細(xì)胞凝集反應(yīng)試驗(yàn)報(bào)告

1、山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2015年4月16日姓名 _ 班級(jí)13 級(jí)生命基地班學(xué)號(hào)_同組者：科目 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)題目細(xì)胞凝集反應(yīng)【實(shí)驗(yàn)題目】細(xì)胞凝集反應(yīng)【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、了解細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)。2、掌握細(xì)胞凝集的原理。3、掌握細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)的操作方法?！緦?shí)驗(yàn)材料與用品】1. 試劑：PBS緩沖溶液、0.9%的氯化鈉溶液（生理鹽水）2. 器具：酒精棉球、雙凹片、載玻片、普通光學(xué)顯微鏡、托盤天平、滴管、離心管3. 材料：兔子靜脈血【實(shí)驗(yàn)原理】1. 凝集素凝集素（lectin ）是一類含糖的（少數(shù)例外）并能與糖專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集 細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。目前已發(fā)現(xiàn)近千種植物中含有凝集素，在各種真菌、無(wú)脊

2、椎動(dòng) 物、脊椎動(dòng)物、人體的各種組織和器官中及某些病毒體內(nèi)也含有凝集素。常用的為植物凝集 素，通常以其被提取的植物命名，凝集素為它們的總稱。在細(xì)胞表面，組成細(xì)胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖鏈，形成細(xì)胞外被（糖萼）。凝集素 使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素 互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。2. 細(xì)胞凝集細(xì)胞凝集是指細(xì)胞彼此聚集在一起，成為一簇不規(guī)則的細(xì)胞團(tuán)，目前認(rèn)為，細(xì)胞間的聯(lián) 系、細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、腫瘤的發(fā)生與免疫反應(yīng)都與細(xì)胞表面的分枝狀糖分子有關(guān)。3. 細(xì)胞凝集的反應(yīng)技術(shù)（1）直接凝集反應(yīng)技術(shù)顆粒性抗原與相應(yīng)的抗體血清混合后，在電解質(zhì)的參與下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)

3、間，抗原抗體凝 集成肉眼可見(jiàn)的凝集塊，這種現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng)。血清中的抗體稱為凝集素?？乖Q為凝集 原。細(xì)菌或其他凝集原都帶有相同的電荷（陰電荷），在懸液中相互排斥而呈均勻的分散狀 態(tài)?？乖涂贵w相遇后，由于抗原和抗體分子表面存在相互對(duì)應(yīng)的化學(xué)基團(tuán)，因而發(fā)生特異 性結(jié)合，稱為抗原抗體復(fù)合物，由于抗體與抗原結(jié)合，降低了抗原分子間的排斥力，抗原表 面的親水基團(tuán)減少，此時(shí)已有凝集趨勢(shì)，在電解質(zhì)參與下，中和了抗原抗體復(fù)合物的大部分 電荷，使之失去了經(jīng)典排斥力，分子間相互吸引，凝集成較大顆粒。出現(xiàn)了肉眼可見(jiàn)的凝集 反應(yīng)。（2）間接凝集反應(yīng)技術(shù)可溶性抗原（或抗體）吸附于免疫學(xué)反應(yīng)無(wú)關(guān)的顆粒表面上，當(dāng)這些致敏

4、的顆粒與相應(yīng) 的抗體（或抗原）相遇時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生特異性的結(jié)合，在電解質(zhì)的參與下，這些顆粒就會(huì)發(fā)生 凝集現(xiàn)象。這種借助于載體的抗原抗體凝集現(xiàn)象就叫做間接凝集反應(yīng)技術(shù)。4.載體具有吸附抗原（抗體）的載體很多，如聚苯乙烯乳膠、白陶土、活性炭、人和多種動(dòng)物 的紅血球、某些細(xì)菌等。良好的載體有以下幾點(diǎn)基本要求：（1）在生理鹽水或緩沖液中無(wú)自凝現(xiàn)象；（2）大小均勻；（3）比重與介質(zhì)相似，短時(shí)間內(nèi)不沉淀；（4）無(wú)化學(xué)或血清學(xué)活性；（5）吸附抗原（或抗體）后，不影響其活性；目前使用最廣泛的是人的 O型紅血球和綿羊紅血球。后者使用更廣，因其來(lái)源方便，另 夕卜綿羊紅血球的表面有大量的糖蛋白受體，極易吸附某些抗原物質(zhì)

