植物生化制藥第五章核酸類藥物

1、第五章 核酸類藥物 第一節(jié) 概述 核酸是以核苷酸為基本組成單位的生物大分 子，攜帶和傳遞遺傳信息。 98% 98%分布于細(xì)胞核，其余分布于核外 如線粒體，葉綠體。 主要分布于細(xì)胞質(zhì)（90%90%），剩 余10%10%位于細(xì)胞核。 (deoxyribonucleic acid, DNA) (ribonucleic acid, RNA) 脫氧核糖核酸 核糖核酸 攜帶遺傳信息，決定細(xì)胞和個(gè) 體的基因型(genotype)。 參與細(xì)胞內(nèi)DNA遺傳信息的表 達(dá)。某些病毒RNA也可作為遺 傳信息的載體。 核酸 堿基 戊糖 核苷 磷酸 核苷酸 核酸類藥物是具有藥用價(jià)值的核酸、核苷酸、核苷以 及堿基的統(tǒng)稱。除

2、了天然存在的堿基、核苷、核苷酸 外，它們的類似物、衍生物或這些類似物、衍生物的 聚合物也屬于核酸藥物。 一、RNA的制備 （一）材料的選擇與預(yù)處理 制備RNA的材料要選擇含核酸量豐富的組織。 RNA的含量和細(xì)胞的活躍程度有關(guān)，在蛋白質(zhì)合成旺盛的 細(xì)胞中，其核酸的含量也相應(yīng)地較高。 第二節(jié) 核酸類藥物的一般制備方法 組織勻漿 沉淀物（DNA、蛋白質(zhì)等） 上清液（RNA等） 殘留物（DNA等） 酸提取液（RNA） 堿處理 酸處理 殘留物 脂溶性物質(zhì) 有機(jī)溶 劑處理 殘留物 酸溶性小分子 冷酸處理 1. 酸處理法 將經(jīng)酸和有機(jī)溶劑處理后的殘留物用1mol/L的過氯酸液 于4下處理18 h，從中抽提出

3、RNA，沉淀部分再用 0.5mol/L的過氯酸液70 下處理20 min提取DNA。 此法的缺點(diǎn)是有些材料的DNA在冷過氯酸抽提時(shí)被少量提取 ，從而使RNA部分中混有少量的DNA。 2. 堿處理法 將殘留物用1mol/L的NaOH溶液于37 處理過夜，則RNA 被堿解為堿溶性核苷酸，DNA不溶解。加入過氯酸或三氯乙 酸使溶液酸化，至酸濃度為5%-10%,此時(shí)，RNA的分解產(chǎn) 物溶解在上清液中，DNA等則被沉淀下來。此法的優(yōu)點(diǎn)是 RNA和DNA分開得較為徹底，缺點(diǎn)是RNA中還含有其他含 磷化合物，如磷肽，磷酸肌醇等。 （二）提取與純化 1. 提取 （1）乙醇沉淀法 （2）去污劑處理法 （3）酚法

4、 2. 純化 （1）密度梯度離心法 （2）柱色譜法 （3）凝膠電泳法 （三）含量測(cè)定 定磷法 定糖法 Vit C RNA中的戊核糖可在鹽酸的水解作用下游離出來，進(jìn)一步形成糠醛，然 后與地衣酚反應(yīng)，反應(yīng)物程鮮綠色，在670nm有最大吸收峰。 二、DNA的制備 材料的選擇與處理 2. 提取與純化 3. 含量測(cè)定 （1）定磷法 同RNA （2）定糖法 又稱二苯胺法，在酸性溶液中，將DNA與二苯胺共 熱，形成藍(lán)色化合物，該化合物在595nm有最大吸收 。當(dāng)DNA濃度在20-200ug/mL時(shí)，光吸收度與DNA濃 度呈正比。 三、核苷酸、核苷及堿基的制備 （一）制備方法 1. 直接提取法 2. 水解法

