實(shí)驗(yàn)八 家兔的熱原

1、實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)八 家兔的給藥、采血家兔的給藥、采血熱原實(shí)驗(yàn)熱原實(shí)驗(yàn)【目的要求目的要求】1、熟悉家兔的各種給藥方法；、熟悉家兔的各種給藥方法；2、掌握家兔的、掌握家兔的耳緣靜脈采血；耳緣靜脈采血；3、了解家兔熱原反應(yīng)的基本原理。、了解家兔熱原反應(yīng)的基本原理?！净驹砘驹怼颗R床上在進(jìn)行靜脈滴注大量輸液時(shí)，由于藥臨床上在進(jìn)行靜脈滴注大量輸液時(shí)，由于藥液中含有熱原液中含有熱原( (注射劑中含有熱原量達(dá)注射劑中含有熱原量達(dá)1ug1ug /kg/kg就可引起不良反應(yīng)就可引起不良反應(yīng)) )，病人在，病人在0.50.51.0h1.0h內(nèi)出現(xiàn)內(nèi)出現(xiàn)冷顫、高熱、出汗、昏暈、嘔吐等癥狀，高熱冷顫、高熱、出汗、昏暈

2、、嘔吐等癥狀，高熱時(shí)體溫可達(dá)時(shí)體溫可達(dá)4040，嚴(yán)重者甚至可休克，這種現(xiàn)，嚴(yán)重者甚至可休克，這種現(xiàn)象稱為熱原反應(yīng)。象稱為熱原反應(yīng)。 引起熱原反應(yīng)的主要原因是注射液或輸液引起熱原反應(yīng)的主要原因是注射液或輸液器中污染的熱原所引起的。熱原的致熱量因菌器中污染的熱原所引起的。熱原的致熱量因菌種而異，如革蘭陰性桿菌致熱能力最強(qiáng)；由于種而異，如革蘭陰性桿菌致熱能力最強(qiáng)；由于注射途徑不同，引起發(fā)熱的程度也有所差異。注射途徑不同，引起發(fā)熱的程度也有所差異。由于家兔對(duì)熱原的反應(yīng)與人基本相似，由于家兔對(duì)熱原的反應(yīng)與人基本相似，目前家兔法仍為各國藥典規(guī)定的檢查熱原的目前家兔法仍為各國藥典規(guī)定的檢查熱原的法定方法。法

3、定方法。 家兔體溫變化十分靈敏，最易產(chǎn)生發(fā)熱家兔體溫變化十分靈敏，最易產(chǎn)生發(fā)熱反應(yīng)，發(fā)熱反應(yīng)典型、恒定，因此常選用家反應(yīng)，發(fā)熱反應(yīng)典型、恒定，因此常選用家兔進(jìn)行這方面的研究。兔進(jìn)行這方面的研究。反應(yīng)過程反應(yīng)過程：熱原：熱原- -白白細(xì)胞細(xì)胞- -吞噬吞噬- -白細(xì)胞崩解，釋放內(nèi)源性致白細(xì)胞崩解，釋放內(nèi)源性致熱源熱源- -作用與作用與體溫調(diào)節(jié)中樞體溫調(diào)節(jié)中樞- -產(chǎn)熱增加，散熱減少產(chǎn)熱增加，散熱減少- -體溫上升。體溫上升。內(nèi)源性致熱源內(nèi)源性致熱源n又稱白細(xì)胞致熱源，如白介素腫瘤壞死因子和又稱白細(xì)胞致熱源，如白介素腫瘤壞死因子和干擾素等通過血干擾素等通過血- -腦脊液屏障直接作用于體溫調(diào)腦脊液屏

