柴胡黃芩配伍抗大鼠急性酒精性肝損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究(一)

1、柴胡黃芩配伍抗大鼠急性酒精性肝損傷作用的實(shí)驗(yàn)研究(一)    作者：劉仁慧 王憲齡 劉方洲【關(guān)鍵詞】 柴胡摘要：目的研究柴胡、黃芩以不同劑量比例配伍（21，11，12）對(duì)大鼠急性酒精性肝損傷的防治作用。方法采用白酒灌胃造成大鼠急性酒精性肝損傷模型，以單味柴胡黃芩和小柴胡沖劑作為對(duì)照藥，通過(guò)血清和肝勻漿乙醇脫氫酶（ADH）的測(cè)定和肝組織病理學(xué)的觀察，探討柴胡黃芩配伍對(duì)急性酒精性肝損傷的影響。結(jié)果柴胡黃芩12組對(duì)各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)影響最顯著。結(jié)論不同比例配伍的柴胡黃芩抗急性酒精性肝損傷中發(fā)揮作用的強(qiáng)弱趨勢(shì)不同，以柴胡黃芩12組療效較佳。關(guān)鍵詞：急性酒精性肝損傷；

2、柴胡； 黃芩； 中藥配伍Experimental Study of Radix Bupleuri and Radix Scutellare in Compatibility on Acute Alcoholic Liver InjuryAbstract：ObjectiveTo study the prevention and treatment effects of Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility ratio of different dosage by two to one,one to one,one to tw

3、o on acute alcoholic liver injure by animal experiments.MethodsRat model was duplicated by the white spirit through consecutive gastric infusion for ten days. Radix Bupleuri, Radix Scutellariae and XiaoChaihu Granules were used as positive control medicines, respectively.By investigating the concent

4、ration of alcohol dehydrogenase(ADH)in blood serum and liver and the alteration of livers pathology ,explore the effects of Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility on acute alcoholic liver injure.ResultsThe effect of Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility by the ratio

5、of one to two was better than any other treatment groups.ConclusionThe effects of Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility ratio of different dosage were different on acute alcoholic liver injure.Radix Bupleuri and Radix Scutellariae in compatibility by the ratio of one to two had the

6、best function.Key words：Acute alcoholic liver injury； Radix Bupleuri； Radix Scutellariae； Compatibility of Chinese Materia Medica； Experimental study中醫(yī)學(xué)認(rèn)為酒為濕熱有毒之品，過(guò)飲之必傷及脾胃肝膽而引發(fā)疾病。柴胡黃芩藥是傷寒論柴胡系列方中最有代表意義的基本配伍，可疏肝清肝，和解少陽(yáng)，針對(duì)急性酒精中毒病因病機(jī)，有著廣泛的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)。我們前期的研究表明，柴胡黃芩配伍對(duì)小鼠急性酒精性肝損傷有良好的保護(hù)作用1。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠急性酒精性肝損傷模型，進(jìn)一步

7、探討柴胡黃芩配伍對(duì)其的保護(hù)作用。1 材料與方法1.1 動(dòng)物健康Wistar大鼠96只，雄性，體重（170±20）g，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2 藥物柴胡，傘形科多年生草本植物北柴胡Bupleurum chinense DC.的干燥根，產(chǎn)于河南省嵩縣。黃芩，唇形科多年生草本植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，產(chǎn)于山東莒縣。小柴胡顆粒，天津市愛(ài)康藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號(hào)：011202。1.3 主要試劑與儀器56度二鍋頭白酒（批號(hào)：020128），北京京宮城酒業(yè)技術(shù)發(fā)展公司生產(chǎn)。甘氨酸（批號(hào)：20011120），上海化學(xué)試劑采購(gòu)供應(yīng)站。氫氧化鈉（批

8、號(hào)：20000710），鄭州化學(xué)試劑二廠（進(jìn)口分裝）。輔酶（NAD，批號(hào)：6110），美國(guó)Biomol公司（原裝）。722光柵分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠。1.4 方法大鼠隨機(jī)分8組，除正常組（以等體積的蒸餾水灌胃）外，其余各組均按7 ml白酒/kg/次灌胃給予56度二鍋頭白酒，2次/d，連續(xù)10 d造模結(jié)束2。自造模第1天起，每日灌胃給藥2次。正常對(duì)照組和模型對(duì)照組灌服等體積的蒸餾水，其余各組分別灌胃給予相應(yīng)的藥物，劑量皆為10 ml/kg(12 g/kg）連續(xù)10 d。末次給酒后24 h，腹主動(dòng)脈取血制備血清。迅速摘取肝臟右葉以10%的甲醛溶液固定，采用HE染色方法，觀察病理形態(tài)學(xué)；剪下

9、肝左外葉制成10%的勻漿。1.5 乙醇脫氫酶檢測(cè)方法（底物發(fā)光法） 參照文獻(xiàn)3，4方法自行測(cè)定，具體操作為：配制0.1 mol/L甘氨酸氫氧化鈉緩沖液（pH=9.0），77 mmol/ L NAD溶液，將以上兩液按61混合配成試劑，配制825 mmol/L乙醇溶液作為試劑。樣品100 l，試劑1 500 l。預(yù)孵5 min后，加試劑50 l（空白對(duì)照管加等量蒸餾水），22水浴反應(yīng)1 h，分光光度計(jì)340 nm波長(zhǎng)處，以空白對(duì)照管調(diào)零，讀取吸光度值。ADH活力單位定義：每分鐘催化1 mol還原型輔酶（NADH）的酶量為1個(gè)單位。1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理病理學(xué)半定量等 級(jí)資料采用Ridit分析法；計(jì)量數(shù)