5、（1）酶水解法 （2）堿水解法 （3）酸水解法 3. 化學(xué)合成法 4. 酶合成法 5. 微生物發(fā)酵法 光合磷酸化法制備ATP的工藝流程 5-AMP 溶解，混合 Na2HPO4，Tris，PMS 肌激酶，ATP（引子） 混合液 反應(yīng)液ATP粗制品上清液 濾液 ATP成品ATP沉淀 洗脫液（含ATP） 吸附物流出液 光合 葉綠體 pH3,1-1.5h 沉淀 三氯乙酸 10以下 提取 乙醇 10 4-5h 干燥 乙醇，乙醚 減壓 去陽(yáng)離子 732樹脂 pH61212 除熱源、沉淀 硅藻土、乙醇 去雜質(zhì) 蒸餾水、硅藻土 洗脫 NaCl溶液 pH3.8 吸附 NaOH，717樹脂 pH6.5-7 ATP

6、ATP的藥理作用與臨床應(yīng)用 在生物體內(nèi)，ATP廣泛參與各種生化過程，除參與核酸 形成外，主要起著供應(yīng)能量和磷酸基團(tuán)的作用。 ATP除了作為危重病人搶救的輔助藥物外，還可對(duì)慢 性肝炎、肝硬化、腎炎、心肌炎、冠狀動(dòng)脈硬化、進(jìn)行性 肌肉萎縮、再生障礙性貧血、腦血管意外后遺癥、中心性 血管痙攣性視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、耳聾、耳鳴 等有一定療效。 第五章 酶類藥物 第一節(jié) 概述 一、酶類藥物發(fā)展簡(jiǎn)史 酶類藥物是直接用各種劑型的酶以改變體內(nèi)酶活力，或 改變體內(nèi)某性質(zhì)生物活性物質(zhì)和代謝產(chǎn)物的數(shù)量等，從而達(dá) 到治療某些疾病的目的。 1926年，Sumner將尿素酶結(jié)晶是藥用酶工業(yè)化的起點(diǎn)。 1952年，

7、Innerfield首次將結(jié)晶的胰蛋白酶用于治療血栓性靜 脈炎，真正揭開了酶在醫(yī)療應(yīng)用的序幕。 20世紀(jì)60年代后期，逐漸發(fā)展到從微生物發(fā)酵液中獲得大量 的酶。 70年代后，開始利用人的某些組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)和基因工程 手段來獲取有關(guān)的酶，使酶類藥物的應(yīng)用得到了迅速發(fā)展。 對(duì)酶類藥物的要求 1. 藥用酶應(yīng)在生理環(huán)境（pH中性）下具有最高活力和穩(wěn)定性 。 2. 對(duì)其作用的底物具有較高的親和力。 3. 在血清中半衰期較長(zhǎng)。 4. 要求純度高，特別是對(duì)注射用的酶類藥物純度要求更高。 5. 酶應(yīng)免疫源性較低或無免疫源性。 二、酶的分子組成及分類 1. 酶分子的組成 單體酶 寡聚酶 多酶復(fù)合體 酶 有機(jī)物

8、分 子 金屬有機(jī) 物 金 屬輔酶或輔基（非蛋白部分） 酶蛋白 復(fù)合蛋白質(zhì) 單純蛋白質(zhì)（單體酶） 2. 酶的分類 分類 名稱 催化反應(yīng)的類 型 實(shí)例 1 氧化還原酶 電子轉(zhuǎn)移 醇脫氫酶 2 轉(zhuǎn)移酶 轉(zhuǎn)移功能基 團(tuán) 己糖激酶 3 水解酶 水解反應(yīng) 胰蛋白酶 4 裂合酶 鍵的斷裂 丙酮脫羧酶 5 異構(gòu)酶 分子內(nèi)基團(tuán)的 轉(zhuǎn)移 順丁烯二酸異構(gòu)酶 6 連接酶或合成酶 鍵形成與水 解偶聯(lián) 丙酮羧化酶 表6-1 6-1 酶的國(guó)際分類 三、酶類藥物的臨床應(yīng)用 1. 消化酶類 2. 抗炎、黏痰溶解酶 3. 與纖維蛋白溶解作用有關(guān)的酶類 4. 抗腫瘤的酶類 5. 其它生理活性酶 6. 復(fù)合酶 表6-2 酶類藥 物一

