小鼠實(shí)驗(yàn)操作

1、小鼠實(shí)驗(yàn)操作（一）、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇原則1、盡量選擇與人體結(jié)構(gòu)、機(jī)能、代謝及疾病特征相似的動(dòng)物；2、選用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的解剖、生理特點(diǎn)應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、根據(jù)人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)同一刺激的反應(yīng)差異，選用具有明顯反應(yīng)的動(dòng)物；4、根據(jù)生物醫(yī)學(xué)研究必須達(dá)到的精確度，選用結(jié)構(gòu)功能簡(jiǎn)單又能反映研究指標(biāo)的動(dòng)物；5、選用患有人類類似疾病的近交系或突變系動(dòng)物；6、選用與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、技術(shù)條件、實(shí)驗(yàn)方法等相適應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物；7、在不影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c結(jié)果的前提下，選擇最易獲得、最經(jīng)濟(jì)、便于操作管理的動(dòng)物；8、供實(shí)驗(yàn)用的動(dòng)物應(yīng)具備質(zhì)量合格證。（二）、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的特點(diǎn)1、小白鼠是實(shí)驗(yàn)室最常用的一種動(dòng)物。易于大量繁殖，且價(jià)廉，適用需要

2、大量動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)，如藥物篩選、半數(shù)致死量測(cè)定、 藥物效價(jià)比較、抗感染、抗腫瘤藥物及避孕藥物的研究等。2、大白鼠與小白鼠相似。一些在小白鼠身上不便進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)可選用大白鼠，如藥物抗炎作用的實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠踝關(guān)節(jié)制備 關(guān)節(jié)炎的模型。此外，也可用大白鼠直接記錄血壓、作膽管插管，或用大白鼠觀察藥物的亞急性或慢性毒性。大白 鼠的血壓和人相近，且穩(wěn)定，現(xiàn)常用于抗高血壓藥物實(shí)驗(yàn)。3、豚鼠是實(shí)驗(yàn)室常用動(dòng)物之一。對(duì)組織胺很敏感，容易致敏，常用于平喘藥和抗組胺藥的實(shí)驗(yàn)。對(duì)結(jié)核菌亦敏感，故也用 于抗結(jié)核藥的研究。此外還用于離體心臟及平滑肌實(shí)驗(yàn)，其乳頭肌和心房常用于電生理特性及心肌細(xì)胞動(dòng)作電位實(shí) 驗(yàn)，研究抗心律失常藥物的

3、機(jī)理。（三）、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇的注意事項(xiàng)由于動(dòng)物對(duì)外界刺激的反應(yīng)存在個(gè)體差異，在選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，還應(yīng)注意動(dòng)物的年齡、體重、性別、生理狀 態(tài)、健康狀況及其品系、等級(jí)等因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別鑒別與編號(hào)（一）、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的性別鑒別藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)常用的動(dòng)物中，較大的動(dòng)物（如家兔、貓、犬等）可以從生殖器分辨其性別，而較小的動(dòng)物（如小白鼠、大白鼠、豚鼠等）的性別鑒別，通常以肛門與生殖孔之間的距離來判斷，距離近者為雌性，距離遠(yuǎn)者為雄性。（二八實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)藥理實(shí)驗(yàn)中常用多只動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，為避免混亂應(yīng)將動(dòng)物進(jìn)行編號(hào)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物編號(hào)的目的在于將觀察范圍內(nèi)的同種動(dòng)物進(jìn)行區(qū)別，以便于觀察。常用的方法有染色法、

4、耳緣剪孔法、烙印法和號(hào)牌法等，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?動(dòng)物種類和具備的條件選用，一般編號(hào)應(yīng)具有清晰易辨、簡(jiǎn)便耐久的特點(diǎn)。貓、犬、兔等較大的動(dòng)物可用特別的號(hào) 碼牌固定于身上。小白鼠、大白鼠及白色家兔等用黃色苦味酸涂于動(dòng)物不同部位進(jìn)行染色標(biāo)記而編號(hào)。例如在小白鼠，右前肢皮膚外側(cè)涂色標(biāo)記為 1號(hào)，腹部右外側(cè)皮膚涂色標(biāo)記為 2號(hào)，右后肢皮膚外側(cè)涂色標(biāo)記為 3號(hào)，頭部皮 膚涂色標(biāo)記為4號(hào)，背部正中皮膚標(biāo)記為 5號(hào)，尾巴根部標(biāo)記為 6號(hào)，7、8、9號(hào)在左側(cè)同1、2、3號(hào)，第10號(hào)不 涂黃色。大白鼠的編號(hào)與小白鼠相同。第二節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的捉拿、給藥和處死方法（一）、小白鼠、大白鼠1、捉拿法：小白鼠 可采取雙手法和單手

