小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒總黃酮含量的比較研究(一)

1、小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒總黃酮含量的比較研究(一)    作者：樸惠順 ，金光洙，張善玉 【關(guān)鍵詞】 小葉錦雞兒；,朝鮮錦雞兒；,總黃酮；,分光光度法摘要：目的比較錦雞兒屬植物小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒總黃酮的含量。方法以索氏提取法提取總黃酮類成分，以硝酸鋁-亞硝酸鈉分光光度法測定總黃酮含量。結(jié)果小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒根的總黃酮含量分別為0.206%，0.146%。結(jié)論 兩種植物根中的總黃酮含量都較低（小于1%），其中小葉錦雞兒根的總黃酮含量高于朝鮮錦雞兒根的總黃酮含量。關(guān)鍵詞：小葉錦雞兒； 朝鮮錦雞兒； 總黃酮； 分光光度法Abstract：Objectiv

2、e To compare the total flavonoid contents in Caragana microphylla Lam and C. koreana Nak roots.MethodsThe total flavonoids were extracted by Soxhlet extraction, and were determined by Al（NO3)3-NaNO2 spectrophotometry method.ResultsThe content of total flavonoids in Caragana microphylla Lam was 0.206

3、%, and the total flavonoids in C. korea Nak was 0.146%. ConclusionThe total flavonoids in root of the two plants were all low, and it was higher in Caragana microphylla Lam than in C. koreana Nak.Key words：Caragana microphylla Lam； C.koreana Nak.； Flavonoids； Spectrophotometry錦雞兒屬植物Caragana Fabr是豆科落

4、葉灌木，分布于歐亞大陸，全世界共有百余種，我國有66種，主要分布在北方干旱，半干旱地區(qū)，其栽培種通稱為檸條1。錦雞兒屬植物除作為防風(fēng)固土，保持水土，改善生境的先鋒樹種和優(yōu)質(zhì)的畜生飼料外，還具有藥用價值。一般以其根或花入藥。民間用以治療高血壓病、出血癥、婦科疾患、四肢無力、擦傷挫傷、頭暈耳鳴、肺虛久咳、小兒消化不良等癥2，3。小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒在延邊地區(qū)具有豐富的資源，朝醫(yī)稱小葉錦雞兒為骨草（治療骨髓炎的草藥），是民間常用藥材。味苦、性寒，具有祛風(fēng)濕、活血、鎮(zhèn)靜、強心、利尿、消炎等功效4。民間上常用于高血壓病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、婦科疾病等癥的治療。為充分利用我州資源優(yōu)勢，開發(fā)錦雞兒屬植物，擴大黃

5、酮類化合物的提取資源，對該屬兩種植物小葉錦雞兒和朝鮮錦雞兒根的總黃酮含量進行了測定并比較。1 材料與儀器1.1 材料小葉錦雞兒、朝鮮錦雞兒根采集于和龍市龍華鄉(xiāng)，由延邊大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室劉永鎮(zhèn)教授鑒定為Caragana microphylla Lam.的根，C. koreana Nak的根，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品 中國藥品生物制品檢定所（批號080-9002），其他試劑均為分析純。1.2 儀器S22PC型可見分光光度計（上海棱光技術(shù)有限公司），SK1200H超聲震蕩儀（上?？茖?dǎo)超生儀器有限公司），置索氏提取器。2 方法與結(jié)果2.1 聚酰胺的處理5稱取5 g聚酰胺粉末，加適量95 %乙醇浸泡，攪拌，靜置，裝

6、柱。先用聚酰胺體積的約56 倍量的95%乙醇洗脫，然后用蒸餾水洗脫至無乙醇味為止即可，備用。2.2 樣品溶液的制備小葉錦雞兒和朝鮮錦雞兒的根粗粉，分別精密稱取1.000 0 g，置索氏提取器中用乙醚脫脂6，即加乙醚加熱回流至提取液無色，冷卻，棄去乙醚液，加70 %乙醇50水浴浸提5 h，超生震蕩提取1 h，過濾，濾渣用70 %乙醇洗滌23次，合并濾液與洗滌液，濃縮，拌入預(yù)先處理好的聚酰胺柱。首先用水洗脫，再用95 %乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮，再用70%乙醇定容至50 ml，待用。2.3 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備 精密稱取120干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品0.1017g，用少量50 %乙醇溶解后移