9、覽表 第二節(jié) 酶類藥物的一般制備方法 酶制備過程的特點(diǎn)： 一是某種酶在生物體內(nèi)含量甚少，且有分布部位特異性。 二是酶可以通過測(cè)定其活力加以跟蹤。 酶制備一般包括四個(gè)步驟：酶的原材料的選擇與處理；酶的 提??；酶的純化；酶活力的測(cè)定和純度檢測(cè)。 一、酶的原材料選擇與預(yù)處理 （一）原材料的選擇 （1）了解目的酶在生物材料中的分布特點(diǎn)，選擇適宜的 生物材料。 （2）考慮生物在不同發(fā)育階段及營(yíng)養(yǎng)狀況時(shí)，酶含量的 差別及雜質(zhì)干擾的情況。 （3）原料來源是否豐富，原料易得，原料產(chǎn)地較近。 （4）提取步驟是否簡(jiǎn)便易行。 用植物組織作原料，要擇時(shí)采集并就地去除不用部分， 將有用部分保鮮處理。 （二）原材料的預(yù)處

10、理 1. 機(jī)械法 2.反復(fù)凍融法 3. 超聲波法 4. 酶解法 5. 丙酮粉法 二、酶的提取 1. 水溶液法 常用稀鹽溶液或緩沖液提取，經(jīng)過預(yù)處 理的原料，包括組織糜，勻漿，細(xì)胞顆粒，丙酮粉都 可用水溶液抽提。 水溶液的pH選擇對(duì)抽提具有影響，應(yīng)考慮的因素有： 酶的穩(wěn)定性 酶的溶解性 酶與其他物質(zhì)結(jié)合的性質(zhì) 選擇pH的總原則是，在酶穩(wěn)定的pH范圍內(nèi)，選擇偏離 等電點(diǎn)的適當(dāng)?shù)膒H。 2. 有機(jī)溶劑法 某些結(jié)合酶，由于和脂質(zhì)結(jié)合牢固， 需用有機(jī)溶劑除去脂質(zhì)，且不能使酶變性。常用有機(jī)溶 劑是丁醇。 丁醇性質(zhì)：親脂性強(qiáng)、兼具親水性、在脂與水分子間能 起表面活性劑的橋梁作用。 丁醇提取方法：均相法和兩相

11、法 3. 表面活性劑法 三、酶的純化 不同的酶，因性質(zhì)不同，其純化工藝可能有很大不同。 評(píng)價(jià)一個(gè)純化工藝好壞，主要看兩個(gè)指標(biāo)：酶比活和總活 力回收率。 （一）雜質(zhì)的除去 1. 調(diào)pH和加熱沉淀法（核糖核酸酶，溶菌酶的提?。?2. 蛋白質(zhì)表面變性法（CAT用氯仿提取） 3. 選擇性變性法（細(xì)胞色素C可用三氯醋酸提?。?4. 降解或沉淀核苷酸法 5. 利用結(jié)合底物保護(hù)法除去雜蛋白（D-甲基苯甲酸為D-氨 基酸氧化酶的保護(hù)劑） （二）脫鹽和濃縮 1. 脫鹽 （1）透析 （2）凝膠過濾 2. 濃縮 （1）蒸發(fā) （2）超濾法 （3）凝膠吸水法 （4）冷凍干燥法 （三）酶的結(jié)晶 1. 鹽析法 2. 有機(jī)溶

12、劑法 3. 透析平衡法 4. 等電點(diǎn)法 四、酶活力的測(cè)定與純度檢驗(yàn) 1. 活力測(cè)定 無論在酶的抽提純化過程中或是對(duì)酶的性質(zhì)進(jìn)行研究 過程中為了了解所選擇方法是否適宜，幾乎每一步驟前后 都應(yīng)進(jìn)行酶的活力測(cè)定，做出總活力和比活力的比較。 2.純度檢測(cè) 在酶的分離提純中，總活力用于計(jì)算某一抽提或純化 步驟后酶的回收率（Y），而比活力則用于計(jì)算某一純化 步驟的效果，即純度的提高（E），其關(guān)系如下： Y=某步驟后的總活力/某步驟前的總活力 E=某步驟后的比活力/某步驟前的比活力 五、菠蘿蛋白酶 是從菠蘿汁或加工菠蘿削下的廢皮中提取的一種蛋白水解 酶，粗菠蘿水解酶是各種成分的混合物，除蛋白水解酶系外 ，還

