天然產(chǎn)物化學(xué)第二章

1、第二章 第一節(jié) 天然產(chǎn)物化學(xué)成分的預(yù)試方法 一、天然產(chǎn)物化學(xué)成分的預(yù)試驗(yàn)基本原理是根據(jù)各成分極性的不同，先系統(tǒng)地分成幾個(gè)不同部分，然后利用顯色反應(yīng)或沉淀反應(yīng)，或結(jié)合紙色譜、薄板色譜，定性判斷各部分中可能含有的化合物類型。 根據(jù)相似相溶的原理，極性大的成分在極性溶劑中溶解度大，極性小的成分則易溶于非極性溶劑。選擇適當(dāng)?shù)娜軇瑯O性由小到大，或由大到小，可順次將極性比較相近的成分分開。常用溶劑的極性次序?yàn)椋ㄓ尚〉酱螅菏兔循h(huán)己烷苯氯仿（二氯甲烷）乙醚乙酸乙酯正丁醇丙醇、乙醇甲醇水KB） 100，作一次簡單萃取就可實(shí)現(xiàn)基本分離； 10010，則需萃取10-12次； 2時(shí)，需做100次以上萃?。?1時(shí)

2、，KAKB，作任意次分配也無法實(shí)現(xiàn)分離。 （3）分配比與pH值 對(duì)酸性、堿性及兩性有機(jī)化合物來說，pH值變化可以改變它們的存在狀態(tài)（游離態(tài)或解離型），從而影響在溶劑系統(tǒng)中的分配比。 以酸性物質(zhì)為例，其在水中的解離平衡及解離常數(shù)K，可用下式表示： HA + H2OA- + H3O+ 當(dāng)pH值3時(shí)，酸性物質(zhì)多呈非解離狀態(tài)（HA）、堿性物質(zhì)則呈解離狀態(tài)（BH+）存在； 當(dāng)pH值12，則酸性物質(zhì)呈解離狀態(tài)（A-）、堿性物質(zhì)則呈非解離狀態(tài)（B）存在。 樣品水溶液pH3，有機(jī)溶劑提取水相有機(jī)相pH12，有機(jī)溶劑提取糖類等強(qiáng)極性中性物質(zhì)兩性物質(zhì)堿性物質(zhì)pH9，緩沖溶液提?。∟aHCO3水溶液）pH3，有機(jī)溶

3、劑提取酸性物質(zhì)（有機(jī)酸等）（酚類等）水相有機(jī)相水相有機(jī)相pH13，緩沖溶液提取水相有機(jī)相水相有機(jī)相中性物質(zhì)pH6，有機(jī)溶劑提取水相有機(jī)相酸性物質(zhì)圖2-5 利用pH梯度萃取分離物質(zhì)的模式（4）逆流分溶法 逆流分溶法（counter current distribution，CCD） 是一種多次、連續(xù)的液-液萃取分離過程。 原理相當(dāng)于多個(gè)分液漏斗相連接。 現(xiàn)一般采用Craig逆流分溶儀，該儀器為由上百個(gè)萃取單元組成的全自動(dòng)連續(xù)液-液萃取裝置。每個(gè)單元相當(dāng)于一個(gè)分液漏斗。 操作程序主要是振搖萃取靜置分層兩相分開轉(zhuǎn)移再萃取。2. 紙層析 紙層析又叫紙色譜法，系以紙為載體，以紙上所含水分或其他物質(zhì)為固定

4、相，用展開劑進(jìn)行展開的分配色譜。 供試品經(jīng)展開后，可用比移值(Rf)表示其各組成成分的位置。 比移值原點(diǎn)中心至斑點(diǎn)中心的距離原點(diǎn)中心至展開劑前沿的距離紙色譜 （1）儀器與材料儀器與材料 1）展開室 通常為圓形或長方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃蓋，應(yīng)能密閉。 2）點(diǎn)樣器 常用具支架的微量注射器或定量毛細(xì)管, 應(yīng)能使點(diǎn)樣位置正確、集中。 3）濾紙 質(zhì)地均勻平整，具有一定機(jī)械強(qiáng)度，不含影響展開效果的雜質(zhì)；也不應(yīng)與所用顯色劑起作用。 （2）操作方法 1）上行法 2）下行法（3）特殊紙色譜 1）反相紙層析 2）高溫紙層析 3）鹽析紙層析 3.液-液分配柱色譜 定義： 將兩相溶劑中的一相涂覆在硅膠等多孔載體

