chap5-微生物的控制-王瑩

1、微生物的分布與控制微生物的分布與控制王瑩王瑩 微生物學(xué)教研室微生物學(xué)教研室本章重點(diǎn)本章重點(diǎn)n掌握：掌握：正常菌群、條件致病菌、醫(yī)學(xué)微生正常菌群、條件致病菌、醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)、消毒、滅菌、防腐、無菌的概念；態(tài)學(xué)、消毒、滅菌、防腐、無菌的概念； 干熱滅菌法、濕熱滅菌法（巴氏消干熱滅菌法、濕熱滅菌法（巴氏消毒法、高壓蒸汽滅菌法）。毒法、高壓蒸汽滅菌法）。n了解：了解：影響濕熱滅菌的因素，常用消毒劑影響濕熱滅菌的因素，常用消毒劑的種類和應(yīng)用，生物安全的概念。的種類和應(yīng)用，生物安全的概念。 第八章第八章 微生物的生活環(huán)境微生物的生活環(huán)境生態(tài)學(xué)生態(tài)學(xué)生物生物環(huán)境條件環(huán)境條件相互作用的規(guī)律性相互作用的規(guī)律性醫(yī)學(xué)

2、微生態(tài)學(xué)醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)研究人體體表和與外界相通腔道黏膜表面的微生物和研究人體體表和與外界相通腔道黏膜表面的微生物和微生物間、微生物與人體及它們與外界環(huán)境間相互依存、相互制約的學(xué)科。微生物間、微生物與人體及它們與外界環(huán)境間相互依存、相互制約的學(xué)科。 生物生物環(huán)境條件環(huán)境條件微生物微生物 人體人體外界環(huán)境外界環(huán)境醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)醫(yī)學(xué)微生態(tài)學(xué)n正常菌群正常菌群n條件致病菌條件致病菌控制（有害）微生物的生長速率控制（有害）微生物的生長速率, ,消滅不需要的微生物，消滅不需要的微生物，在實(shí)際應(yīng)用中具有重要的意義。在實(shí)際應(yīng)用中具有重要的意義。基本概念基本概念1.1.滅菌滅菌（sterilization）殺滅所有

3、的微生物，包括殺滅所有的微生物，包括細(xì)菌的芽孢；細(xì)菌的芽孢；2. 消毒消毒（disinfection）殺滅病原微生物，不包括殺滅病原微生物，不包括芽孢。芽孢。3. 防腐防腐（antiseptic）用理化因素抑制微生物的生用理化因素抑制微生物的生長繁殖；長繁殖；4. 化療化療(chemotherapy)：利用對病原菌具有高度毒：利用對病原菌具有高度毒力而對宿主基本無毒的化學(xué)物質(zhì)來抑制宿主體力而對宿主基本無毒的化學(xué)物質(zhì)來抑制宿主體內(nèi)病原微生物內(nèi)病原微生物的生長繁殖。的生長繁殖。5. 無菌無菌（Asepsis）：即不含活菌。滅菌是一個過程，）：即不含活菌。滅菌是一個過程，無菌是無菌是一種狀態(tài)。一種狀

4、態(tài)?？刂朴泻拇胧┛刂朴泻拇胧鐨缦鞠?部分殺滅部分殺滅)抑制抑制除菌除菌滅菌滅菌(徹底殺滅徹底殺滅)防腐防腐(抑制霉腐微生物抑制霉腐微生物)化療化療(抑制宿主體內(nèi)病原菌抑制宿主體內(nèi)病原菌)殺菌殺菌溶菌溶菌n抑菌劑抑菌劑n殺菌劑殺菌劑n溶菌劑溶菌劑抑菌抑菌滅菌滅菌菌體雖死，但菌體雖死，但形體尚存形體尚存“死有全尸死有全尸”菌體殺死，細(xì)菌體殺死，細(xì)胞溶化消失胞溶化消失“死無全尸死無全尸” 永遠(yuǎn)喪失生長永遠(yuǎn)喪失生長繁殖能力繁殖能力 高溫滅菌、高溫滅菌、輻射滅菌輻射滅菌 殺死部分對人殺死部分對人體或動植物有體或動植物有害的病原菌，害的病原菌，對被消毒的對對被消毒的對象基本無害象基本無害