4、障直接作用于體溫調(diào)節(jié)中樞的體溫調(diào)定點(diǎn)，使調(diào)定點(diǎn)上升，體溫調(diào)節(jié)中樞的體溫調(diào)定點(diǎn)，使調(diào)定點(diǎn)上升，體溫調(diào)節(jié)中樞必須對(duì)體溫加以重新調(diào)節(jié)發(fā)出沖動(dòng)，并節(jié)中樞必須對(duì)體溫加以重新調(diào)節(jié)發(fā)出沖動(dòng)，并通過垂體內(nèi)分泌因素使代謝增加或通過運(yùn)動(dòng)神通過垂體內(nèi)分泌因素使代謝增加或通過運(yùn)動(dòng)神經(jīng)使骨骼肌陣縮，使產(chǎn)熱增多；另一方面可通經(jīng)使骨骼肌陣縮，使產(chǎn)熱增多；另一方面可通過交感神經(jīng)使皮膚血管及豎毛肌收縮，停止排過交感神經(jīng)使皮膚血管及豎毛肌收縮，停止排汗，散熱減少。這一綜合調(diào)節(jié)作用使產(chǎn)熱大于汗，散熱減少。這一綜合調(diào)節(jié)作用使產(chǎn)熱大于散熱，體溫升高引起發(fā)熱。散熱，體溫升高引起發(fā)熱?！緞?dòng)物與器材動(dòng)物與器材】家兔（每組家兔（每組2只：只：

5、1只用于熱源實(shí)驗(yàn)，只用于熱源實(shí)驗(yàn)，1只練習(xí)給藥、采血和麻醉等）、臺(tái)秤、只練習(xí)給藥、采血和麻醉等）、臺(tái)秤、動(dòng)物肛門體溫計(jì)、注射器、動(dòng)物肛門體溫計(jì)、注射器、0.9%戊巴比戊巴比妥鈉、生理鹽水、傷寒妥鈉、生理鹽水、傷寒-副傷寒四聯(lián)菌苗、副傷寒四聯(lián)菌苗、二硝基酚、二硝基酚、10%蛋白胨、消蛋白胨、消毒脫脂牛奶。毒脫脂牛奶。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（、家兔給藥、麻醉）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（、家兔給藥、麻醉）1 1、靜脈注射靜脈注射 兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動(dòng)兔耳部血管分布清晰。兔耳中央為動(dòng)脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用。脈，耳外緣為靜脈。內(nèi)緣靜脈深不易固定，故不用。外緣靜脈表淺易固定，常用。外緣靜脈表淺易固定，

6、常用。 先拔去注射部位的被毛，用手指彈動(dòng)或輕揉兔先拔去注射部位的被毛，用手指彈動(dòng)或輕揉兔耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，耳，使靜脈充盈，左手食指和中指夾住靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無名指及小指墊在下面，右拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無名指及小指墊在下面，右手持注射器連手持注射器連6 6號(hào)針頭盡量從靜脈的遠(yuǎn)端刺入，移號(hào)針頭盡量從靜脈的遠(yuǎn)端刺入，移動(dòng)拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將動(dòng)拇指于針頭上以固定針頭，放開食指和中指，將藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。藥液注入，然后拔出針頭，用手壓迫針眼片刻。2 2、皮下注射、皮下注射注射時(shí)以左手拇指和食指提起皮膚，注射時(shí)以左手

7、拇指和食指提起皮膚，將連有將連有5 5（1/21/2）號(hào)針頭的注射器刺入皮下。注射部）號(hào)針頭的注射器刺入皮下。注射部位一般是在兔背部或耳根部注射。位一般是在兔背部或耳根部注射。3 3、肌肉注射、肌肉注射 應(yīng)選肌肉發(fā)達(dá)，無大血管通過的部位，應(yīng)選肌肉發(fā)達(dá)，無大血管通過的部位，一般多選臀部。注射時(shí)垂直迅速刺入肌肉，回抽針一般多選臀部。注射時(shí)垂直迅速刺入肌肉，回抽針?biāo)ㄈ鐭o回血，即可進(jìn)行注射。栓如無回血，即可進(jìn)行注射。4 4、腹腔注射、腹腔注射 用家兔做實(shí)驗(yàn)時(shí)，進(jìn)針部位為下腹部用家兔做實(shí)驗(yàn)時(shí)，進(jìn)針部位為下腹部的腹白線離開的腹白線離開1cm1cm處。處。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（、家兔采血）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（、家兔采血）耳緣靜脈