5、上，作為固定相，填充在色譜管中，然后加入與固定相不相混融的另一相溶劑（流動(dòng)相）沖洗色譜柱。這樣，物質(zhì)同樣可在兩相溶劑相對(duì)作逆流移動(dòng)，在移動(dòng)過程中不斷進(jìn)行動(dòng)態(tài)分配而得以分離。 （1）正相層析與反相層析 常用的載體主要有硅膠、硅藻土及纖維素粉等。 分離水溶性或極性較大的成分，固定相多采用強(qiáng)極性溶劑，如水、緩沖液等，流動(dòng)相則用氯仿、乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，稱之為正相層析； 分離脂溶性化合物，如高級(jí)脂肪酸等時(shí)，則兩相可以顛倒，固定相可用石蠟油，而流動(dòng)相則用水或甲醇等強(qiáng)極性溶劑，稱之為反相層析。 （2）加壓液相柱層析 加壓液相柱層析用的載體多為顆粒直徑較小，機(jī)械強(qiáng)度及比表面積均大的球形硅膠微粒。 按加壓強(qiáng)弱

6、可以分為： 快速色譜（flash chromatography，約2.02105Pa） 低壓液相色譜（LPLC，5.05105 Pa） 中壓液相色譜（MPLC，5.05105-20.2105Pa） 高壓液相色譜（HPLC，20.2105Pa）（3）減壓液相柱層析 減壓液相柱層析是利用真空為動(dòng)力來加速流動(dòng)相的一種色譜分離方法。 減壓液相色譜法具有設(shè)備簡單、分離時(shí)間短、分離容量大等特點(diǎn)。4. 分配薄層色譜法 常用的支持劑有硅藻土、纖維素、滑石粉等，最常用的固定相是甲酰胺。 原理：多次分配的過程，分配系數(shù)(溶解度)不等實(shí)現(xiàn)分離。 分類：正相色譜，反相色譜 正相色譜：水為固定相(硅膠載體)，有機(jī)溶劑為

7、流動(dòng)相，極性強(qiáng)的組分K（分配系數(shù)）大，Rf值??； 反相色譜：烷基化學(xué)鍵合相為固定相，水-有機(jī)溶劑為流動(dòng)相，極性強(qiáng)的組分K小， Rf值大。第三節(jié) 天然產(chǎn)物的分離和精制 一、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離二、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 不同進(jìn)行分離 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離六、其他分離方法 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離 物理吸附、化學(xué)吸附及半化學(xué)吸附 物理吸附也叫表面吸附，因構(gòu)成溶液的分子（含溶質(zhì)及溶劑）與吸附劑表面分子的分子間力相互作用所引起的 。 化學(xué)吸附如黃酮等酚酸性物質(zhì)被堿性氧化鋁的吸附，或生物堿被酸性硅膠的吸附等，具有

8、選擇性，吸附十分牢固，有時(shí)甚至不可逆。 半化學(xué)吸附，如聚酰胺對(duì)黃酮類、醌類等化合物之間氫鍵吸附，力量較弱，介于物理吸附與化學(xué)吸附之間。 1. 物理吸附基本規(guī)律相似者易于吸附 固液吸附時(shí)，吸附劑、溶質(zhì)、溶劑三者統(tǒng)稱為吸附過程中的三要素。 極性吸附劑硅膠、氧化鋁。具有特點(diǎn)： 1）對(duì)極性物質(zhì)具有強(qiáng)的親和能力，故極性強(qiáng)的溶質(zhì)將被優(yōu)先吸附。 2）溶劑極性越弱，則吸附劑對(duì)溶質(zhì)將表現(xiàn)出越強(qiáng)的吸附能力。溶劑極性增強(qiáng)，則吸附劑對(duì)溶質(zhì)的吸附能力即隨之減弱。 3）溶質(zhì)即使被硅膠、氧化鋁吸附，但一旦加入極性較強(qiáng)的溶劑時(shí)又可被后者置換洗脫下來。 非極性吸附劑活性炭。 對(duì)非極性物質(zhì)具有較強(qiáng)的親和能力，在水中對(duì)溶質(zhì)表現(xiàn)出強(qiáng)

9、的吸附能力。 溶劑極性降低，則活性炭對(duì)溶質(zhì)的吸附能力即隨之減弱。 從活性炭上洗脫被吸附物質(zhì)時(shí)，洗脫溶劑的洗脫能力將隨溶劑極性的降低而增強(qiáng)。2. 極性及其強(qiáng)弱判斷 極性強(qiáng)弱是支配物理吸附過程的主要因素。極性判斷：1）化合物的極性大小依化合物的官能團(tuán)的極性大小而定。 R-COOH Ar-OH H2O R-OH R-NH2，R-NH-R， R-N-RR R-CO-N- RR R-CHO R-CO-RR-CO-OR R-O-RR-XR-H 2）溶劑的極性可以根據(jù)介電常數(shù)的大小來判斷溶劑水溶度（g/100g）極性己烷1.880.007弱苯2.290.06乙醚（無水）4.471.3氯仿5.200.1乙酸乙

