北柴胡莖葉化學成分研究論文

1、北柴胡莖葉化學成分研究論文 【摘要】目的對中藥北柴胡莖葉的化學成分進行分離和鑒定。方法用色譜法和波譜解析方法對北柴胡莖葉的化學成分進行分離和結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果共得到7個化合物：香草酸、水楊酸、咖啡酸乙酯、原兒茶酸、柴胡色原酮酸、山萘酚、蘆丁。結(jié)論化合物為柴胡屬植物中首次分離得到。 【關(guān)鍵詞】北柴胡化學成分結(jié)構(gòu)鑒定 Abstract：ObjectiveTostudythechemicalconstituentsoftheaerialpartofBupleurumchinenseDC.MethodsDriedaerialpartsofBupleurumchinenseDC.wereextractedw

2、ithEtOHandtheirchemicalconstituentswereisolatedandstructureswereconfirmedbyphysicalandchemicalpropertiesandspectralanalysis.ResultsSevencompoundswereobtainedandidentifiedasvanillicacid,salicylicacid,ethylcaffeate,protocaechuicacid,saikochromonicacid,kaempferolandrutin.ConclusionCompoundwereobtainedf

3、romgenusBupleurumforthefirsttime. Keywords：BupleurumchinenseDC；Chemicalconstituent；Structureidentification 柴胡為傘形科（Umbelliferae）柴胡屬Bupleurum植物。具疏散退熱，舒肝升陽之功效，主治感冒發(fā)熱，寒熱往來，瘧疾，胸脅脹痛，月經(jīng)不調(diào)及子宮脫垂等證?，F(xiàn)代藥理研究證明柴胡具有解熱、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、增強免疫、保肝利膽、抗菌、抗病毒及抗腫瘤等作用。中國藥典（2005年版）收載北柴胡BupleurumchineseDC.和狹葉柴胡B.scorzonerifoliumWilld

4、.的干燥根為藥用柴胡來源。作者對北柴胡莖葉的化學成分進行了提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定，從其乙醇提取物中分離得到了7個化合物，并通過理化性質(zhì)分析和波譜解析等手段確定了它們的結(jié)構(gòu)為香草酸（vanillicacid，1）、水楊酸（salicylicacid，2）、咖啡酸乙酯（ethylcaffeate，3）、原兒茶酸(protocaechuicacid，4）、柴胡色原酮酸（saikochromonicacid，5）、山萘酚（kaempferol，6）、蘆丁(rutin,7)。其中化合物2，3，4為首次從柴胡屬植物中分離得到。 1儀器與試藥 核磁共振光譜用BrukerAV-300、AV-500型核磁共振光譜

5、儀測定（TMS內(nèi)標）；紅外光譜用ShimadzuIR-435型紅外分光光度計測定（KBr壓片）；熔點用X4型數(shù)字顯示顯微熔點測定儀（未校正）測定；ESI-MS在Agilent1100LC/MSDSL上測定；LABCONCO(freezedrysystem/LYPHLOCK4.5)冷凍干燥儀?；衔锛兌扔葾gilent-1100高效液相色譜儀檢測。柱色譜材料為D101型大孔吸附樹脂、聚酰胺（100200目）、硅膠(200300目)、RP-C18（YMC;12m）及SephadexLH-20（AmershamBiosciences），柱色譜試劑均為分析純，高效液相色譜試劑均為色譜純。 2方法與結(jié)果

6、 2.1提取與分離北柴胡干燥莖葉15kg，粉碎后用80%乙醇冷浸提取2次，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，得總浸膏。總浸膏用正丁醇萃取，減壓濃縮后得正丁醇部浸膏320g，水溶解后上大孔吸附樹脂換水洗脫后，分別用不同體積分數(shù)的95%乙醇梯度（=20%，30%，50%，70%）洗脫，20%乙醇洗脫得流分，30%乙醇洗脫得流分，50%乙醇洗脫得流分，70%乙醇洗脫得流分。流分經(jīng)硅膠干柱色譜，以氯仿-甲醇-水（體積比為410.5）洗脫得15個組分（Fr.1Fr.15），其中，F(xiàn)r.3經(jīng)SephadexLH-20，甲醇洗脫得化合物1（15mg）；Fr.5經(jīng)RP-C18反相柱色譜，水-甲醇（11）洗脫得化合

