過敏原血清學(xué)檢測(cè)與臨床應(yīng)用

1、過敏原血清學(xué)檢測(cè)金 花2013.3.22基本概念 過敏反應(yīng)： 1906年von Piguet提出了allergy一詞。其概念為：機(jī)體對(duì)抗原刺激產(chǎn)生的一種“改變了反應(yīng)性”的狀態(tài)。這種狀態(tài)可能是保護(hù)性的，即產(chǎn)生了免疫力；也可能是破壞性的，即產(chǎn)生了超敏反應(yīng)。 超敏反應(yīng)是機(jī)體對(duì)某抗原初次應(yīng)答后，再次接受相同抗原刺激時(shí)，發(fā)生的一種以機(jī)體生理功能紊亂或組織細(xì)胞損傷為主的特異性免疫應(yīng)答。 過敏原：致敏原 or 變應(yīng)原 能夠使人發(fā)生過敏的抗原。吸入過敏原接觸過敏原過敏原輸注過敏原過敏原食物過敏原4種過敏反應(yīng)類型 (超敏反應(yīng))by Coombs und Gell (1963)Type I早期反應(yīng)核 Platzh

2、alter數(shù)分鐘內(nèi)花粉熱Type II細(xì)胞毒反應(yīng)壞數(shù)小時(shí)到一天輸血反應(yīng)Type III免疫復(fù)合物形成IgE-介導(dǎo)肥大細(xì)胞脫 IgG/IgM介導(dǎo)靶細(xì)胞的破持續(xù)產(chǎn)生IgG/IgM 免疫復(fù)合物Platzhalter數(shù)小時(shí)到一天farmers lungsType IV細(xì)胞免疫反應(yīng)T-細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)12小時(shí)到數(shù)周接觸過敏反應(yīng) (Ni) 過敏性鼻炎、鼻息肉、鼻竇炎 過敏性眼病 哮喘、過敏性肺炎 特應(yīng)性皮炎和接觸性皮炎 慢性蕁麻疹和血管性水腫 過敏性休克 昆蟲過敏 藥物過敏 食物過敏fromManual of Allergy and Immunology常見過敏性疾病流行病學(xué)平均發(fā)病率20%（845%）過去1

3、0年，成倍增加（doubled）二十一世紀(jì)的流行?。╰he epidemic of 21th century）TriggersEpisodic（多有明顯誘因）（呈發(fā)作性，癥狀來得快，去的快）Reversible （可完全緩解,查體常無陽性體征）Recurrent （病情反復(fù)，多與過敏原暴露相關(guān)）Atopic（特應(yīng)性，發(fā)生于過敏體質(zhì)者）臨床表現(xiàn)的特點(diǎn)引起過敏反應(yīng)因素 遺傳因素 接觸過敏原的機(jī)會(huì) 抗原性質(zhì) Th細(xì)胞及細(xì)胞因子過敏反應(yīng): 診斷IgE檢測(cè)原理From ALLERGY 4th Edition檢測(cè)IgE步驟1:總IgEELISA步驟2:特異性 IgE EUROLINEExtinction總

4、IgE ELISA標(biāo)準(zhǔn)品100 IU/ml10 IU/ml0 IU/mlWHO 75/502 4 點(diǎn)定標(biāo)Example for a standard curv e00,52500 IU/ml1,510100200300400500600IgE IU/ml年齡最高參考上限新生兒1.2 IU/ml1-6 月7.2 IU/ml7-12 月12.7 IU/ml1-5 歲60 IU/ml6-9 歲155 IU/ml10-15 歲199 IU/ml 16歲100 IU/ml總IgE ELISA: 參考范圍 參考范圍 參考范圍：可能存在過敏反應(yīng)一般無過敏反應(yīng)特異性 IgE：EUROLINE 簡(jiǎn)便和快捷的實(shí)驗(yàn)

5、操作 僅需少量樣本 (過夜溫育) 結(jié)果基于廣泛應(yīng)用的EAST分級(jí)系統(tǒng) 通過EUROLineScan程序?qū)崿F(xiàn)結(jié)果的自動(dòng)判讀EUROLINE檢測(cè)系統(tǒng)顏色反應(yīng)底物膜條色原抗原提取物特異性 IgE：EUROLINE溫育AP標(biāo)記二抗AKP清洗 3 x 5min60 min 二抗反應(yīng)清洗 3 x 5min10 min 底物溫育自動(dòng)化判讀或肉眼觀察60 min未稀釋過夜1:11 稀釋類別濃度kU/lsIgE水平臨床意義0100特高（+）特重特異性IgE分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及臨床意義 結(jié)果判讀: EUROLineScan特異性 IgE歐蒙印跡法自動(dòng)化IgE名稱/商品名貨號(hào)檢測(cè)內(nèi)容檢測(cè)項(xiàng)目特點(diǎn)吸入及食物組合DP3713-1

