羊紅膻癃閉平顆粒藥效分析及作用機(jī)制探究

1、羊紅膻癃閉平顆粒藥效分析及作用機(jī)制探究中藥能夠多靶點、多途徑的調(diào)控前列腺疾病，而且副作用少，現(xiàn)在越來越多的醫(yī)本課題已申請專利一種抗前列腺增生藥物組合物，現(xiàn)從藥學(xué)、藥效學(xué)及作用機(jī)制對羊紅膻癃閉平顆粒進(jìn)行研究，為后續(xù)開發(fā)一種質(zhì)量穩(wěn)定可控、療效確切、作用機(jī)制較為明確的抗前列腺增生的新藥提供實驗依據(jù)，奠定良好基礎(chǔ)。主要研究成果如下：采用回流提取方法，以總黃酮提取率和出膏率的綜合評分為指標(biāo)，在單因素的基礎(chǔ)上，采用正交實驗設(shè)計考察加水量、提取時間、提取次數(shù)三個因素的影響，確定了羊紅膻癃閉平復(fù)方的最佳提取工藝為：加 12 倍量的水，提取 3 次，每次1 小時；以顆粒的成型率為指標(biāo)，考察輔料的種類及用量、潤濕

2、劑的濃度，得出羊紅膻癃閉平顆粒最佳成型工藝為：藥粉-糊精（1:0.4），混勻，以 85%乙醇制顆粒，60干燥，整粒，即得。.前言課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，羊紅膻有治療前列腺炎的作用，所以本課題在前期實驗的基礎(chǔ)上更深一步的研究羊紅膻復(fù)方抑制前列腺增生的藥效及作用機(jī)制，本課題以各藥味所共有且含量較高的黃酮類成分為主要指標(biāo)，對提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，將其制成攜帶方便、便于保存和運輸?shù)念w粒劑，并建立質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，以丙酸睪丸酮誘導(dǎo)法建立去勢大鼠前列腺增生模型，探討羊紅癃閉平顆粒對 BPH 大鼠的保護(hù)作用及其機(jī)制，為深入開發(fā)該方提供依據(jù)。良性前列腺增生（BPH）是中老年男性常見疾病1-2，并且隨著年齡的增加發(fā)病率逐漸上升

3、，據(jù)估計，在男性 60 歲后，BPH 的患病率達(dá)到 70%，在 80 歲時，逐漸增加到 80%3-4。本病的發(fā)生往往伴隨著膀胱刺激癥、梗阻等相關(guān)癥狀的發(fā)生，在臨床上表現(xiàn)為包括尿頻，尿急，尿失禁，進(jìn)行性排尿困難以及膀胱不完全排空等癥狀，臨床上通常表現(xiàn)為患者主觀癥狀為主的下尿路癥狀5-6。目前，前列腺增生的發(fā)病機(jī)制還不明確，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，年齡的增加、睪丸功能正常等是 BPH 發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)和必備條件7-8，另外有研究表明，BPH 發(fā)病機(jī)制與多種因素有關(guān)，包括雄激素、雌激素、生長因子和/或神經(jīng)遞質(zhì)9、炎癥免疫10等有關(guān)，這些因素會導(dǎo)致纖維肌間質(zhì)和腺上皮的逐漸生長，導(dǎo)致前列腺體積的增加11。.第一部

4、分 羊紅膻癃閉平顆粒的提取工藝研究1 儀器和材料實驗藥材：羊紅膻藥材購自陜西省黃安縣，葛根、山楂、枸杞子、西洋參購自河北安國，由山西中醫(yī)藥大學(xué)裴香萍副教授鑒定分別為傘形科茴芹屬植物缺刻葉茴芹Pimpinella thellungiana Wolff的全草、豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.)Ohwi 的干燥根、薔薇科植物山里紅 Cralaegus pinnatifida.Bge.var.major N.E.Br.的干燥成熟果實、茄科植物寧夏枸杞 Lycium barbarum L. 的干燥成熟果實、五加科植物西洋參 Panax quinquefolium L.的干燥根；

5、實驗對照品：蘆?。ㄅ枺?00080-201811）；無水葡萄糖（批號：110833-201707），以上均購自中國食品藥品檢定所。2 實驗方法和結(jié)果精密量取2.1.1;項下供試品溶液 2mL，2.1.2;項下對照品溶液 5mL，置于25mL 容量瓶中，依次加入 5% NaNO21 mL，靜置 6min，加入 10% Al(NO3)31mL，靜置 6min，加入 4% NaOH 10 mL，靜置 15 min，用 50%甲醇定容，溶劑用相同的方法定容做空白溶液21。分別用全波長掃描二者的吸收圖譜，結(jié)果顯示二者在 507nm 處均有最大吸光度，故選 507nm 為最大吸收波長，見圖 1-1。分別