13、含有磷酸酯酶、過氧化物酶、纖維素酶、其它糖苷酶及 非蛋白物質(zhì)。 實(shí)驗(yàn)證明，菠蘿蛋白酶具有消炎抗水腫作用，作用特點(diǎn)是 能選擇性水解纖維蛋白，對(duì)與凝血有關(guān)的纖維蛋白原僅有微 弱的作用，不影響正常血液的凝固。能分解肌纖維，可單獨(dú) 或與胰蛋白酶制成合劑使用，消除各種單純性炎癥、水腫、 血腫，促進(jìn)抗生素和化療藥物的滲透和擴(kuò)散。 臨床適用于治療支氣管哮喘、急性肺炎、產(chǎn)后乳房充血、 乳腺炎、產(chǎn)后血栓靜脈炎、視網(wǎng)膜炎等。試用于同抗生素配 伍治療關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)周圍炎、蜂窩組織炎和小腿潰瘍等。 （一）化學(xué)性質(zhì)和組成 白色至淺棕黃色無定形粉末。略溶于水，水溶液無色至 淡黃色，有時(shí)有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚，為

14、一種巰基酶。半胱氨酸能激活酶的活性，但受重金屬抑 制。最適pH7.0，相對(duì)分子量33000。 主要作用原理：使多肽類水解為低分子量的肽類。 （二）生產(chǎn)工藝（白陶土吸附法） （吸附） 白陶土 10 菠蘿蛋白酶成品濕菠蘿蛋白酶精制品 澄清液 粗制品 （沉淀） HCl pH4 （溶解） 自來水， NaOH 洗脫液 （鹽析、抽濾） HCl，（NH4）2SO4 pH=4.55 吸附物 （洗脫） Na2CO3或NaOH （NH4）2SO4 pH=6.57 壓出液 菠蘿皮 （壓榨） 苯甲酸鈉 （干燥、粉碎） pH77.5 （三）檢驗(yàn)方法 1. 性狀 富有菠蘿香氣，淺黃色或淺棕黃色粉末。 2. 蛋白酶水解活力

15、測(cè)定 （1）原理 菠蘿蛋白酶在一定溫度與pH條件下，水解 酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸終止酶反應(yīng)，并沉淀 除去未水解的蛋白，濾液對(duì)紫外光有吸收，用紫外分 光光度計(jì)法測(cè)定，根據(jù)吸光度計(jì)算酶活力。 （2）酶活力單位定義 在測(cè)定條件下 pH7.0，（ 37+0.2），每分鐘水解酪蛋白釋放出的三氯乙酸可 溶物在275nm的吸光度與1g酪氨酸的吸光度相當(dāng)時(shí)， 所需酶量為1U。 （3）測(cè)定步驟 適當(dāng)稀釋樣品后，精密量取樣品待測(cè)液1mL，置于具 塞試管中，于，37預(yù)溫10min，迅速加入37預(yù)溫的酪 蛋白溶液5mL，從開始加入起準(zhǔn)確反應(yīng)10min，加入三氯 乙酸溶液5mL，混勻，保溫10min后過濾。 另量

16、取1mL待測(cè)樣品液于37預(yù)溫10min，精密加入三 氯乙酸溶液5mL，準(zhǔn)確反應(yīng)10min，加入酪蛋白溶液5mL ，搖勻，保溫10min后過濾，濾液作為上述溶液的空白對(duì) 照。用分光光度計(jì)在275nm的波長(zhǎng)處測(cè)吸光度A。 以水做空白對(duì)照，在275nm的波長(zhǎng)處測(cè)定50g/mL酪氨 酸吸光度A。 （四）菠蘿蛋白酶在醫(yī)藥、保健品業(yè)的應(yīng)用 1、抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng) 經(jīng)相關(guān)臨床研究觀察表明，菠蘿蛋白酶能抑制腫瘤 細(xì)胞的生長(zhǎng)。 2、對(duì)心血管疾病的防治 菠蘿蛋白酶作為蛋白水解酶對(duì)心血管疾病的防治是 有益的。它能抑制血小板聚集引起的心臟病發(fā)作和中風(fēng), 緩解心絞痛癥狀,緩和動(dòng)脈收縮, 加速纖維蛋白原的分解。 3、用于