8、采血耳緣靜脈采血：將兔麻醉后固定，拔去耳緣靜：將兔麻醉后固定，拔去耳緣靜脈局部的被毛，消毒，用手指輕彈兔耳，使靜脈脈局部的被毛，消毒，用手指輕彈兔耳，使靜脈擴(kuò)張，用針頭刺耳緣靜脈末端，血液即流出。本擴(kuò)張，用針頭刺耳緣靜脈末端，血液即流出。本法為兔最常用的采血方法，可多次重復(fù)使用。法為兔最常用的采血方法，可多次重復(fù)使用。2 2）頸靜脈采血）頸靜脈采血：將家兔麻醉后固定，剪去一側(cè)頸：將家兔麻醉后固定，剪去一側(cè)頸部外側(cè)被毛，作頸靜脈或頸動(dòng)脈分離手術(shù)，用注部外側(cè)被毛，作頸靜脈或頸動(dòng)脈分離手術(shù)，用注射器即可抽出所需血量。也可插入導(dǎo)管，反復(fù)采射器即可抽出所需血量。也可插入導(dǎo)管，反復(fù)采血。血。 耳中央動(dòng)脈采

9、血耳中央動(dòng)脈采血：在兔耳中央有一條較粗的、：在兔耳中央有一條較粗的、顏色較鮮紅的中央動(dòng)脈。用左手固定兔耳，右顏色較鮮紅的中央動(dòng)脈。用左手固定兔耳，右手持注射器，在中央動(dòng)脈的末端，沿著與動(dòng)脈手持注射器，在中央動(dòng)脈的末端，沿著與動(dòng)脈平行的向心方向刺入動(dòng)脈，即可見血液進(jìn)入針平行的向心方向刺入動(dòng)脈，即可見血液進(jìn)入針管。由于兔耳中央動(dòng)脈容易痙攣，故抽血前必管。由于兔耳中央動(dòng)脈容易痙攣，故抽血前必須讓兔耳充分充血，采血時(shí)動(dòng)作要迅速。采血須讓兔耳充分充血，采血時(shí)動(dòng)作要迅速。采血所用針頭不要太細(xì)，一般用所用針頭不要太細(xì)，一般用6號(hào)針頭，針刺部位號(hào)針頭，針刺部位從中央動(dòng)脈末端開始，不要在近耳根部采血。從中央動(dòng)脈

10、末端開始，不要在近耳根部采血。4）心臟采血心臟采血：穿刺部位在第三肋間：穿刺部位在第三肋間胸骨左緣胸骨左緣1mm處，選心跳最明顯的處，選心跳最明顯的部位把注射針刺入心臟，血液即流部位把注射針刺入心臟，血液即流入針管。心臟采血時(shí)所用的針頭應(yīng)入針管。心臟采血時(shí)所用的針頭應(yīng)細(xì)長(zhǎng)些，以免發(fā)生采血后穿刺孔出細(xì)長(zhǎng)些，以免發(fā)生采血后穿刺孔出血。血。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（、家兔熱源實(shí)驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（、家兔熱源實(shí)驗(yàn)） 【方法與步驟方法與步驟】n取適用家兔取適用家兔2 2只（提前停食只（提前停食1212小時(shí)小時(shí): :降低家兔降低家兔體能，加速應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生），稱量體重體能，加速應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生），稱量體重(1.5-(1.5-3.0