6、601-4E塵螨組合1（屋塵螨/粉塵螨)、貓毛、狗上皮、屋塵、蟑螂、霉菌組合1（點(diǎn)青霉/分枝孢霉/煙曲霉/交鏈孢霉）、樹組合2（柳樹/楊樹/榆樹）、矮豚草、艾蒿、葎草、牛奶、雞蛋白、花生、海魚組合1（鱈魚/龍蝦/扇貝）、CCD 標(biāo)記物、質(zhì)控帶10項(xiàng)吸入、4項(xiàng)食物、CCD、指控帶（14項(xiàng)）精簡(jiǎn)最常見的食物及吸入過敏原小蒙星DP-3713-1601-5E塵螨組合1（屋塵螨/粉塵螨)、貓毛、狗上皮、屋塵、蟑螂、霉菌組合1（點(diǎn)青霉/分枝孢霉/煙曲霉/交鏈孢霉）、葎草、普通豚草、艾蒿、牛奶、雞蛋白、花生、黃豆、蟹、蝦、海魚組合1（鱈魚/龍蝦/扇貝）、CCD 標(biāo)記物、質(zhì)控帶9項(xiàng)吸入、7項(xiàng)食物、CCD、指控

7、帶（16項(xiàng)）兒童相對(duì)常見過敏原吸入組合DP-3116-1601-2E樹組合2（柳樹/楊樹/榆樹）、矮豚草、艾蒿、塵螨組合1（屋塵螨/粉塵螨）、屋塵、貓毛、狗上皮、蟑螂、霉菌組合1（點(diǎn)青霉/分枝孢霉/煙曲霉/交鏈孢霉）、葎草、CCD 標(biāo)記物、質(zhì)控帶10項(xiàng)吸入、CCD、指控帶（10項(xiàng)）常見吸入過敏原食物組合DP-3414-1601-2E雞蛋白、牛奶、花生、黃豆、海魚組合1（鱈魚/龍蝦/扇貝）、淡水魚組合1（鮭魚/鱸魚/鯉魚）、蝦、蟹、CCD 標(biāo)記物、質(zhì)控帶8項(xiàng)食物、CCD、指控帶（8項(xiàng)）常見食物過敏原定制組合1DP 3713-7E塵螨組合1（屋塵螨/粉塵螨)、貓毛、狗上皮、屋塵、蟑螂、霉菌組合1（

8、點(diǎn)青霉/分枝孢霉/煙曲霉/交鏈孢霉）、葎草、普通豚草、艾蒿、牛奶、雞蛋白、海魚組合1（鱈魚/龍蝦/扇貝）、CCD 標(biāo)記物、質(zhì)控帶9項(xiàng)吸入、3項(xiàng)食物、CCD、指控帶（12項(xiàng)）跟據(jù)客戶需求定制過敏原優(yōu)敏組合Q1：TIgE & sIgE關(guān)系總IgE : 結(jié)果解釋1. 總IgE 超出參考范圍大多數(shù)是由于過敏反應(yīng)導(dǎo)致例外: 寄生蟲病; 免疫抑制; HIV; 重度燒傷2. 臨床相關(guān)特異性IgE結(jié)果與總IgE相關(guān)的特異性IgE濃度越高，患者臨床過敏反應(yīng)的可能性就越大.特異性 IgE總IgE特異性 IgE總IgE5 IU/ml (kU/l)200 IU/ml總IgE : 結(jié)果解釋舉例患者1特異性 Ig

9、E總IgE5 IU/ml (kU/l)25 IU/ml患者2總IgE濃度與特異性IgE水平關(guān)系并不存在必然相關(guān)性 約20-30%超敏疾病患者特異性IgE可能較高，但總IgE可維持正常，甚至低于幾何均值。 如患者僅對(duì)牛奶高度過敏，其特異性IgE為18kU/L。對(duì)于特異性IgE而言，該結(jié)果已屬于嚴(yán)重過敏（IV級(jí)）的范疇。從理論上講，該患者的總IgE也應(yīng)該為18kU/L。而對(duì)于總IgE來說，這個(gè)結(jié)果是很低的； 總IgE升高并不一定是超敏反應(yīng)，而過敏患者總IgE也不總是一定升高。這一要點(diǎn)在評(píng)價(jià)總IgE檢測(cè)結(jié)果時(shí)非常重要。Q2：CCD？何謂 CCDs?CCD 是“Crossreactive Carboh