17、燒傷脫痂 菠蘿蛋白酶能選擇性地除 皮, 使新皮移植得以盡早進(jìn) 行。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明, 菠蘿蛋白酶對(duì)鄰近的正常皮膚無不良 影響。局部使用抗生素不影響菠蘿蛋白酶的效果。 4、消炎作用 菠蘿蛋白酶在各種組織中能有效地治療炎癥和水 腫(包括血栓靜脈炎、骨骼肌損傷、血腫、口腔炎、糖 尿病人潰瘍及運(yùn)動(dòng)損傷)，菠蘿蛋白酶具有激活炎癥反 應(yīng)的潛力。菠蘿蛋白酶還可治療腹瀉。 5、增進(jìn)藥物吸收 將菠蘿蛋白酶與各種抗生素(如四環(huán)素, 阿莫西林等 )聯(lián)用, 能提高其療效。相關(guān)研究表明, 它能促進(jìn)抗生素 在感染部位的傳輸, 從而減少抗生素的用藥量。據(jù)推斷, 對(duì)于抗癌藥物, 也有類似的作用。此外，菠蘿蛋白酶能 促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的

18、吸收。 第七章 多糖類藥物 第一節(jié) 糖類藥物概述 按照含有糖基數(shù)目的不同分為: 單糖：葡萄糖、果糖、氨基葡萄糖和維生素C等。 低聚糖：蔗糖、麥芽糖、乳糖等。 多糖：（糖類藥物研究的最多是多糖類藥物 ）多糖如有 旋糖酐、甘露聚糖、香菇多糖、茯苓多糖等。 還有一些糖類藥物是糖的衍生物，如6-磷酸葡萄糖，1， 6-二磷酸果糖，磷酸肌醇等。 多糖的藥理作用 （1）調(diào)節(jié)免疫功能 主要表現(xiàn)為影響抗體活性，促進(jìn)淋巴 細(xì)胞增殖，激活或提高吞噬細(xì)胞的功能。增強(qiáng)機(jī)體的抗 炎、抗氧化和抗衰老作用。 （2）抗感染作用，多糖可以提高機(jī)體組織細(xì)胞對(duì)細(xì)菌， 原蟲，病毒和真菌感染的抵抗力。 （3）促進(jìn)細(xì)胞DNA，蛋白質(zhì)的合成

19、，促進(jìn)細(xì)胞的增殖、 生長(zhǎng)。 （4）抗輻射損傷作用，抗射線的損傷，有抗氧化、防輻 射作用。 （5）抗腫瘤和抗凝血作用，肝素是天然抗凝劑。 （6）降血脂和抗動(dòng)脈粥樣硬化功能。硫酸軟骨素、小分 子肝素、殼聚糖等具有降血脂、降血膽固醇，抗動(dòng)脈粥樣 硬化作用，用于防治冠心病和動(dòng)脈硬化。 多糖 結(jié)合型 游離型 脂多糖：與脂類結(jié)合在一起 糖蛋白：與蛋白質(zhì)結(jié)合在一起 多糖的相對(duì)分子量較大，有直鏈和支鏈兩種，多可溶 于水，水溶液具有一定的黏度，能被酸、堿和酶水解成單 糖或低聚糖。 多糖根據(jù)來源不同可分為： (1) 植物多糖：黃芪多糖，人參多糖。 (2) 動(dòng)物多糖：肝素，透明質(zhì)酸，硫酸軟骨素等。 (3) 微生物多

20、糖：香菇多糖，靈芝多糖。 第二節(jié) 糖類藥物的一般制備技術(shù) 一、單糖、低聚糖及其衍生物的制備 用水或在中性條件下以50乙醇，也可以用82乙醇， 在7078下回流提取。溶劑用量一般為材料的10倍，需多 次提取。 植物材料磨碎經(jīng)乙醚或石油醚脫脂，拌加碳酸鈣，以50 乙醇溫浸，浸液合并，于4045減壓濃縮至適當(dāng)體積，用 中性醋酸鉛去雜蛋白及其他雜質(zhì)，鉛離子可通H2S除去，再濃 縮至粘稠狀。 以甲醇或乙醇溫浸，去不溶物如無機(jī)鹽或殘留蛋白質(zhì)等。 醇液經(jīng)活性炭脫色、濃縮、冷卻、滴加乙醚，或置于硫酸 干燥器中旋轉(zhuǎn)，析出結(jié)晶。單糖或小分子寡糖也可以在提取 后，用吸附層析法或離子交換法進(jìn)行純化。 二、多糖的分離與