6、吸取2.1.2;項下對照品溶液 0.5、1、2、4、6、8mL，置于 25mL 容量瓶中，按2.2;項下方法顯色，以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 C 為橫坐標(biāo)，以吸光度 A 為縱坐標(biāo)作圖，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖 1-2，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：A=11.197C-0.0119(r=0.9995)，表明蘆丁在 5.9695.49mg/L 范圍內(nèi)與吸光度 A 成良好線性關(guān)系。.第三部分 羊紅膻癃閉平顆粒的質(zhì)量控制研究.161 實驗材料.162 實驗方法和結(jié)果.17第四部分 羊紅膻癃閉平顆粒抑制前列腺增生作用及作用機(jī)制.411 儀器與材料.412 實驗方法.423 小結(jié)與討論.51第五部分 結(jié)論.55.第四部分 羊紅膻癃閉平顆粒抑制

7、前列腺增生作用及其機(jī)制研究1 儀器與材料羊紅膻癃閉平顆粒，每克內(nèi)容物相當(dāng)于 2.33g 生藥，由山西中醫(yī)藥大學(xué)中藥化學(xué)實驗室自制（批號:20181224）；西藥陽性對照藥：非那雄胺片，規(guī)格：每片 5mg，批號：N011372，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字 J20150143，杭州默沙東制藥有限公司；中藥陽性對照藥：癃閉舒膠囊，規(guī)格：每粒 0.3g，批號：161112，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字 Z10960007，石家莊科迪藥業(yè)有限公司；丙酸睪丸酮注射液，規(guī)格 1mL:25mg，批號：170117，批準(zhǔn)文號：獸藥字 110251054，購自寧波第二激素廠。2 實驗方法體重 180-220g 的 SD 雄性 SP

8、F 級大鼠 90 只。隨機(jī)選取 78 只大鼠，切除睪丸，手術(shù) 7 天以后，根據(jù)前列腺增生模型大鼠的病理狀況，選擇恢復(fù)狀態(tài)好的72 只大鼠，隨機(jī)分為模型對照組、癃閉舒膠囊組、非那雄胺片組和羊紅膻癃閉平顆粒高、中、低劑量組，每組 12 只。其余 12 只未去勢的大鼠做假手術(shù)作為空白對照組。于每日觀察大鼠的飲食、飲水情況，以及墊料清潔情況，觀察大鼠毛發(fā)及活躍程度54。大鼠稱重，按照人與動物間體表面積折算的等效劑量的方法計算麻醉劑量，按照 0.3mLl/100g 腹腔注射 10%水合氯醛，麻醉，皮膚消毒后，摘除雙側(cè)睪丸，縫合（空白組做假手術(shù)）。然后在其大腿內(nèi)側(cè)肌處肌內(nèi)注射青霉素 20 萬 U/kg/d

9、，連續(xù) 7d。第 8d，挑選所有手術(shù)以后恢復(fù)狀態(tài)較好的造模大鼠，隨機(jī)選 72 只大鼠分為 6 組，每組 12 只；經(jīng) 1 周自然恢復(fù)后，按照人與動物間體表面積折算的等效劑量的方法，按照 5mg/kg 的劑量，每只皮下注射丙酸睪酮注射液（溶于橄欖油），連續(xù) 30d，空白對照組注射等量溶媒（橄欖油）。每日灌胃給藥 1 次，連續(xù)給藥 30d。在末次灌胃，禁食不禁水 12 小時后稱量體重，使用 10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，腹主動脈取血后完整摘取前列腺，去除周圍脂肪組織，用生理鹽水清洗腺體表面血漬后濾紙吸干表面水分，電子天平稱重記錄后，留取部分組織保存于-80冰箱備用，余下部分組織使用 10%中性甲

10、醛溶液固定55。大鼠 10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，活體腹腔主動脈取血，于冰箱中冷藏，隨后全血 3500 r/min 離心 10 min，取上清，采用試劑盒測定大鼠血清內(nèi) SOD酶活性以及血清 MDA 的含量，研究各組方對大鼠體內(nèi)抗氧化水平的影響。.參考文獻(xiàn)1 洪寅,仇鳳梅,金國英,裘潔,呂萃婷.桂枝對大鼠良性前列腺增生細(xì)胞增殖和凋亡的影響J.中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志,2011,17(03):280-283.2 Xia SJ, Cui D, Jiang Q. An overview of prostate diseases and their characteristics specific t

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