芝堤山野生紫芝的分離純化及馴化栽培

1、項(xiàng)目編號(hào) 寧德師范學(xué)院服務(wù)海西建設(shè)項(xiàng)目 申 請(qǐng) 書(shū)項(xiàng) 目 類 型：一般項(xiàng)目項(xiàng) 目 名 稱：閩東野生紫芝的分離純化及馴化栽培項(xiàng)目負(fù)責(zé)人：陳錫雄所在單位：生物工程系聯(lián)系電話子郵箱：chenxixiong申請(qǐng)日期：2010.9.5寧德師范學(xué)院二一年九月填 表 說(shuō) 明一、申請(qǐng)書(shū)各項(xiàng)內(nèi)容要求實(shí)事求是，逐條認(rèn)真填寫(xiě)，表達(dá)要明確、嚴(yán)謹(jǐn)，外來(lái)語(yǔ)同時(shí)用原文和中文表達(dá)。二、申請(qǐng)書(shū)一式二份，采用A4幅面，于左側(cè)裝訂成冊(cè)。各欄空格不夠時(shí)，請(qǐng)自行加頁(yè)。封面上“項(xiàng)目編號(hào)”申請(qǐng)者不必填寫(xiě)。三、簡(jiǎn)表的內(nèi)容應(yīng)嚴(yán)格按規(guī)定填寫(xiě)。凡選擇性欄目，請(qǐng)?jiān)谔崾痉鸄、B、C上打“Ö”，其余欄目說(shuō)明如下：項(xiàng)目

2、名稱要確切反映項(xiàng)目?jī)?nèi)容，字?jǐn)?shù)最多不超過(guò)25個(gè)漢字（包括標(biāo)點(diǎn)符號(hào)）。所屬學(xué)科根據(jù)申請(qǐng)項(xiàng)目所屬學(xué)科，嚴(yán)格按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)學(xué)科分類與代碼（GB/T13745-92）填寫(xiě)。起止年月申請(qǐng)資助年限一般在五年以內(nèi)。所在單位名稱須按單位公章填寫(xiě)全稱。項(xiàng) 目 名 稱閩東野生紫芝的分離純化及馴化栽培項(xiàng)目類別所屬行業(yè)1農(nóng)業(yè) 2. 食藥用菌項(xiàng)目類型A.基礎(chǔ)研究；B.應(yīng)用基礎(chǔ)研究；C.應(yīng)用研究（含社科、自然）；D.試驗(yàn)發(fā)展；E.新產(chǎn)品；F.推廣開(kāi)發(fā)；G.其它所屬學(xué)科1生物學(xué) 2.生物技術(shù)起止年限2010.9-2013.9申請(qǐng)金額3萬(wàn)元項(xiàng)目負(fù)責(zé)人姓 名陳錫雄性別男出生年月1963.3職 稱副教授學(xué)歷本科學(xué)位/授予國(guó)別學(xué)士/中國(guó)

3、所在單位（院、系、所）寧德師范學(xué)院生物工程系主 要 合 作 單 位項(xiàng)目組人 員總數(shù)高級(jí)職稱中級(jí)職稱初級(jí)職稱輔助人員5311一、本項(xiàng)目已具備的條件靈芝是一種藥用菌，靈芝多糖具有扶正固本、滋補(bǔ)強(qiáng)壯、延年益壽的主要功能，前期研究已分離得到多株閩東紫芝，提取基因組DNA，并對(duì)提取方法進(jìn)行了適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)，得到電泳譜帶清晰、整齊，可用于PCR擴(kuò)增和指紋分析的基因組DNA模版。為進(jìn)一步開(kāi)展研究工作提供初步的基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有與本項(xiàng)目研究有關(guān)的主要儀器設(shè)備有：各型號(hào)多種高壓鍋、超凈工作臺(tái)、菌種室、栽培室、高速冷凍離心機(jī)、超低溫冰箱、超純水系統(tǒng)、PCR儀、電泳系統(tǒng)、凝膠成像系統(tǒng)、制冰機(jī)、紫外分光光度計(jì)等，為開(kāi)展實(shí)