10、據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s) 表示，組間比較采用方差齊性檢驗(yàn)及單因方差分析。2 結(jié)果2.1 一般情況觀察模型對(duì)照組大鼠實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)造模后反應(yīng)不一，或先出現(xiàn)興奮狀態(tài),在籠內(nèi)奔跑，打斗，爾后見(jiàn)四肢癱軟、行走不穩(wěn)、臥倒酣睡等中樞神經(jīng)抑制狀態(tài)；或直接進(jìn)入中樞抑制狀態(tài)。造模3 d左右，灌酒后興奮不已不明顯。隨著造模時(shí)間的延長(zhǎng)，出現(xiàn)酣睡的時(shí)間逐漸縮短，酣睡持續(xù)時(shí)間逐漸延長(zhǎng)。大便稀軟不成形，毛發(fā)干枯無(wú)光澤，飲食量減少，體重明顯降低，精神萎靡不振。各給藥組一般情況好于模型對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中模型對(duì)照組大鼠死亡3只，柴胡組、柴胡黃芩11組大鼠各死亡2只，其余各組死亡1只。2.2 各組大鼠血清樣和肝

11、組織中ADH含量的比較表1結(jié)果顯示：與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組肝勻漿和滲漏入血清中的ADH含量顯著增高（均為P0.01）。與模型對(duì)照組比較，柴胡組、3個(gè)柴胡黃芩配伍組、小柴胡組均能明顯降低血清中ADH含量；對(duì)肝臟中ADH含量的增高有明顯改善作用的是小柴胡組、柴胡黃芩21組和12組，并顯示柴胡黃芩配伍后以12組對(duì)肝臟及血清ADH的改善作用最優(yōu)。表1 柴胡黃芩配伍對(duì)大鼠血清和肝組織中ADH的影響（略）2.3 各組大鼠肝組織脂肪變性、炎癥變性病理分級(jí)統(tǒng)計(jì)表23結(jié)果顯示：各造模組大鼠肝組織脂肪變性與炎癥變性與正常對(duì)照組均有顯著性差異，表明酒精對(duì)肝臟造成顯著的脂肪及炎癥變性的病理改變；柴胡黃芩11組、

12、12組對(duì)肝組織脂肪變性與炎癥變性均有顯著的發(fā)送作用，小柴胡組對(duì)炎癥變性改善作用明顯。表2 柴胡黃芩配伍對(duì)大鼠肝組織脂肪變性的影響（略）表3 柴胡黃芩配伍對(duì)大鼠肝組織炎癥變性的影響（略）3 討論ADH是特異性很廣泛的酶，主要作用是催化乙醇生成具有高度毒性的乙醛，后者在肝細(xì)胞線粒體中由乙醛脫氫酶（ALDH）轉(zhuǎn)化為乙酸。研究證實(shí)，大鼠酒精性肝損傷（ALD）時(shí)胞漿質(zhì)ADH活性增強(qiáng)，導(dǎo)致乙醇氧化加強(qiáng)，肝內(nèi)耗氧增加，伴隨著大量NAD被還原形成NADH，使NADH/NAD比值相應(yīng)增高而失衡，改變了細(xì)胞氧化還原狀態(tài)，嚴(yán)重干擾了細(xì)胞的新陳代謝，使三羧酸循環(huán)受到抑制，導(dǎo)致肝細(xì)胞的損傷。隨著ALD的發(fā)生發(fā)展，肝AD

13、H活性進(jìn)行性增加，其增加程度和ALD的病理演變呈正相關(guān)，所以ADH酶活性水平在酒精性肝損傷病理學(xué)具有重要意義。同時(shí)由于乙醛生成增加，乙醛較乙醇對(duì)肝毒性更強(qiáng)，伴隨著線粒體ALDH活性降低，未被氧化的乙醛進(jìn)入血中，通過(guò)黃嘌呤氧化酶轉(zhuǎn)變?yōu)槌趸?，?dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化，促進(jìn)肝損傷。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，大鼠急性酒精性肝損傷時(shí)血清和肝組織中ADH活性均明顯增強(qiáng)；柴胡黃芩配伍組、小柴胡組、柴胡組均能明顯降低血清ADH水平，提示能減輕肝細(xì)胞損傷，使肝中ADH滲漏入血減少；柴胡黃芩21組、12組、小柴胡組能抑制肝臟中ADH活性的增高，以柴胡黃芩配伍組中12組的作用最佳，與小柴胡組的作用相仿，表明影響乙醇代謝的關(guān)鍵酶ADH、調(diào)節(jié)乙醇的代謝使之恢復(fù)正常、抑制乙醛的過(guò)度產(chǎn)生是柴胡黃芩配伍抗酒精性肝損傷的另一重要機(jī)制。同時(shí)，肝臟的病理學(xué)的結(jié)果也證實(shí)在本實(shí)驗(yàn)中選擇的3組不同比例的柴胡黃芩配伍，有隨著黃芩劑量的增加，抗急性酒精性肝損傷的作用加強(qiáng)的趨勢(shì)。這與中醫(yī)對(duì)急性酒精性肝損傷的辨證論治，對(duì)證治療的認(rèn)識(shí)相一致，以黃芩清利中焦?jié)駸峋贫眷畛虏≈盀橹?，輔以柴胡疏解濕熱導(dǎo)致的肝郁氣滯，治病求本故有較佳療效。參考文獻(xiàn)：1 劉仁慧，王憲齡，宋 寧.柴胡黃芩酒精作用的研究J.中藥藥理與臨