21、純化 多糖可來自動(dòng)物、植物和微生物 ，植物體內(nèi)含有水解 多糖衍生物的酶，必須抑制或破壞酶的作用后，才能制取 天然存在形式的多糖。 提取多糖的材料必須新鮮或及時(shí)干燥保存，避免受高 溫破壞因此，速凍冷藏是保存材料的有效方法。 提取所用溶劑根據(jù)多糖的溶解性質(zhì)而定。 （一）多糖的提取 提取多糖時(shí)，一般先需進(jìn)行脫脂，以便多糖釋放。 方法是將材料粉碎，用甲醇或1 1乙醇乙醚混合液，加 熱攪拌13小時(shí)，也可用石油醚脫脂。動(dòng)物材料可用丙 酮脫脂、脫水處理。 1、稀堿液提取 用于難溶于冷水、熱水，可溶于稀堿液者。這一 類多糖主要是不溶性膠類，如木聚精、半乳聚糖等。 用冷水浸潤(rùn)材料后用0.5 molL NaOH提

22、取，提取液 用鹽酸中和、濃縮后，加乙醇沉淀得多糖。 如在稀堿中仍不易溶出者，可加入硼砂，對(duì)甘露 聚糖、半乳聚糖等能形成硼酸絡(luò)合物的多糖，此法可 得相當(dāng)純的物質(zhì)。 2、溫?zé)崴崛?易溶于溫水、難溶于冷水和乙醇者。材料用冷水浸過 ，用熱水提取，必要時(shí)可加熱至8090攪拌提取。 提取液用正丁醇與氯仿混合液除去雜蛋白（或用三氯 乙酸除雜蛋白），離心除去雜蛋白后的清液，透析后用 乙醇沉淀得多糖。 3、粘多糖 因大部粘多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合于細(xì)胞中，因此需用酶解 法或堿解法使糖-白質(zhì)間的結(jié)合鍵斷裂，促使多糖釋放。 （1）堿解法 多糖與蛋白質(zhì)結(jié)合的糖肽鍵對(duì)堿不穩(wěn)定，故 可用堿解法使糖與蛋白質(zhì)分開。 （2）酶解法

23、蛋白酶水解法已逐步取代堿提取法而成為提取多糖的 最常用方法。 鑒于蛋白酶不能斷裂糖肽鍵及其附近的肽鍵，為除去 長(zhǎng)肽段，常與堿解法合用。 常用的酶制劑有胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和鏈霉菌蛋白酶 及枯草桿菌蛋白酶。 （二）多糖的純化 1. 乙醇沉淀法 乙醇沉淀法是制備粘多糖的最常用手段。乙醇的加入 ，改變了溶液的極性，導(dǎo)致糖溶解度下降。 向溶液中加入一定濃度的鹽，如醋酸鈉，醋酸鉀、醋 酸銨或氯化鈉有助于使粘多糖從溶液中析出，鹽的最終 濃度5即足夠。 多次乙醇沉淀法脫鹽，也可以用超濾法或分子篩法（ SephadexG-10或G-15）進(jìn)行多糖脫鹽。 沉淀物可用無水乙醇、丙酮、乙醚脫水，真空干燥即可 得疏松

24、粉末狀產(chǎn)品。 2. 分級(jí)沉淀法 不同多糖在不同濃度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶 解度不同，因此可用不同濃度的有機(jī)溶劑分級(jí)沉淀分 子大小不同的粘多糖。 在Ca2+、Zn2+等二價(jià)金屬離子的存在下，采用乙 醇分級(jí)分離粘多糖可以獲得最佳效果。 3. 季胺鹽絡(luò)合法 粘多糖與一些陽(yáng)離子表面活性劑如十六烷基三 甲基溴化銨（CTAB）和十六烷基氯化砒啶（CPC） 等能形成季胺鹽絡(luò)合物。 絡(luò)合物在低離子強(qiáng)度的水溶液中不溶解，在離子 強(qiáng)度大時(shí)，絡(luò)合物可以解離、溶解、釋放。 （三）多糖藥物的鑒定檢測(cè)方法 1. 定量測(cè)定 （1）苯酚-硫酸法 （2）蒽酮-硫酸法 （3）氨基己糖的比色測(cè)定 先在鹽酸溶液中將氨基己糖經(jīng) 堿性

