代謝型谷氨酸受體亞型在成年獼猴腰骶段脊髓中的分布

1、代謝型谷氨酸受體亞型在成年獼猴腰骶段脊髓中的分布         07-08-17 16:17:00     編輯：studa20                             &

2、#160;          作者：賀世明趙磊郎兵焦西英趙振偉高國(guó)棟 【關(guān)鍵詞】  脊髓Distribution of subtypes of metabotropic glutamate receptors in lumbosacral spinal cord of adult macaques【Abstract】 AIM:  To explore morphological evidence for the possible roles of metabotropic glutam

3、ate receptors in the lumbosacral spinal cord in adult macaques. METHODS:  The distribution patterns of metabotropic glutamate receptors (mGluRs) in the lumbosacral spinal cord were studied by employing the immunohistochemical technique. RESULTS:  MGluR1 distributed throughout all the lamin

4、ae of spinal cord. The immunoreactive (ir) products were located on the soma or protrudes of a few interneurons together with the neuropil in the superficial layers of the spinal dorsal horn. In the deeper layers of spinal dorsal horn, intermediate nucleus and the ventral horn, mGluR1ir neurons were

5、 observed. The neurons in the ventral horn showed the strongest immunoreactivity. mGluR5ir products, similar with those of mGluR1, also distributed in neuropil and the soma together with protrudes of some interneurons in the superficial layers of the spinal dorsal horn. In other areas of spinal cord

6、, however, abundant mGluR5ir neuronal soma and protrudes were also observed. MGluR2/3 and mGluR7 distributed in the neuropil of the superficial layers in spinal dorsal horn. No neurons showed mGluR2/3/mGluR7immunoreactivity. CONCLUSION:  MGluRs may play some important modulatory roles in the tr

7、ansmission or integration of information in the spinal local circuits of the adult mammals. 【Keywords】 receptors，metabotropic glutamate;spinal cord;macaca mulatta; immunohistochemistry【摘要】 目的： 為探討代謝型谷氨酸受體亞型在獼猴脊髓中可能的功能提供形態(tài)學(xué)依據(jù).方法： 采用免疫組織化學(xué)技術(shù), 在光學(xué)顯微鏡下觀察代謝型谷氨酸受體亞型(mGluR1, 2/3, 5, 7) 在大鼠腰骶段脊髓內(nèi)的分布.結(jié)果： mGl

8、uR1在脊髓全層中均有分布.在后角淺層中，免疫染色陽(yáng)性產(chǎn)物主要見(jiàn)于神經(jīng)氈和少量中間神經(jīng)元的胞體及突起.在后角深層、中間帶外側(cè)核以及脊髓前角中則分布有較多數(shù)量的免疫染色陽(yáng)性的神經(jīng)元胞體和突起，其中前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元呈免疫染色強(qiáng)陽(yáng)性；mGluR5樣免疫染色陽(yáng)性結(jié)構(gòu)在后角淺層中也主要分布于神經(jīng)氈和中間神經(jīng)元的胞體及突起，而在脊髓的其他區(qū)域則分布有大量的免疫染色強(qiáng)陽(yáng)性神經(jīng)元及突起；mGluR2/3和mGluR7亞型主要分布在脊髓后角淺層神經(jīng)氈，未見(jiàn)免疫染色陽(yáng)性神經(jīng)元.結(jié)論： 代謝型谷氨酸受體可能對(duì)成年哺乳動(dòng)物脊髓局部環(huán)路的信息傳遞與整合發(fā)揮調(diào)節(jié)作用.【關(guān)鍵詞】 受體，親代謝性谷氨酸鹽；脊髓；獼猴；免疫組織

9、化學(xué)0引言谷氨酸(Glutamate, Glu) 是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì), 與興奮性突觸傳遞、神經(jīng)元的發(fā)育和死亡、突觸的可塑性以及某些神經(jīng)疾病的發(fā)生密切相關(guān).長(zhǎng)期以來(lái)，人們一直認(rèn)為谷氨酸僅通過(guò)一類配體門控性離子通道受體（即NMDA、AMPA和KA受體）來(lái)發(fā)揮對(duì)突觸傳遞的快速性調(diào)節(jié)作用.然而，近年的實(shí)驗(yàn)表明, 谷氨酸還可通過(guò)一類G蛋白偶聯(lián)受體，即代謝型谷氨酸受體(metabotropic glutamate receptors, mGluRs)，參與離子通道的調(diào)節(jié)和第二信使的合成.應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)迄今已成功地克隆出8種亞型代謝型谷氨酸受體 (mGluR18) 1-4.根據(jù)各亞型間

10、氨基酸序列的同源性、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制以及藥理學(xué)特性, 又可將之歸類為3組: mGluR1和mGluR5; mGluR2和mGluR3; mGluR4,mGluR6，mGluR7和mGluR8.脊髓是哺乳動(dòng)物軀體和內(nèi)臟感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)的低級(jí)中樞.脊髓后角是機(jī)體接受傷害性信息傳入的重要部位，也是對(duì)傷害性信息進(jìn)行加工、整合處理的初級(jí)門戶.脊髓前角富集運(yùn)動(dòng)性神經(jīng)元，同時(shí)也是下行性傳導(dǎo)束發(fā)揮運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)作用的最終靶區(qū).大量的研究表明： 大鼠脊髓中含有豐富的代謝型谷氨酸受體5-10，它們?cè)诩顾杷降男畔鬟f與整合過(guò)程中發(fā)揮重要的作用.然而，代謝型谷氨酸受體各個(gè)亞型在靈長(zhǎng)類動(dòng)物脊髓中的分布情況，目前則鮮見(jiàn)報(bào)道.因此, 本

11、研究采用免疫組織化學(xué)方法系統(tǒng)地觀察了代謝型谷氨酸受體各個(gè)亞型在成年獼猴腰骶段脊髓中的分布情況.1材料和方法12方法121免疫組織化學(xué)方法取出脊髓行冰凍切片，片厚30 m.切片分為7套, 充分漂洗后收集于001   mol/L PBS內(nèi).第14套切片分別行mGluR1、mGluR2/3、mGluR5和mGluR7免疫組織化學(xué)染色.具體步驟如下： 兔抗mGluR1、mGluR2/3、mGluR5和mGluR7抗體室溫孵育過(guò)夜, 稀釋度分別為11000, 1500, 11000, 1500.抗體特異性均已鑒定1-4； 生物素標(biāo)記的羊抗兔IgG (Sigma, 1400)室溫孵育2

12、 h； ABC復(fù)合物(Sigma, 1400)室溫孵育2 h.切片最后在含有05 g/L DAB (Sigma)和003 g/L H2O2的005 mol/L TrisHCl緩沖液(pH 76)內(nèi)呈色2030 min.以上各步驟間均用001 mol/L PBS充分漂洗.呈色結(jié)束后裱片、脫水透明、DPX 封片.第5套切片行Nissl染色.122第6、7套切片分別用正常兔血清和001 mol/L PBS替代一抗, 再按上述步驟進(jìn)行免疫染色，結(jié)果均為陰性.2結(jié)果3討論在本研究中，我們觀察到I組代謝型谷氨酸受體（mGluR1和mGluR5）在成年獼猴脊髓全層中均有表達(dá).其中，mGluR1在脊髓前角神經(jīng)元中表達(dá)強(qiáng)度較高，這一現(xiàn)象與mGluR1在大鼠脊髓中的分布情況相類似但又有所不同.大鼠脊髓中，mGluR1主要分布在后角深層和前角7.而Aronica等11則報(bào)道在正常人脊髓中，mGluR1也分布于脊髓全層中.在大鼠脊髓中，mG