5、，吸附性能好，且大 小均勻一致。正常紅細(xì)胞凝集顯微鏡下的紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象【實(shí)驗(yàn)步驟】一、大體流程、具體操作1、稱取土豆去皮塊莖2g,加10mlPBS緩沖液，浸泡24小時(shí)，浸出的粗提液中即含有可溶性 土豆凝集素。（老師已做好）2、 抽取兔子靜脈血液（加抗凝劑）1ml，加生理鹽水3ml，在1000r/min條件下，離心5min.重復(fù)3次離心，最后按壓積紅細(xì)胞體積用生理鹽水配成1%紅細(xì)胞懸液。3、分別用滴管吸取土豆凝集素和 1%紅細(xì)胞懸液各一滴，置雙凹片左孔內(nèi)，充分混勻。4、同時(shí)分別用滴管吸取PBS緩沖液和1%的紅細(xì)胞懸液各一滴，置雙凹片右孔內(nèi)，充分混勻, 做對(duì)照實(shí)驗(yàn)。5、搖晃5 10min后，觀察有

6、無(wú)發(fā)生細(xì)胞凝集并置顯微鏡下觀察?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果與分析】I.如圖1、圖2所示：剛開(kāi)始計(jì)時(shí)時(shí)，兩側(cè)溶液均無(wú)凝集現(xiàn)象； 4min左右時(shí)，可看到 雙凹片 左側(cè)溶液中出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，一部分血細(xì)胞在中央聚集 呈沙粒狀，溶液周圍較澄清；而右側(cè)溶 液無(wú)凝集現(xiàn)象。說(shuō)明土豆凝集素可以使血液發(fā)生凝集，而 PBS緩沖液則不能。圖1：剛開(kāi)始時(shí)雙凹片兩側(cè)溶液對(duì)比圖圖2： 4min時(shí)雙凹片兩側(cè)溶液對(duì)比圖第7頁(yè)共6頁(yè) 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告II.如圖3、圖4所示：在10X10顯微鏡下觀察，可看到左側(cè)溶液中血細(xì)胞聚集，凝結(jié)成塊狀， 而右側(cè)溶液中血細(xì)胞分散均勻，呈透明狀。圖4:( 10X10)顯微鏡下觀察圖(右側(cè))III .在高倍鏡下觀察

7、如圖5所示，可較清楚的看到血細(xì)胞聚集在一起，還可看到少數(shù)未發(fā)生 凝集的血細(xì)胞；”高倍鏡下（10 >40）,觀察到的凝集現(xiàn)象由以上的觀察可知：細(xì)胞凝集的時(shí)間較快，4min左右就可以發(fā)生明顯凝集現(xiàn)象；細(xì)胞凝 集的時(shí)間也受到土豆凝集素的濃度，以及血細(xì)胞的濃度影響，一般來(lái)說(shuō)，凝集素的濃度越高， 血細(xì)胞的濃度越高，細(xì)胞凝集的時(shí)間也會(huì)越短，凝集現(xiàn)象也越明顯，但在本次實(shí)驗(yàn)中未進(jìn)行 不同濃度對(duì)凝集時(shí)間的影響的實(shí)驗(yàn)；從空白對(duì)照還可以看出，細(xì)胞發(fā)生凝集時(shí)凝集素必不可少的，沒(méi)有細(xì)胞凝集素，細(xì)胞幾乎不發(fā)生凝集。實(shí)驗(yàn)反思：第一次滴加完溶液后，在晃動(dòng)雙凹片的過(guò)程中因操作不熟練，使兩個(gè)孔中的液體混到了 一起，因此重新滴加了一次；在使用雙凹片時(shí)要注意搖動(dòng)的技巧，不可前后或左右單一地?fù)u 動(dòng)，應(yīng)該一手固定，一手成環(huán)形方向搖動(dòng)，使凹槽內(nèi)的液體轉(zhuǎn)動(dòng)起來(lái)，同時(shí)注意滴加的液體 不宜過(guò)多，若加多了可用吸水紙吸掉部分多余液體，避免兩個(gè)凹槽內(nèi)的液體相互接觸；【注意事項(xiàng)】1. 實(shí)驗(yàn)前確定好雙凹片的反正面，做好適當(dāng)標(biāo)記；2. 注意控制加入雙凹片孔中的液體的量，以免使雙凹片的2個(gè)孔中的液體混合；3. 搖晃雙凹片時(shí)要注意搖動(dòng)的技巧，不可前后或左右單一地?fù)u動(dòng)，應(yīng)該一手固定，一手成 環(huán)形方向搖動(dòng)，使凹槽內(nèi)的液體轉(zhuǎn)動(dòng)起來(lái)；4. 顯微鏡下觀察時(shí)