25、乙?；?，再與對(duì)二甲基苯甲酸發(fā)生呈色反應(yīng)，從而 進(jìn)行定量測(cè)定。 2.鑒別 （1）測(cè)定糖基組成 （2）高壓電泳法鑒定多糖均一性 （3）超離心法鑒定多糖均一性 （4）凝膠柱色譜法鑒定多糖均一性 （5）分子量測(cè)定 第三節(jié) 香菇多糖 一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 為白色粉末狀固體，對(duì) 光和熱穩(wěn)定。溶于水和 0.5mol/L的NaOH，不溶 于甲醇、乙醇、丙酮等 有機(jī)溶劑。 二、生產(chǎn)工藝 1.常規(guī)提取法 鮮香菇 搗碎 浸漬 過濾 濃縮 乙醇沉淀 乙醇、乙醚洗滌 干燥 成品 2. 復(fù)合酶提取法 3. 深層培養(yǎng)提取法 三、質(zhì)量檢測(cè) 1.試劑 濃硫酸：分析純，95.5% 苯酚：80g苯酚加20g水使之溶解，可置冰箱中長(zhǎng)期貯

26、存 。 6%苯酚：臨用前用80%苯酚配制。 標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖、葡萄糖或標(biāo)準(zhǔn)香菇多糖。 2. 方法 （1）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線 準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖20mg溶于 500mL容量瓶中加水至刻度，分別吸取0.4mL、 0.6mL、0.8mL、1.0mL、1.2mL、1.4mL、1.6mL及 ，1.8mL各用水補(bǔ)充至2.0mL，然后加入6%苯酚 1.0mL以及濃硫酸5.0mL，靜止10min，搖勻，室溫放 置20min。在490nm處測(cè)光密度，以2.0mL水按同樣顯 色操作作為空白，橫坐標(biāo)為多糖微克數(shù)，縱坐標(biāo)為光 密度值，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。 （2）樣品含量測(cè)定。吸取1mL樣品，按上述步驟操 作，測(cè)光密度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多糖

27、含量。 第八章 脂 類 藥 物 第一節(jié) 概 述 脂類物質(zhì)是廣泛存在于生物體中的脂肪及類似脂肪 的、能夠被有機(jī)溶劑提取出來的化合物，由于分子中的 碳?xì)浔壤驾^高，能夠溶解在乙醚、氯仿、苯等有機(jī)溶 劑中，不溶于水。脂類化合物的這種性質(zhì)，稱之為脂溶 性，利用這一性質(zhì)，將脂類物質(zhì)用有機(jī)溶劑從生物體中 提取出來。 實(shí)際上，脂類藥物往往是互溶在一起的，依據(jù)脂溶 性這一共同特點(diǎn)歸為一大類成為脂類，而不是一個(gè)準(zhǔn)確 的化學(xué)名詞。 脂類藥物是具有重要生理生化、藥理藥效作用的脂類物質(zhì) 。 大體可分為以下幾類： 膽汁酸類，如膽酸、脫氧膽酸。 不飽和脂肪酸類，如花生四烯酸、亞麻油酸等； 磷脂類，如：卵磷脂、腦磷脂； 固醇類，如：膽固醇、麥角固醇； 色素類，如：膽紅素、血紅素等； 其他，如鯊烯等。 一、脂類藥物的制備方法 1. 直接抽提法 2. 水解法 3. 化學(xué)合成 4. 生物合成法 二、脂類藥物的分離 1. 溶解度法 2. 吸附分離法 3. 超臨界流體萃取技術(shù) 待分離物質(zhì) 提 取 溶 劑 （腦干提取液） 丙酮 乙醇 乙醚 膽固醇 卵磷脂 腦磷脂 超臨界流體（supercritical fluid, SF） 是指某種氣體（液體）或氣體（液體）混合物在操作壓力和 溫度均高于臨界點(diǎn)時(shí)，使其密