7、至50 ml棕色容量瓶中，用70 %乙醇定容至刻度，放入冰箱中備用。2.4 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的制備 精密吸取10 ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)貯備液于100 ml容量瓶中，用70 %乙醇稀釋至刻度。2.5 最大吸收波長的確定 取4個25 ml容量瓶，1號瓶不加， 2號瓶中加1 ml蘆丁標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液，最后兩個分別加入2 ml小葉錦雞兒樣品液與朝鮮錦雞兒樣品液。再4個瓶中各加水至6 ml, 加5 %亞硝酸鈉溶液1 ml，使混勻，放置6 min。加10 %硝酸鋁溶液1 ml，使混勻，放置6 min。加4 %氫氧化鈉試液10 ml，再加水至刻度，搖勻，放置15 min后以1號瓶為空白，在400600 nm波長范圍測定標(biāo)準(zhǔn)

8、品和樣品液的吸光度。用所得數(shù)據(jù)畫吸收曲線，樣品與對照品在510 nm有共同的最大吸收峰，故實驗確定510 nm為測定波長。2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備7精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液0.0，1.0，3.0，5.0，7.0 ml分別置于25 ml容量瓶中按2.5項下自“加水至6 ml”起同法操作，分別在510 nm處測定其吸光度。結(jié)果見表1。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量（m）為橫坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線（見圖1）。得A與m的線性回歸方程： A=0.2482m-0.000 9，相關(guān)系數(shù)r =0.998 2。2.7 穩(wěn)定性實驗精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液1.0 ml后按2.5項下自“加水至6 ml”起同法操作，在060

9、 min內(nèi)每隔5 min測定一次吸光度。60 min內(nèi)吸光度由 0.040降至0.031。結(jié)果見表2。經(jīng)t檢驗，兩者之間沒有顯著性差異，RSD為 0.24%；35 min內(nèi)吸光度由0.040降至0.037,RSD為 0.12 %。說明黃酮類成分在60 min內(nèi)基本穩(wěn)定，最好在35 min內(nèi)完成測定。表1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品質(zhì)量與吸光度的關(guān)系（略）結(jié)果表明，在0.2031.424 mg范圍內(nèi)呈較好的線性關(guān)系。圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線（略）2.8 精密度實驗 精密吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液2 ml于25 ml容量瓶中，共5份，按上述方法顯色后于510 nm測定吸光度。每份測定3次，記錄吸光度值。這些吸光度值的RSD值為0

10、.68%。表明本方法有較高的精密度。表2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣品吸光度與時間的關(guān)系（略）2.9 重現(xiàn)性實驗 精密吸取2 ml 小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒樣品液各3份，同法顯色后測定吸光度，每份測3次。這些吸光度值的RSD值分別為1.17%，2.09%。表明本文方法有較好的重現(xiàn)性。2.10 回收率實驗精密稱取小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒根的粗粉約1g，各3份，按2.2方法提取，其中按80%，100%，120%的比例分別加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按2.5方法測定，每份測3次。計算回收率。結(jié)果見表34。表3 小葉錦雞兒根的回收率測定結(jié)果（略）表4 朝鮮錦雞兒根的回收率測定結(jié)果（略）回收率測定結(jié)果，小葉錦雞兒根的回收率平均值為

11、98.45%，RSD為1.14%；朝鮮錦雞兒根的回收率平均值為99.15%，RSD為0.90%。表明本方法準(zhǔn)確度較好，方法可行。2.11 含量測定 精密吸取樣品液26 ml，置于25 ml 容量瓶中，5次重復(fù)，按2.5項下自“加水至6 ml”起同法操作，進行顯色，在510 nm 處測定其吸光度，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程，換算后得到植物材料-小葉錦雞兒根與朝鮮錦雞兒根中的總黃酮含量。結(jié)果見表5。表5 小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒根的總黃酮含量（略）3 討論通過方法學(xué)考察，該方法操作簡便，準(zhǔn)確，適合于測定小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒根的總黃酮含量。表5顯示，小葉錦雞兒與朝鮮錦雞兒根的總黃酮含量分別為0.206 %，0.146 %。其中小葉錦雞兒根的總黃酮含量高于朝鮮錦雞兒根的總黃酮含量，但都不足1%。以上只是對錦雞兒屬中兩種植物根的總黃酮含量進行初步測定的結(jié)果，對于該屬植物類黃酮化合物在不同部位、不同生長時期和生長地的分布規(guī)律及類黃酮化合物的類型有待進一步研究。參考文獻：1 牛西午.中國錦雞兒屬植物資源研究J.西北植物學(xué)報,1999,19(5)：107.2 牛西午.檸條研究論文集M.太原:山西科學(xué)技術(shù)出版社,2003:163.3 江蘇新醫(yī)院.中藥大辭典M.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1993：979,1402,1697.4 延邊中草藥編寫組. 延邊