分析及失控處理 實驗室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。,當質(zhì)控已計劃并恰當?shù)貓?zhí)行時，要求可靠的平均值和標準差用于計算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當出現(xiàn)失控

13、時進行如重復(fù)質(zhì)控測定或重新分析新的質(zhì)控物不是最有效的方法，必須找出問題原因，找出解決故障的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。,檢驗誤差類型 1）隨機誤差：嚴密監(jiān)測和控制，使其限制在臨床允許的范圍之內(nèi)，并逐步使之縮小。 2）系統(tǒng)誤差：要求盡快發(fā)現(xiàn)，及時校正。 3）過失誤差：盡量消滅。 質(zhì)量控制的核心問題：在于努力分清誤差類型。,圖形分析及發(fā)現(xiàn)問題 1）曲線漂移： 2）趨勢性變化： 3）周期性變化：,失控后處理 失控原因的查找過程并無固定模式，一般原理是由易到難，由近到遠地查找 1）分析原始數(shù)據(jù)及初步估計失控原因： 2）對檢測過程進行回顧分析： 3）選擇性復(fù)查分析判斷失控原因： 4）決定處

14、理方法：,失控后處理失控原因初步查找,初步分析 防止檢測失敗的最有效的手段是開始實驗前仔細核對程序，預(yù)先估計程序各步驟。 如試劑使用前要平衡至室溫，保證合適的孵育溫度和時間，嚴格按試劑說明書操作等。如果以上都注意到了，但實驗仍失敗，以下建議可幫助發(fā)現(xiàn)問題。 a.與技術(shù)人員一起復(fù)習(xí)操作指導(dǎo)書，仔細檢查操作步驟中是否有遺漏或改變； b.核查試劑及各組分的失效期； c.核對孵育的溫度和時間； d.加樣器、洗扳機、酶標儀等是否正常，酶標儀的波長是否準確，加樣器和酶標儀是否校準； e.檢查蒸餾水的質(zhì)量； f.檢查試劑是否被污染，貯存是否合適。,原始數(shù)據(jù)分析 空白對照陰性對照陽性對照標準 一致：無明顯系統(tǒng)

15、誤差，失控原因在質(zhì)控血清或該管操作造成的可能性較大 分析同一瓶質(zhì)控血清的其他項目測定是否也有結(jié)果異常 有異常：質(zhì)控血清本身問題 無異常：該管操作有問題,不一致：該批檢測中可能有系統(tǒng)誤差，失控原因來自試劑儀器或操作等的可能性較大 觀察儀器檢測其他項目的結(jié)果有無異常 有異常：儀器原因 無異常：試劑或操作等原因 從質(zhì)控圖觀察失控是否發(fā)生在漸變的基礎(chǔ)上 是漸變：由漸變的誤差因素造成 不是漸變：由突然發(fā)生的誤差因素造成,原因分析,引起位移的原因有： a.使用一批新批號的試劑； b.更換了新的試劑； c.孵育溫度改變； d.新的技術(shù)人員（其加樣技術(shù)也許不同）； e.儀器改變（如加樣器等）。 引起趨勢的原因有： a.試劑失效；b.儀器有問題。 發(fā)生位移和趨勢的最常見原因是試劑或質(zhì)控品的失效，試劑盒中酶結(jié)合物最容易失效。另外，試劑在運輸和貯存條件不當時，也容易失效。,