5、物理消毒滅菌法物理消毒滅菌法殺滅或抑制微生物的物理因素殺滅或抑制微生物的物理因素溫度溫度輻射作用輻射作用過濾過濾滲透壓滲透壓干燥干燥超聲波等超聲波等一、溫度一、溫度n高溫使高溫使蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞膜上的類脂蛋白質(zhì)、核酸、細(xì)胞膜上的類脂等重要生物大等重要生物大分子分子變性、破壞變性、破壞，導(dǎo)致微生物死亡。，導(dǎo)致微生物死亡。n溫度愈高，十倍致死時間愈短。溫度愈高，十倍致死時間愈短。溫度溫度 微生物生長的最高溫度微生物生長的最高溫度溫度溫度 微生物微生物生長的最低溫度生長的最低溫度對微生物產(chǎn)生殺滅作用或抑制作用對微生物產(chǎn)生殺滅作用或抑制作用高溫滅菌（消毒）法高溫滅菌（消毒）法火焰灼燒法火焰灼燒法間歇

6、滅菌法間歇滅菌法常規(guī)加壓滅菌法常規(guī)加壓滅菌法烘箱熱空氣滅菌法烘箱熱空氣滅菌法濕熱滅菌（消毒）法濕熱滅菌（消毒）法干熱滅菌法干熱滅菌法巴氏消毒法巴氏消毒法煮沸消毒法煮沸消毒法常常壓壓下下加加壓壓下下連續(xù)加壓滅菌法連續(xù)加壓滅菌法1.1.干熱滅菌法干熱滅菌法（dry heat sterilizationdry heat sterilization）（1）火焰灼燒）火焰灼燒n灼燒（灼燒（incineration或或combustion）最徹底）最徹底的的干熱滅菌方法，破壞力很干熱滅菌方法，破壞力很強(qiáng)，故應(yīng)用范圍僅限于接強(qiáng)，故應(yīng)用范圍僅限于接種環(huán)、接種針的滅菌或帶種環(huán)、接種針的滅菌或帶病原菌的材料、動物

7、尸體病原菌的材料、動物尸體的燒毀等。的燒毀等。（2 2）烘箱內(nèi)熱空氣滅菌）烘箱內(nèi)熱空氣滅菌 金屬制品或清潔玻璃金屬制品或清潔玻璃器皿放入電熱烘箱內(nèi)器皿放入電熱烘箱內(nèi)，在，在150170下維下維持持12 h后，即可達(dá)后，即可達(dá)到徹底滅菌的目的。到徹底滅菌的目的。細(xì)胞膜破壞細(xì)胞膜破壞蛋白質(zhì)變性蛋白質(zhì)變性原生質(zhì)干燥原生質(zhì)干燥各種細(xì)胞成分發(fā)生氧化各種細(xì)胞成分發(fā)生氧化干熱的作用：干熱的作用：濕熱比干熱滅菌更好：濕熱比干熱滅菌更好：潛熱更大；潛熱更大；穿透力更強(qiáng)；穿透力更強(qiáng)；更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵等結(jié)構(gòu)。更易破壞保持蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的氫鍵等結(jié)構(gòu)。濕熱對一般營養(yǎng)體和孢子的殺滅條件：濕熱對一般營養(yǎng)體和孢子

8、的殺滅條件：多數(shù)細(xì)菌和真菌的營養(yǎng)細(xì)胞：在多數(shù)細(xì)菌和真菌的營養(yǎng)細(xì)胞：在63左右處理左右處理30分鐘或分鐘或72處理處理15s；（巴氏消毒法）；（巴氏消毒法）細(xì)菌的芽孢：細(xì)菌的芽孢：121處理處理15分鐘分鐘以上；（高壓蒸汽滅菌法）以上；（高壓蒸汽滅菌法）2. 2. 濕熱滅菌法濕熱滅菌法 （moist heat sterilizationmoist heat sterilization）濕熱滅菌法是指用濕熱滅菌法是指用100100以上的加壓蒸汽進(jìn)行滅菌。以上的加壓蒸汽進(jìn)行滅菌。（2）加壓法）加壓法 常規(guī)加壓蒸汽滅菌法常規(guī)加壓蒸汽滅菌法 連續(xù)加壓蒸汽滅菌法連續(xù)加壓蒸汽滅菌法（1）常壓法）常壓法 巴氏