7、物2（12mg）；Fr.7-12經(jīng)RP-C18反相柱色譜，水-甲醇（91）洗脫得化合物5（6mg）。流分經(jīng)硅膠干柱色譜，氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)（73）洗脫得化合物4(7mg)。流分經(jīng)硅膠干柱色譜，石油醚-醋酸乙酯溶劑系統(tǒng)（體積比1000，9010，8020）梯度洗脫，得20流分，流分10經(jīng)反相柱色譜，水-甲醇（體積比37）洗脫得化合物3(0.6g)。流分經(jīng)聚酰胺色譜柱不同體積分數(shù)乙醇梯度洗脫，得化合物6(0.5g)和7(3.0g)。 2.2結(jié)構(gòu)鑒定 2.2.1化合物1無色針晶（醋酸乙酯），mp210212，溴甲酚綠顯色反應陽性(示存在羧基)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，1HNMR

8、(300MHz，DMSO-d6)：12.46(1H，brs，-COOH)，9.81(1H，brs，ArOH)，7.43(1H，d，J=2.0Hz,H-2)，7.45(1H，dd，J=8.7，2.0Hz，H-6)，6.84(1H，d，J=8.7Hz，H-5)，3.81(3H，s，OCH3)。NOESY譜中，3.81(3H，s，OCH3)與7.43(1H，d，J=2.0Hz,H-2)有NOE效應。經(jīng)與文獻1對照，確定化合物1為香草酸。 2.2.2化合物2無色針狀結(jié)晶（乙醇），mp151154，溴甲酚綠顯色反應陽性(示存在羧基)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，1HNMR(300MHz

9、，DMSO-d6)：6.97(1H，d，J=7.9Hz，H-3)，7.54(1H，dd，J=7.9，1.7Hz，H-4)，6.94(1H，t，J=7.9Hz，H-5)，780(1H，dd，J=7.9，1.7Hz，H-6)，12.65（1H，s，-OH），15.87（1H，s，-COOH）。13CNMR(125MHz，DMSO-d6)：112.9(C-1)，161.1(C-2)，117.0(C-3)，135.6(C-4)，119.1(C-5)，130.2(C-6)，171.8(C-7)。以上氫譜與碳譜數(shù)據(jù)與文獻2基本一致，確定化合物2為水楊酸。 2.2.3化合物3無色針晶(甲醇)，mp14214

10、3，IRcm-1：3430(-OH)，1660(C=O)，1622(C=C)，1602，1590(-Ar)，1042(CO-)。1HNMR(500MHz，DMSO-d6)：7.04(1H，d，J=2.1Hz，H-2)，6.75(1H，d，J=8.2Hz，H-5)，7.00(1H，dd，J=8.2，2.1Hz，H-6)，6.25(1H，d，J=15.9Hz，=C-H)，7.46(1H，d，J=15.9Hz，=C-H)，4.15(2H，q，-CH2)，1.24(3H，t，CH3-)，9.09(1H，s，-OH)，9.54(1H，s，-OH)。ESI-MS(mz)：208(M+)，180(M+-CH

11、2CH3+H)，163(M+-OCH2CH3)。13CNMR(125MHz，DMSO-d6)：125.5（C-1），114.8（C-2），145.5（C-3），144.9（C-4），115.7（C-5），121.2（C-6），114.0（=C），148.3（=C），166.4（-C=O），59.6（-CH2），14.2（CH3-）。以上氫譜與碳譜數(shù)據(jù)與文獻3基本一致，確定化合物3為咖啡酸乙酯。 2.2.4化合物4無色針晶（甲醇），mp204206，溴甲酚綠顯色反應陽性(示存在羧基)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，1HNMR(500MHz，DMSO-d6)：7.35（1H，d，J

