助陽開郁顆粒主要藥學、抗抑郁作用及急性毒性研究

1、助陽開郁顆粒主要藥學、抗抑郁作用及急性毒性研究本課題建立了助陽開郁顆粒的制備工藝部分，以揮發(fā)油得量為評價指標，對對揮發(fā)油的提取工藝進行優(yōu)化；以揮發(fā)油包合率為指標，對揮發(fā)油的包合工藝進行優(yōu)化；總生物堿的含量為指標，對方中提取工藝進行優(yōu)化；以成形率、溶化性、吸濕性為指標，分別對噴霧干燥、輔料的種類以及干法制粒的工藝進行研究。也對助陽開郁顆粒質量標準進行初步的探究，采用薄層色譜法，對處方中炙甘草、黃柏、桂枝、砂仁進行定性鑒別；按照 2015 年版中國藥典附錄項下的方法，對該制劑的水分、粒度、溶化性、裝量差異等進行檢查；采用高效液相色譜法，對該制劑中的三種單酯型生物堿進行含量測定。對主要藥效學進行了研

2、究，通過采用慢性溫和不可預知性刺激復制大鼠抑郁模型，同種刺激因素不能連續(xù)進行，不能使動物預料刺激的發(fā)生，進行了曠場試驗、強迫游泳試驗，測定了大鼠血清中 Cort、ACTH、5-HT 的含量，進行抗抑郁作用的研究。助陽開郁顆粒對小鼠未見明顯毒性，在規(guī)定劑量下服用安全可靠。.前 言抑郁癥正逐漸成為臨床常見病。助陽開郁顆粒的研究開發(fā)，較好的適應了社會的需求，不僅具有較好的經(jīng)濟價值，更具有較為廣泛的社會價值，有助于促進家庭和諧、社會和諧，并提高抑郁患者的生活質量。針對目前西藥治療抑郁癥副作用大等問題，選擇醫(yī)院多年的臨床驗方為研究對象，將湯劑轉化為使用和攜方便的顆粒劑，作為治療抑郁癥的新型中藥制劑，具有

3、一定的創(chuàng)新性。以揮發(fā)油提取量為評價指標，進行工藝優(yōu)選，確定揮發(fā)油的最佳提取工藝。以揮發(fā)油包合率為評價指標，對揮發(fā)油的包合工藝進行優(yōu)選，確定其最佳的包合工藝。采用水提工藝對處方中其余藥味進行提取，以總生物堿的含量為評價指標，考察該處方的最佳提取工藝。以成形率、溶化性、吸濕性為指標，篩選出制備顆粒劑的噴霧干燥、干法制粒的最優(yōu)工藝以及最優(yōu)輔料配比。首次對山西臨床抗抑郁有效方陽開郁湯進行制劑研究，將科學研究與弘揚三晉文化相結合。組方原則特色明顯，中醫(yī)認為郁證是由于情志不舒、氣機郁滯所引起的，通常采用疏肝解郁的方法來治療。而助陽開郁顆粒的創(chuàng)新性采用溫補腎陽來實現(xiàn)腎水足、脾土暖、心火生、肝木長、肝郁開舒，

4、諸郁化解，為治療抑郁癥開辟新的途徑。.第一部分 制備工藝的優(yōu)化第一節(jié) 揮發(fā)油的提取及包合工藝的優(yōu)化揮發(fā)油 β-CD 包和物的制備方法通常采用飽和水溶液法和研磨法6。采用飽和水溶液法：稱取 β-CD 8g，加水 100 mL 加熱使其溶解，并冷卻至恒溫備用。緩緩將 2mL 的揮發(fā)油與 2 mL 的乙醇加入到已溶解的溶液中，在 40下攪拌器上攪拌 3 h，放冷 24 h 取結晶，抽濾，包和物加乙醇多次洗滌，置于 40干燥箱中干燥得包合物備用。采用研磨法：稱取 β-CD 8g，加入 4 倍量水，在乳缽中沿同一方向研磨 15 min，將 2mL 的揮發(fā)油與 2mL 的乙醇

5、加入到 β-CD 的水溶液中，研磨 3 h 成糊狀，放冷 24 h 取結晶,抽濾，包和物加無水乙醇多次洗滌，置于 40干燥箱中干燥得包合物備用。以藥物包和率和包合物收得率為指標7，采用飽和試驗號 揮發(fā)油量（mL） 平均值 RSD（%）1 3.202 3.18 3.21 0.953 3.24水溶液法和研磨法各平行制備包和物三份，比較包合效果。結果得出藥物包和率平均值分別為 36.65%、40.58%、60.78%，包合物收得率平均值分別為 69.34%、75.78%、80.67%，所以采用研磨法。第二節(jié)助陽開郁顆粒的水煎煮工藝優(yōu)選臨床用的是湯劑，療效確切，為了更好的適應臨床需要，所以提