4、驗(yàn)工作提供了很好的基礎(chǔ)。二、本項(xiàng)目對(duì)促進(jìn)海峽西岸經(jīng)濟(jì)區(qū)建設(shè)及推動(dòng)科技進(jìn)步、產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和社會(huì)發(fā)展的重要意義我國(guó)是靈芝的王國(guó)，世界上靈芝科的種類主要分布在亞洲、澳洲、非洲及美洲的熱帶及亞熱帶，少數(shù)分布于溫帶。我國(guó)地跨熱帶至寒溫帶，靈芝科種類多而分布廣。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)已證實(shí)靈芝具有特殊的療效。隨著野生靈芝資源的過(guò)度開(kāi)采，野生靈芝越來(lái)越少見(jiàn)，資源趨于枯竭。從野生種類中馴化優(yōu)良生產(chǎn)菌種，或具有藥效高的品種則潛力很大。 （一）符合海西產(chǎn)業(yè)政策與布局，有利于推動(dòng)農(nóng)村科技進(jìn)步本項(xiàng)目屬于生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域，生物技術(shù)是海西經(jīng)濟(jì)區(qū)建設(shè)的重點(diǎn)產(chǎn)業(yè)之一，其最大特點(diǎn)是可再生、無(wú)污染、良性循環(huán)、永續(xù)利用。利用生物技術(shù)在農(nóng)村發(fā)展現(xiàn)

5、代農(nóng)林業(yè)，開(kāi)發(fā)兼具生態(tài)功能的新型菌類產(chǎn)業(yè)，利用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢棄物作為栽培基質(zhì)，獲得良好的經(jīng)濟(jì)效益、社會(huì)效益及生態(tài)效益，對(duì)推動(dòng)農(nóng)村科技進(jìn)步具有積極的意義。 （二）增加農(nóng)民收入，促進(jìn)地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展在古代，我國(guó)勞動(dòng)人民盛贊稱靈芝為仙草，在神農(nóng)本草經(jīng)、名醫(yī)別錄及本草綱目等多種典籍中都把靈芝列為上品，謂紫芝“主耳聾，利關(guān)節(jié)，保神益精，堅(jiān)筋骨，好顏色，久服輕身不老延年。”謂赤芝“主胸中結(jié)，益心氣，補(bǔ)中增智慧不忘，久食輕身不老，延年成仙?！倍F(xiàn)代醫(yī)學(xué)也證明了靈芝的特有功效。目前，我國(guó)近年來(lái)開(kāi)始大面積進(jìn)行人工栽培生產(chǎn)，并逐漸向靈芝深加工產(chǎn)業(yè)發(fā)展，產(chǎn)值可達(dá)數(shù)億元人民幣，極具商品開(kāi)發(fā)價(jià)值。因此，開(kāi)展靈芝良種選育

6、、高產(chǎn)栽培研究，發(fā)展靈芝栽培業(yè)有利于農(nóng)民增產(chǎn)增收，促進(jìn)地方社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。（三）有利于落實(shí)“三農(nóng)”政策，促進(jìn)新農(nóng)村建設(shè)“發(fā)展農(nóng)業(yè)、建設(shè)農(nóng)村、造福農(nóng)民”的“三農(nóng)”政策越來(lái)越受到各級(jí)政府的重視。立足古田縣，輻射周邊縣市，發(fā)展靈芝產(chǎn)業(yè)，可大幅提升林地的經(jīng)營(yíng)效益，直接增加農(nóng)民的就業(yè)，緩解環(huán)境保護(hù)和農(nóng)民收入之間的矛盾，對(duì)項(xiàng)目區(qū)社會(huì)主義新農(nóng)村建設(shè)將產(chǎn)生積極影響。（四）促進(jìn)食藥用菌產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整項(xiàng)目的立項(xiàng)實(shí)施將為實(shí)現(xiàn)“高起點(diǎn)、規(guī)?；?、良種化、標(biāo)準(zhǔn)化”建設(shè)靈芝人工栽培示范基地、推動(dòng)新型食藥用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供有力的支持。該項(xiàng)研究成果為靈芝優(yōu)良品種的鑒定和引種提供技術(shù)參考，為這種新型經(jīng)濟(jì)植物種質(zhì)資源的合理利用和馴化栽