5、法兩種形式。雙手法：右手提起鼠尾，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，向后方輕拉，小白鼠則將前肢固定于粗糙面上。此時(shí)迅速用左手拇指和食指捏住小白鼠頸背部皮膚（圖1），并以小指與手掌尺側(cè)夾持其尾根部，固定于手中。單手法：小白鼠置于籠蓋上，先用左手食指與拇指抓住鼠尾，手掌尺側(cè)及小指夾住尾根部，然后用左手拇指與 食指捏住頸部皮膚。羽1小白頂?shù)淖叫羶臃ㄈ朮白口茁捉寸茬.區(qū)s小m屛的思酉有舉醫(yī)d小m龍走飯噩注射巧借大白鼠 容易激怒咬人，捉持時(shí)左手應(yīng)戴防護(hù)手套或用厚布蓋住大鼠，先用右手抓住鼠尾，再用左手拇指和食指握 住頭部，其余手指與手掌握住背部和腹部（圖2）。不要用力過大，切勿捏其頸部，以免窒息致死。2 、給藥

6、方法小白鼠(1) 、灌胃(po):左手固定小鼠，右手持灌胃器，灌胃針頭自口角進(jìn)入口腔，緊貼上腭插入食道(圖3)，如遇阻力，將灌胃針頭抽回重插，以防損傷。常用灌胃量為ml/10g 。(2) 、皮下注射(ih):可用腹部、背部、腹股溝的皮下，此處皮膚比較松弛，也可由助手協(xié)助。注藥量一般為 ml/10g 。(3) 、肌肉注射(im): 一人抓住小鼠頭部皮膚和尾巴，另一人持連4號(hào)針頭的注射器，將針頭刺入后腿外側(cè)肌肉。 注射量一般不超過 ml/只。(4) 、靜脈注射(iv):將小鼠置入固定器，酒精涂擦尾部，以使血管擴(kuò)張。自尾部末端刺入，刺入血管后抽針芯可見回血。常用注射量為ml/10g。(5) 、腹腔注

7、射(ip):將小鼠固定后，從下腹部外側(cè)進(jìn)針，深度較皮下注射深(圖4)。常用注射量為 ml/10g。大鼠 灌胃、腹腔注射、皮下注射及尾靜脈注射與小鼠相似。靜脈注射也可在麻醉下行舌下靜脈注射。3、處死方法(1)、頸椎脫位法：術(shù)者左手持鑷子或用拇指、食指固定小鼠頭后部，右手捏住鼠尾，用力向后 上方牽拉，聽到鼠頸部喀擦聲即頸椎脫位，脊髓斷裂，鼠瞬間死亡。(2)、打擊法：用手抓住鼠的尾并提起，朝地面用力撞擊鼠頭致死(也可用小木錘用力打擊鼠頭(3 )、吸入麻醉法：吸過量的乙醚。(4 )、大量放血法：可采用眼眶動(dòng)、靜脈放血致死。(5)、空氣栓塞法：將空氣急速注入靜脈致死。小白鼠可注入空氣。(三)、豚鼠1、捉

8、拿法：豚鼠性情溫順不咬人，可用左手直接從背側(cè)握持前部軀干，體重小者用一只手捉持，體重大者宜用雙手，右手托住臀部(圖6)2、給藥方法灌胃(見圖6)、皮下注射、肌肉注射及腹腔注射方法基本同小鼠，給藥量稍多。靜脈注射可選后腳掌外側(cè)靜脈或頸 外靜脈圍豚吊朗打筆吋-良張敘的生;?右出3、處死方法豚鼠可采用注射麻醉法，即注射戊巴比妥鈉麻醉處死。豚鼠可注射麻醉劑量的3倍以上的量腹腔內(nèi)注射。還可采用吸入麻醉法。第二節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的取血方法一、小鼠和大鼠1、剪尾取血法：將清醒鼠裝入深顏色的布袋中，將鼠身裹緊，露出尾巴，用酒精涂擦或用溫水浸泡使血管擴(kuò)張，剪斷尾尖后，尾靜脈血即可流出，用手輕輕地從尾根部向尾尖擠捏，可取