12、=2.0Hz，H-2），6.79(1H，d，J=8.2Hz，H-5)，7.30(1H，dd，J=8.2，2.0Hz，H-6)，9.26(1H，s，-OH)，9.63(1H，s，-OH)，12.27(1H，s，-COOH)。13CNMR(125MHz，DMSO-d6)：121.7(C-1)，116.6(C-2)，144.9(C-3)，150.0(C-4)，115.1(C-5)，121.9(C-6)，167.3(-COOH)。以上氫譜與碳譜數(shù)據(jù)與文獻4基本一致，確定化合物4為原兒茶酸。 2.2.5化合物5淡黃色針晶(甲醇)，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，溴甲酚綠顯色反應陽性(示存在

13、羧基)。1HNMR(500MHz，DMSO-d6):6.67(1H，s，H-3)，6.19(1H，d，H-6)，6.46(1H，d，H-8)。13CNMR(125MHz，DMSO-d6)：160.7(C-2)，109.0(C-3)，183.2（C-4），161.4（C-5），98.8（C-6），161.6（C-7），93.99（C-8），157.6（C-9），104.5（C-10），164.6（-COOH）。以上氫譜與碳譜數(shù)據(jù)與文獻5基本一致，確定化合物5為柴胡色原酮酸。 2.2.6化合物6淡黃色針晶(甲醇)，mp275276，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，鹽酸-鎂粉反應陽性，

14、Molish反應陰性。與山萘酚標準品共薄層，Rf值一致。與標準品混合后熔點不下降。1HNMR(500MHz,DMSO-d6):12.47,10.75,10.07,9.35(各1H,s,D2O可交換,5-OH,7-OH,3-OH,4-OH),8.04(2H,d,J=8.7Hz,H-2,H-6),6.93(2H,d,J=8.7Hz,H-3,H-5),6.44(1H,d,J=2.0Hz,H-8),6.19(1H,d,J=2.0Hz,H-6)。以上氫譜數(shù)據(jù)與文獻6基本一致，確定化合物6為山萘酚。 2.2.7化合物7淡黃色針晶(甲醇)，mp185186，三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性(示有酚羥基存在)，鹽酸

15、-鎂粉反應及Molish反應陽性，與蘆丁標準品共薄層，Rf值一致。高效液相檢測與蘆丁標準品保留時間相同（液相色譜條件：AgilentEclipseCDB-C18色譜柱，4.6mm250mm，5m；柱溫：30；流動相：20甲醇；流速：1.0ml/min；檢測波長：365nm）。1HNMR(500MHz，DMSO-d6):12.59,10.79,9.62,9.14(各1H,s,D2O可交換,5-OH,7-OH,3-OH,4-OH),7.55（1H,d,J=2.0Hz,H-2）,7.53(1H,dd,J=2.0,8.2Hz,H-6),6.84(1H,d,J=8.1Hz,H-5),6.38(1H,d,

16、J=2.0Hz,H-8),6.19(1H,d,J=2.0Hz,H-6),5.33(1H,d,J=7.4Hz,GlcH-1),5.06(1H,brs,rhaH-1)。以上氫譜數(shù)據(jù)與文獻5基本一致，確定化合物7為蘆丁。 3討論 本實驗從北柴胡莖葉中分離鑒定了7個化合物，其中黃酮類3個，分別為柴胡色原酮酸、山萘酚、蘆?。环铀犷?個，分別為香草酸、水楊酸、咖啡酸乙酯、原兒茶酸。化合物為首次從柴胡屬植物中分離得到，這對闡明北柴胡莖葉解熱抗炎作用的藥效物質(zhì)基礎有一定的意義。 【參考文獻】 1何明芳,孟正木,沃聯(lián)群.積雪草化學成分的研究J.中國藥科大學學報,2000,31（2）:91. 2SadtlerResearchLaboratories.SadtlerStandardCarbon13NMRSpectraZ.Pennsylvania(USA):SadtlerResearchLaboratories，19896216C. 3屠鵬飛,吳衛(wèi)中,鄭俊華.太