7、培提供理論依據(jù)，避免盲目引種及長(zhǎng)期栽培導(dǎo)致的種質(zhì)退化造成的資源浪費(fèi)和經(jīng)濟(jì)損失。并可延長(zhǎng)產(chǎn)業(yè)鏈，促進(jìn)食藥用菌產(chǎn)業(yè)的種類、結(jié)構(gòu)、經(jīng)營(yíng)方式的調(diào)整和優(yōu)化，促進(jìn)經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)方式的轉(zhuǎn)變，促進(jìn)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)發(fā)展，對(duì)項(xiàng)目區(qū)全面建設(shè)小康社會(huì)產(chǎn)生推動(dòng)作用和影響。三、項(xiàng)目?jī)?nèi)容本項(xiàng)目構(gòu)建研究開(kāi)發(fā)平臺(tái)與科技推廣服務(wù)體系，開(kāi)展靈芝良種選育和人工高效栽培關(guān)鍵技術(shù)研究與應(yīng)用。（一） 樣品采集及分離純化 1.選擇春末或夏初季節(jié)，從支堤山系不同的區(qū)位采集靈芝品種，進(jìn)行初步的分級(jí)處理并登記造冊(cè)。 2. 然后按常規(guī)方法對(duì)所采集的樣品進(jìn)行分離純化，將得到若干個(gè)靈芝品種，進(jìn)行適當(dāng)擴(kuò)培并得到足夠量的靈芝試管菌種以供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。（二）利用A

8、FLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)靈芝樣本進(jìn)行種質(zhì)鑒定1. 高質(zhì)量基因組DNA的提取 對(duì)CTAB分離靈芝基因組總DNA的方法進(jìn)行了適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)，得到電泳譜帶清晰、整齊，可用于酶切、PCR擴(kuò)增和進(jìn)行指紋圖譜分析的基因組DNA模版。2. 引物設(shè)計(jì)和合成從已發(fā)表的文獻(xiàn)中查詢并合成AFLP預(yù)擴(kuò)增引物和選擇性擴(kuò)增引物。3. 酶切、連接及PCR反應(yīng)體系的優(yōu)化為了摸索適宜于靈芝的AFLP反應(yīng)體系，本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)以瓊脂糖凝膠為檢測(cè)體系，對(duì)影響酶切、連接及PCR擴(kuò)增的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物濃度以及退火溫度等反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化選擇。4. 引物篩選根據(jù)設(shè)計(jì)好的引物對(duì)小量樣本進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，檢驗(yàn)引物的有效性，選取擴(kuò)

9、增條帶清晰、重現(xiàn)性高且多態(tài)性良好的多個(gè)引物組合。5. 品系鑒定利用篩選出的特異AFLP引物和反應(yīng)條件，對(duì)供試樣本進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)特異譜帶和帶組合進(jìn)行分析，構(gòu)建各樣本的DNA指紋圖譜，鑒定靈芝各樣本，合并來(lái)源不同，但遺傳組成上相同的各重復(fù)樣本，以減小后續(xù)工作量。6. 數(shù)據(jù)分析電泳條帶按1/0進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換，清晰和再現(xiàn)性強(qiáng)的潛帶記為1，無(wú)擴(kuò)增譜帶記為0，生成0和l組成的原始矩陣。以此為據(jù)，獲得各樣本的DNA指紋圖譜。（三） 進(jìn)行馴化栽培實(shí)驗(yàn)1.選擇生長(zhǎng)狀態(tài)良好的菌株35個(gè)進(jìn)行菌種的擴(kuò)培，采用二級(jí)擴(kuò)培方法，得到足夠量的栽培用菌種。2.擬定栽培路線，確定栽培方法，將不同菌株進(jìn)行栽培對(duì)照，篩選出優(yōu)良高產(chǎn)菌株

10、。四、工作進(jìn)度安排（一） 第一階段 樣品的采集、分離、純化及擴(kuò)培 1. 2010.102011.3完成相關(guān)資料的收集，擬定野外靈芝采集的路線圖及確定野外采集樣品的區(qū)域，并做好靈芝分離純化前的準(zhǔn)備工作。2.2011.32011.6按既定路線圖進(jìn)行野外野生靈芝的采集，對(duì)樣品進(jìn)行初步分級(jí)處理并做好妥善處理。3.2011.32011.9完成實(shí)驗(yàn)室靈芝樣品的分離、純化工作，并對(duì)各品系進(jìn)行適當(dāng)?shù)臄U(kuò)大培養(yǎng)，以獲得的一定量的試管原種。供后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。（二） 第二階段 利用AFLP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)靈芝樣本進(jìn)行種質(zhì)鑒定1.2011.32011.6 AFLP反應(yīng)體系的優(yōu)化和引物篩選2.2011.62011.11構(gòu)建各