11、3.0) )后，用肛門體溫計(jì)測(cè)量家兔的正常體后，用肛門體溫計(jì)測(cè)量家兔的正常體溫溫(38.0(38.039.639.6) )，一般測(cè)量?jī)苫蛉?，溫，一般測(cè)量?jī)苫蛉?，溫差不得超過差不得超過0.40.4。n采用以下方法之一進(jìn)行熱源實(shí)驗(yàn)：采用以下方法之一進(jìn)行熱源實(shí)驗(yàn)： 1 1）于于15min15min內(nèi)自家兔耳緣靜脈緩慢注射規(guī)內(nèi)自家兔耳緣靜脈緩慢注射規(guī)定劑量（定劑量（1.01.02.0ml/kg2.0ml/kg體重）傷寒體重）傷寒- -副傷寒副傷寒四聯(lián)菌苗，（供試菌苗溫?zé)嶂了穆?lián)菌苗，（供試菌苗溫?zé)嶂?737，含量應(yīng)，含量應(yīng)不低于不低于1010億億/ml/ml）；）；2）皮下注射規(guī)定劑量（皮下注射規(guī)定

12、劑量（1.0ml/kg體重）體重）2%的的2、4二硝基酚溶液（配制二硝基酚溶液（配制2、4二硝基酚二硝基酚溶液時(shí)，需加溶液時(shí)，需加10%NaOH少許，使溶液完全少許，使溶液完全溶解）；溶解）；3）肌肉注射規(guī)定劑量肌肉注射規(guī)定劑量(10.0ml /Kg體重體重)10%蛋蛋白胨（溫?zé)嶂涟纂耍責(zé)嶂?7的供試溶液）；的供試溶液）；4）皮下注射消毒脫脂牛奶（皮下注射消毒脫脂牛奶（35ml/kg體體重）。重）。、每隔、每隔20min按前法測(cè)其體溫一次，按前法測(cè)其體溫一次，共測(cè)五次，以共測(cè)五次，以5次體溫中最高的一次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫升次減去正常體溫，即為該兔體溫升高度數(shù)。高度數(shù)。

13、n4、將給藥前后的每次體溫測(cè)量結(jié)、將給藥前后的每次體溫測(cè)量結(jié)果記錄下來，填于表內(nèi)。果記錄下來，填于表內(nèi)。n體溫計(jì)在插入肛門前，應(yīng)先消毒體溫計(jì)，甩動(dòng)體溫體溫計(jì)在插入肛門前，應(yīng)先消毒體溫計(jì)，甩動(dòng)體溫計(jì)使水銀柱降到計(jì)使水銀柱降到35以下，涂上潤(rùn)滑劑后才能使用；以下，涂上潤(rùn)滑劑后才能使用；n肛門體溫計(jì)插入各兔肛門的深度應(yīng)相同（一般約肛門體溫計(jì)插入各兔肛門的深度應(yīng)相同（一般約6左右或插至肛溫左右或插至肛溫37處），插入肛門的體溫計(jì)，處），插入肛門的體溫計(jì)，至少停留至少停留35分鐘后才能取出；分鐘后才能取出；n供試家兔應(yīng)盡可能處于同一溫度環(huán)境中；供試家兔應(yīng)盡可能處于同一溫度環(huán)境中；n實(shí)驗(yàn)用的注射器、針頭及一切供實(shí)驗(yàn)接觸的器皿，實(shí)驗(yàn)用的注射器、針頭及一切供實(shí)驗(yàn)接觸的器皿，應(yīng)置烘箱中應(yīng)置烘箱中250加熱加熱30min或用或用180加溫加溫2h，也，也可用其他適宜的方法除去熱原。可用其他適宜的方法除去熱原。日期日期室溫（室溫（）實(shí)驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)組兔體重（兔體重（kgkg）藥物藥物給藥方法給藥方法給藥前第一給藥前第一次測(cè)的體溫次測(cè)的體溫()()給藥前第二給藥前第二次測(cè)的體溫次測(cè)的體溫()()給藥前的平給藥前的平均體溫均體溫()()注射藥物時(shí)注射藥物時(shí)間間第一次測(cè)的第一次測(cè)的體溫（體溫（）第二次測(cè)的第二次測(cè)的體溫（體溫（