10、ydrate Determinants（交叉反應(yīng)性碳水化合物決定子）”的英文縮寫. 該結(jié)構(gòu)為結(jié)合于糖蛋白N末端的多聚糖。依據(jù)糖基化作用的不同而產(chǎn)生不同的結(jié)構(gòu)。舉例: MMXF (Man1-6(Man1-3) (Xyl1-2)Man1-4GlcNAc1-4 (Fuc1-3)GlcNAc)CCDs 在自然界中的存在?CCDs 存在于多種植物性或動(dòng)物源性的過敏原中。由于結(jié)構(gòu)的相似性導(dǎo)致一些獨(dú)特的交叉反應(yīng)出現(xiàn)。典型含CCD結(jié)構(gòu)的過敏原: 植物花粉 植物性食物 植物乳膠 昆蟲毒液抗CCD IgE 結(jié)果的臨床價(jià)值?大部分糖蛋白僅含有一個(gè)IgE結(jié)合的多聚糖，因此無法促進(jìn)結(jié)合有IgE抗體的肥大細(xì)胞表面受體形成

11、二聚體化，進(jìn)而無法活化肥大細(xì)胞發(fā)生脫核及釋放組胺的作用，因此對(duì)于僅為抗CCD IgE抗體陽性的患者而言往往無臨床癥狀的表現(xiàn)。在何種情況下應(yīng)排除抗CCD IgE 的干擾?當(dāng)體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床癥狀或皮試結(jié)果不符的情況下。當(dāng)某一患者出現(xiàn)多個(gè)特異性IgE結(jié)果陽性時(shí)。舉例:花生: 特異性 IgE 陽性但并不表現(xiàn)出臨床癥狀出現(xiàn)多個(gè)食物相關(guān)的陽性結(jié)果但缺乏臨床癥狀表現(xiàn).植物乳膠: 針對(duì)花粉敏感的患者抗植物乳膠陽性，但無相關(guān)接觸史。昆蟲毒液: 針對(duì)蜜蜂和馬蜂特異性IgE陽性的患者可能存在交叉反應(yīng)。1715例體檢人群的問卷統(tǒng)計(jì)及sIgE比較，存在不符合現(xiàn)象。CCD-IgE是引起sIgE 檢測(cè)交叉反應(yīng)的重要因素，

12、干擾血清sIgE檢測(cè)結(jié)果，導(dǎo)致血清sIgE 檢測(cè)與臨床癥狀不符合。EUROIMMUNEUROIMMUN研究背景：1個(gè)病人皮試和血清檢測(cè)結(jié)果不相符，分析研究了造成不符合的原因，評(píng)價(jià)CCD在其中的作用。實(shí)驗(yàn)方法：用已知碳水化合物結(jié)構(gòu)的糖蛋白做抑制實(shí)驗(yàn)。用糖蛋白做和血清結(jié)合，同時(shí)做過敏原提取物和血清結(jié)合。共分析了428份結(jié)果，最終確定CCD引起假陽性的原因。EUROIMMUN獨(dú)家包被有CCD指示帶 CCD是“交叉反應(yīng)性碳水化合物決定因子” CCD存在于多種植物性或動(dòng)物源性的過敏原中，由于結(jié)構(gòu)相似性導(dǎo)致一些獨(dú)特的交叉反應(yīng)出現(xiàn) 解釋交叉反應(yīng)的假陽性結(jié)果CCDQ3：食物不耐受&食物過敏EUROIMMUN食物過敏vs食物不耐受EAACI：歐洲變態(tài)反應(yīng)與臨床免疫學(xué)會(huì)食物過敏vs食物不耐受 食物過敏： 免疫介導(dǎo)；如IgE免疫球蛋白 食物不耐受：非免疫介導(dǎo)；如酶促作用、藥理作用EAACI：歐洲變態(tài)反應(yīng)與臨床免疫學(xué)會(huì)EUROIMMUNEUROIMMUN食物過敏vs食物不耐受美國(guó)變態(tài)反應(yīng)和免疫學(xué)會(huì)及國(guó)立衛(wèi)生研究院（NIH）定義： 食物不良反應(yīng)：指一切由食