9、到一定量的血液。取血后，用棉球壓迫止血。也可采用交替切割尾靜脈方法取血。用一鋒利刀片在尾尖部切破一段尾靜脈，靜脈血即可流出，每次可取ml，供一般血常規(guī)實(shí)驗(yàn)。三根尾靜脈可替換切割，由尾尖向根部切割。由于鼠血易凝，需要全血時(shí)，應(yīng)事先將抗凝劑置于采血管中， 如用血細(xì)胞混懸液，則立即與生理鹽水混合。2、眼球后靜脈叢取血法：左手持鼠，拇指與中指抓住頸部皮膚，食指按壓頭部向下，阻滯靜脈回流，使眼球后靜脈叢充血，眼球外突。右手持1 %肝素溶液浸泡過的自制吸血器，從內(nèi)毗部刺入，沿內(nèi)下眼眶壁，向眼球后推進(jìn)45 mm,旋轉(zhuǎn)吸血針頭，切開靜脈叢，血液自動(dòng)進(jìn)入吸血針筒， 輕輕抽吸血管（防止負(fù)壓壓迫靜脈叢使抽血更困難

10、），拔出吸血針，放松手壓力, 出血可自然停止。也可用特制的玻璃取血管（管長(zhǎng)710 cm，前端拉成毛細(xì)管，內(nèi)徑mm,長(zhǎng)為1 cm，后端管徑為cm）。必要時(shí)可在同一穿刺孔重復(fù)取血。此法也適用豚鼠和家兔。3、眼眶取血法：左手持鼠，拇指與食指捏緊頭頸部皮膚，使鼠眼球突出，右手持彎鑷或止血鉗，鉗夾一側(cè)眼球部，將眼球摘出，鼠倒置，頭部向下，此時(shí)眼眶很快流血，將血滴入預(yù)先加有抗凝劑的玻璃管內(nèi)，直至流血停止。此法由于取血過程中動(dòng)物未死，心臟不斷跳動(dòng)，一般可取鼠體重4%5%的血液量，是一種較好的取血方法，但只適用一次性取血。4、心臟取血:動(dòng)物仰臥固定于鼠板上，用剪刀將心前區(qū)毛剪去，用碘酒、酒精消毒此處皮膚，在左

11、側(cè)第34肋間用左手食指摸到心搏，右手持連有 45號(hào)針頭的注射器，選擇心搏最強(qiáng)處穿刺，當(dāng)針頭正確刺入心臟時(shí)，鼠血由于心臟跳動(dòng)的 力量，血自然進(jìn)入注射器。5、斷頭取血：實(shí)驗(yàn)者帶上棉手套，用左手抓緊鼠頸部位，右手持剪刀，從鼠頸部剪掉鼠頭迅速將鼠頸端向下，對(duì)準(zhǔn)備有抗凝劑的 試管，收集從頸部流出的血液，小鼠可取血ml，大鼠可取血510 ml。6、頸動(dòng)靜脈、股動(dòng)靜脈取血：麻醉動(dòng)物背位固定，一側(cè)頸部或腹股溝部去毛，切開皮膚，分離出靜脈或動(dòng)脈，注射針沿動(dòng)靜脈走向刺入血管。20g小鼠可抽血 ml , 300 g大鼠可抽血8 ml。也可把頸靜脈或頸動(dòng)脈用鑷子挑起剪斷，用試管取血或注射器抽血，股 靜脈連續(xù)多次取血時(shí)，穿刺部位應(yīng)盡量靠近股靜脈遠(yuǎn)心端。二、豚鼠1、心臟取血：需二人協(xié)作進(jìn)行，助手以兩手將豚鼠固定，腹部面向上，術(shù)者用左手在胸骨左側(cè)觸摸到心臟搏動(dòng)處，一般在第46肋間、選擇心跳最明顯部位進(jìn)針穿刺。針頭進(jìn)入心臟，則血液隨心跳而進(jìn)入注射器內(nèi)，取血應(yīng)快速，以防在試管內(nèi) 凝血。如認(rèn)為針頭已刺入心臟，但還未出血時(shí)，可將針頭慢慢退出一點(diǎn)即