6、取方法采用水煎煮法。采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，將砂仁（搗碎）、蛤粉、牡蠣、桂枝、黑順片藥材放入蒸餾燒瓶中，加 12 倍量的水（約 1600mL），浸泡 0.5h，用揮發(fā)油提取器提取揮發(fā)油 5h，得揮發(fā)油。加 5 倍量的 β-環(huán)糊精，用飽和水溶液法包合揮發(fā)油 4h，抽濾，加乙醇洗滌 3 次，低溫干燥，粉碎，備用。藥渣和藥液備用，再將茯苓、炙甘草、黃柏加水煎煮，第一次加 8 倍量的水（約 1000mL），煎煮 1.5h，第二次加 6 倍量水（約 800mL），煎煮 1h，將兩次的煎液和上述藥渣和藥液合并，離心，取上清液。減壓濃縮至相對密度在 1.15-1.20（50-60），烘干，并研

7、磨成細粉，加入 β-環(huán)糊精包合物的細粉，混和均勻。.第二部分 質量標準研究.28第一節(jié) 薄層色譜鑒別方法的建立.28第二節(jié) 含量測定方法的建立.33第三部分 助陽開郁顆粒動物實驗研究.42第一節(jié) 抗抑郁藥效研究.42第二節(jié) 急性毒性初步研究.49結 論.53.第三部分 助陽開郁顆粒動物實驗研究第一節(jié) 抗抑郁藥效研究空白組大鼠未檢明顯異常行為狀態(tài)，體重呈緩慢增長狀態(tài)；模型組大鼠表現(xiàn)為易激惹，掙扎，有活動減少的狀態(tài)，且對外界刺激反應減少，安靜時埋首、拱背，大便松散且含水量大，皮毛失去光澤，體重與其他各組存在明顯差異；給藥組后體重能有所增長，易暴易怒的癥狀有所緩解49。實驗前夜禁食禁水，實

8、驗開始時，將大鼠的飲用水改為 150 mL1%新鮮蔗糖溶液，2h 后撤走水瓶，通過稱飲水瓶的重量計算大鼠蔗糖飲水量，其余時間水食不限，分別在造模前、造模后、給藥 1 周、給藥 2 周進行蔗糖飲水基線的測定。如表 3-1、圖 3-1 。由圖結果可知，模型組與空白組相比較，模型組的蔗糖飲水量顯著低，表明抑郁模型造模成功；治療組與模型組相比較，治療組的蔗糖飲水量顯著升高，說明治療組的大鼠抑郁癥狀有明顯的緩解，證明助陽開郁顆粒有一定的治療抑郁的療效。實驗結果可知，與空白組比較，模型組曠場實驗大鼠穿越橫格數(shù)和直立次數(shù)均顯著減少；給藥 21 天后，與模型組比較，陽性藥組以及助陽開郁藥組各劑量組的大鼠穿越橫

9、格數(shù)和直立次數(shù)顯著增加,結果見表 3-2。第二節(jié) 急性毒性初步研究隨機選取 40 只小鼠，雌雄各半，禁食不禁水 12h。實驗前稱重，按體質量隨機分為給藥和對照組。給藥組以本品可供灌胃的最大濃度 4.74g/mL，小鼠灌胃可承受的最大體積40mL/kg，一天內給藥3次，相當于臨床擬用劑量的306.30倍56，給藥間隔不進食，給藥 5h 之后自由進食進水，對照組給予同等體積的生理鹽水，連續(xù)觀察兩周，詳細記錄動物每天的體質量、飲食量、飲水量以及死亡等情況57。兩周之后進行解剖，觀察各組臟器有無病變。半數(shù)致死量是藥物急性毒性實驗評價的一個重要指標，LD50越大，藥物的毒性可能越低，本實驗未測出助陽開郁

10、顆粒灌胃給藥小鼠的 LD50。最大耐受量實驗結果表明，小鼠灌胃助陽開郁顆粒最大耐受劑量189.6g·kg-1，在相當于臨床擬用劑量 102.10 倍時未見明顯毒性，是一個比較安全的中藥顆粒劑，為其進一步開發(fā)奠定了基礎。.參 考 文 獻1顧牛范,李華芳.抑郁癥藥物治療新進展J.中國臨床藥學雜志,2012,11(04):251-255.2 張 桂 華 , 李 松 芝 , 伊 茂 森 . 老 年 期 抑 郁 癥 的 藥 物 治 療 選 擇 J. 山 東 精 神 醫(yī)學,2009,17(02):117-120.3潘集陽.老年抑郁癥的抗抑郁藥物治療最新進展J.中國處方藥雜志,2015,1(3

11、4):55-57.4王來海.抑郁癥治療藥物研究新進展J.臨床心身疾病雜志,2014,10(01):70-72.5王玉鋒,侯公林.抑郁癥近代藥物治療J.第四軍醫(yī)大學學報,2006,27(16):1526-1528.6Kessler RC,Berglund P,Demler O.The epidemiology of major de-pressive disorder:results from the national comorbidity survey replication(NCS-R)J.JAMA,2003,89(02):30957Youdim MB,Weinstock M.Therap

12、eutic applications of selective and non-selective inhibitors of monoamine oxidase A and B that do not cause significant tyramine potentiation J.Neurotoxicolo-gy,2004,25(1-2):2438Freeman MP，Rapaport MH.Omega-3 fatty acids and depression:from cellular mechanisms toclinical careJ.J Clin Psychiatry.2011,72(02):2589Tandt H,Audenaert K.SSRIs(selective sero