9、消毒法巴氏消毒法 煮沸消毒法煮沸消毒法 間歇滅菌法間歇滅菌法 巴斯德消毒（巴斯德消毒（pasteurization） 法國微生物學(xué)家巴斯德法國微生物學(xué)家巴斯德1865年發(fā)明，年發(fā)明，處理溫度變化很大，一般在處理溫度變化很大，一般在6085 處理處理15 s30 min。用于牛奶、啤酒、果酒和醬油等不用于牛奶、啤酒、果酒和醬油等不宜進(jìn)行高溫滅菌的液態(tài)風(fēng)味食品宜進(jìn)行高溫滅菌的液態(tài)風(fēng)味食品或調(diào)料的或調(diào)料的低溫消毒方法低溫消毒方法。目前是。目前是世界上通用的一種牛奶消毒法。世界上通用的一種牛奶消毒法。低溫維持法低溫維持法（LTH，low temperature holding method）高溫瞬時法

10、高溫瞬時法（HTST，high temperature short time）在在63 下保持下保持30 min可進(jìn)行牛奶消毒可進(jìn)行牛奶消毒牛奶消毒時只要在牛奶消毒時只要在72下保持下保持15 s即可即可巴斯德消毒的兩種具體方法巴斯德消毒的兩種具體方法優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：殺滅物料中無芽孢的病原菌（如結(jié)核桿殺滅物料中無芽孢的病原菌（如結(jié)核桿菌或沙門氏菌），而又不影響它們的風(fēng)味。菌或沙門氏菌），而又不影響它們的風(fēng)味。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：不能殺滅芽孢和某些病原體。不能殺滅芽孢和某些病原體。例如，伯氏考克斯氏體（例如，伯氏考克斯氏體（Coxiellaburnetii )，是一種立克次氏體，引起是一種立克次氏體，引起Q

11、 Q熱的病原體。熱的病原體。 煮沸消毒法煮沸消毒法100 處理處理1530 min一般用于飲用水的消毒一般用于飲用水的消毒 間歇滅菌法間歇滅菌法（fractional sterilization或或tyndallization）（1）80100 下蒸煮下蒸煮1560 min，殺滅微生物營養(yǎng)體；，殺滅微生物營養(yǎng)體；（2）室溫或）室溫或37 下保溫過夜，誘使殘存芽孢發(fā)芽；下保溫過夜，誘使殘存芽孢發(fā)芽；（3）重復(fù)）重復(fù)(1)、(2)步驟步驟3次，達(dá)到較低溫度下徹底滅菌目的。次，達(dá)到較低溫度下徹底滅菌目的。 例如，培養(yǎng)硫細(xì)菌的例如，培養(yǎng)硫細(xì)菌的含硫培養(yǎng)基含硫培養(yǎng)基用間歇滅菌法滅菌，用間歇滅菌法滅菌，其

12、內(nèi)所含元素硫在其內(nèi)所含元素硫在99100的溫度下可保持正常結(jié)晶形，的溫度下可保持正常結(jié)晶形，而常規(guī)的加壓滅菌（而常規(guī)的加壓滅菌（121）后會引起硫熔化。）后會引起硫熔化。適用于不耐熱培養(yǎng)基的滅菌。適用于不耐熱培養(yǎng)基的滅菌。（2 2）加壓法）加壓法 常規(guī)加壓蒸汽滅菌法常規(guī)加壓蒸汽滅菌法 （normal autoclaving） 連續(xù)加壓蒸汽滅菌法連續(xù)加壓蒸汽滅菌法 （continuous autoclaving ） 常規(guī)加壓蒸汽滅菌法常規(guī)加壓蒸汽滅菌法（normal autoclaving）一般稱作一般稱作“高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法”。這是一種利用。這是一種利用高溫高溫（而非壓力）進(jìn)行濕熱滅

13、菌的方法。（而非壓力）進(jìn)行濕熱滅菌的方法。高壓蒸汽滅菌法的原理：高壓蒸汽滅菌法的原理： 將待滅菌的物件放置在盛有適量水的專用加壓蒸汽將待滅菌的物件放置在盛有適量水的專用加壓蒸汽滅菌鍋（或家用壓力鍋）內(nèi)，蓋上鍋蓋，并打開排氣閥，滅菌鍋（或家用壓力鍋）內(nèi)，蓋上鍋蓋，并打開排氣閥，通過加熱煮沸，讓蒸汽驅(qū)盡鍋內(nèi)原有的空氣，然后關(guān)閉通過加熱煮沸，讓蒸汽驅(qū)盡鍋內(nèi)原有的空氣，然后關(guān)閉鍋蓋上的排氣閥閥門，再繼續(xù)加熱，使鍋內(nèi)蒸汽壓逐漸鍋蓋上的排氣閥閥門，再繼續(xù)加熱，使鍋內(nèi)蒸汽壓逐漸上升，隨之溫度也相應(yīng)上升到上升，隨之溫度也相應(yīng)上升到100100以上。以上。 （1）121（壓力為壓力為1 kgcm2或或15磅磅英