11、樣本的DNA指紋圖譜3.2011.112012.5確定試栽菌種并按常規(guī)方法進(jìn)行供試菌株的一、二級(jí)菌種的生產(chǎn)，以供后續(xù)栽培實(shí)驗(yàn)。（三） 第三階段 馴化栽培實(shí)驗(yàn)1. 2012.52012.9進(jìn)行靈芝不同品種的定性栽培實(shí)驗(yàn)，并由此確定幾個(gè)當(dāng)家品種。2. 2012.92013.3確定之當(dāng)家品種進(jìn)行一、二級(jí)菌種的生產(chǎn)。3.2013.32013.9對(duì)供試品種的靈芝進(jìn)行定量栽培實(shí)驗(yàn)，根據(jù)數(shù)理統(tǒng)計(jì)分析可得出 我們所需的靈芝品種。五、經(jīng)費(fèi)預(yù)算（單位：萬(wàn)元）注：按項(xiàng)目類型，另附經(jīng)費(fèi)預(yù)算表總 投 資3萬(wàn)元其 他經(jīng)費(fèi)來(lái)源合 計(jì)其 中其他部門(mén)撥款單位配套貸 款其 他00000六、項(xiàng)目組成員表（含主要合作單位參加人員）姓

12、 名出生年月性別職稱職務(wù)從事專業(yè)在項(xiàng)目中分工項(xiàng)目負(fù)責(zé)人所在單位簽 章陳錫雄1963.3男副教授教師教學(xué)項(xiàng)目支持人生物工程系丁建發(fā)1967.2男副教授教師教學(xué)資料收集整理及數(shù)據(jù)處理生物工程系張維瑞1966.3男教授級(jí)高級(jí)農(nóng)藝師教師食用菌菌種分離、篩選及菌種生產(chǎn)生物工程系薛駿軼1984.9男助理實(shí)驗(yàn)師實(shí)驗(yàn)員教學(xué)靈芝種質(zhì)資源分子鑒定生物工程系阮俊峰1983.11男助理實(shí)驗(yàn)師實(shí)驗(yàn)員教學(xué)靈芝的栽培生產(chǎn)生物工程系七、合作單位意見(jiàn)（對(duì)合作研究?jī)?nèi)容、參加人員素質(zhì)與水平及提供的研究工作條件等簽署具體意見(jiàn)） 單位（公章） 年 月 日八、院（系）審查意見(jiàn)課題組長(zhǎng)期從事食用菌教學(xué)和科研，具有扎實(shí)的研究基礎(chǔ)和前期研究工

13、作，能完成該項(xiàng)目的研究工作。該項(xiàng)目建設(shè)有利于推動(dòng)地方食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展，提高農(nóng)民收入，具有一定的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。同意該課題申報(bào)！ 學(xué)校（公章） 2010年 10 月 8 日 九、學(xué)校審查意見(jiàn) 年 月 日附：經(jīng)費(fèi)預(yù)算表 單位：（萬(wàn)元）總投資3.0申請(qǐng)資助合計(jì)其中2010年2011年2012年2013年2014年3.00.80.81.4-其他經(jīng)費(fèi)來(lái)源合計(jì)其中其他部門(mén)撥款單位配套貸 款其 他預(yù)算支出科目總投資預(yù)算數(shù)其中：申請(qǐng)資助總投資預(yù)算數(shù)計(jì)算依據(jù)1、項(xiàng)目直接費(fèi)3.03.0（1）人員費(fèi)（2）設(shè)備費(fèi)其中：購(gòu)置試制（3）修繕費(fèi)0.10.1儀器維護(hù)（4）能源材料費(fèi)1.51.5引物合成+TaqDNA聚合酶+內(nèi)切酶+分離純化試劑+電泳、染色試劑+其他藥品培養(yǎng)基耗材（5）試驗(yàn)外協(xié)費(fèi)（6）會(huì)議費(fèi)0.40.4參加學(xué)術(shù)會(huì)議2×0.2（7）差旅費(fèi)0.50.5樣品采集3×.05×3（8）出版物、文獻(xiàn)、信息傳