14、寸英寸2），），1520min；（2）115（0.7 kgcm2或或10磅磅英寸英寸2），30min。 適合于一切微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)療適合于一切微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)或發(fā)酵工廠中對培養(yǎng)基、物料保健機(jī)構(gòu)或發(fā)酵工廠中對培養(yǎng)基、物料及多種器材的滅菌及多種器材的滅菌 。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，效果可靠，廣泛使用。操作簡便，效果可靠，廣泛使用。缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：破壞一些不耐熱的營養(yǎng)成分。破壞一些不耐熱的營養(yǎng)成分。 連續(xù)加壓蒸汽滅菌法連續(xù)加壓蒸汽滅菌法 （continuous autoclaving ）n在發(fā)酵行業(yè)里也稱在發(fā)酵行業(yè)里也稱“連消法連消法”。n將培養(yǎng)基在發(fā)酵罐外連續(xù)不斷地進(jìn)行加熱、維持將培養(yǎng)基在

15、發(fā)酵罐外連續(xù)不斷地進(jìn)行加熱、維持和冷卻，然后才進(jìn)入無菌的發(fā)酵罐。和冷卻，然后才進(jìn)入無菌的發(fā)酵罐。（1）135140，515 s，工業(yè)上發(fā)酵培養(yǎng)基，工業(yè)上發(fā)酵培養(yǎng)基（2）135150，26 s，牛奶或其他液態(tài)食品，牛奶或其他液態(tài)食品（超高溫滅菌）（超高溫滅菌）只在大規(guī)模發(fā)酵工廠中作培養(yǎng)基滅菌用只在大規(guī)模發(fā)酵工廠中作培養(yǎng)基滅菌用影響加壓蒸汽滅菌效果的因素影響加壓蒸汽滅菌效果的因素1.1.殺菌物體含菌量殺菌物體含菌量2.2.滅菌鍋內(nèi)空氣排除程度滅菌鍋內(nèi)空氣排除程度3.3.滅菌對象的滅菌對象的pHpH4.4.滅菌對象的體積滅菌對象的體積5.5.加熱與散熱速度加熱與散熱速度二、輻射作用二、輻射作用用于滅

16、菌的電磁波有微波，紫外線用于滅菌的電磁波有微波，紫外線(UV)(UV)、X-X-射線和射線和-射線等射線等三、過濾除菌三、過濾除菌n對空氣和培養(yǎng)液中某些對空氣和培養(yǎng)液中某些不耐熱的成分不耐熱的成分可采可采用過濾除菌法用過濾除菌法“滅菌滅菌”。棉花、玻璃纖維或棉花、玻璃纖維或石棉石棉微孔濾膜微孔濾膜0.220.45 m醋酸纖維素、醋酸纖維素、硝酸纖維素硝酸纖維素核孔濾器核孔濾器優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：操作方法簡便，不破環(huán)物質(zhì)結(jié)構(gòu)。：操作方法簡便，不破環(huán)物質(zhì)結(jié)構(gòu)。缺點(diǎn)缺點(diǎn)：無法濾除液體中的病毒和噬菌體。：無法濾除液體中的病毒和噬菌體。過濾除菌的裝置過濾除菌的裝置（四）高滲、干燥、超聲波等（四）高滲、干燥、超聲波等化學(xué)消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法n生物安全柜是為操作原代培養(yǎng)物、菌毒株及診斷性生物安全柜是為操作原代培養(yǎng)物、菌毒株及診斷性標(biāo)本標(biāo)本等等具有感染性的實(shí)驗(yàn)材料時，具有感染性的實(shí)驗(yàn)材料時，用來保護(hù)操作者本人、實(shí)驗(yàn)室用來保護(hù)操作者本人、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)材料環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物。產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物。n超凈工作臺是在特定空間內(nèi)，室內(nèi)空氣經(jīng)預(yù)過濾器初濾，超凈工作臺是在特定空間內(nèi)，