10、酯6.113.0乙醇26甲醇31.2水81.0強(qiáng)表23 常見溶劑的介電常數(shù)3. 簡單吸附法 簡單吸附，常見如在結(jié)晶及重結(jié)晶過程中加入活性炭進(jìn)行的脫色、脫臭等操作，在物質(zhì)精制過程中應(yīng)用很廣。 注意，有時(shí)擬除去的色素不一定是親脂性的，故活性炭脫色不一定總能收到良好的效果。 一般需根據(jù)預(yù)試結(jié)果先判斷色素的類型，再?zèng)Q定選用什么吸附劑處理為宜。4. 吸附色譜法用于物質(zhì)的分離 吸附色譜法定義： 是指用吸附劑作固定相，利用被分析組分對(duì)吸附劑表面吸附能力的差異和在流動(dòng)相中溶解度的差異來進(jìn)行分離分析的方法。 按其操作方式可以分為柱層析色譜和薄層色譜。 吸附色譜法常用吸附劑有硅膠、氧化鋁、聚酰胺和活性炭等。 （1

11、）吸附柱色譜 色譜柱為內(nèi)徑均勻、下端縮口的硬質(zhì)玻璃管，下端用棉花或玻璃纖維塞住，管內(nèi)裝入吸附劑。操作步驟： 吸附劑的填裝 試品的加入 洗脫 吸附劑的填裝 干法干法將吸附劑一次加入色譜柱，振動(dòng)管壁使其均勻下沉，然后沿管壁緩緩加入洗脫劑；或在色譜柱下端出口處連接活塞，加入適量的洗脫劑，旋開活塞使洗脫劑緩緩滴出，然后自管頂緩緩加入吸附劑，使其均勻地潤濕下沉，在管內(nèi)形成松緊適度的吸附層。濕法濕法將吸附劑與洗脫劑混合，攪拌除去空氣泡，徐徐傾入色譜柱中，然后加入洗脫劑將附著管壁的吸附劑洗下，使色譜柱面平整。 試品的加入 將供試品溶于開始洗脫時(shí)使用的洗脫劑中，再沿管壁緩緩加入，注意勿使吸附劑翻起。 或?qū)⒐┰?/p>

12、品溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲?，與少量吸附劑混勻，再使溶劑揮發(fā)去盡使呈松散狀，加在已制備好的色譜柱上面。 洗脫 通常按洗脫劑洗脫能力大小遞增變換洗脫劑的品種和比例，分別分部收集流出液，至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時(shí)，再改變洗脫劑的品種和比例。操作過程中應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。（2）吸附薄層色譜法吸附薄層色譜法 系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。 待點(diǎn)樣、展開后，與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖作對(duì)比，用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測(cè)定的方法。1）儀器與材料 玻板。要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。 固定相或載體。 最常用的有硅膠G、硅膠GF254 、

13、硅膠H、 硅膠HF254； 薄層涂布，一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種。常見粘合劑： 1015煅石膏， 0.50.7羧甲基纖維素鈉水溶液。 涂布器。 點(diǎn)樣器 。 展開室。 2）操作方法 薄層板制備 將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.20.3mm），取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干，后在110烘30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。 點(diǎn)樣 用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0cm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。2）操作方法 展開 將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中，

14、浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.51.0cm，密封室蓋，待展開至規(guī)定距離，取出薄層板，晾干，按規(guī)定檢測(cè)。 顯色和Rf值 Rf=展開后原點(diǎn)與斑點(diǎn)的距離/原點(diǎn)與溶劑前沿間距離。 也可以通過相對(duì)比移值對(duì)所得物質(zhì)進(jìn)行定性的分析， Rr=Rf(a)/ Rf(s)=被測(cè)組分移動(dòng)的距離/參考物質(zhì)移動(dòng)的距離 a-被分離組分，s-參考物質(zhì)。 Rr值的重復(fù)性和可比性都優(yōu)于Rf。 點(diǎn)樣薄層板在不同的層析缸中展開的方式黃綠色棕褐色紅色淺藍(lán)色亮綠色紫羅蘭色褐色化合物顯色劑生物堿1. 碘化鉍鉀試劑； 2. 碘蒸氣黃酮類1. 紫外線-氨熏； 2. 三氯化鋁乙醇液蒽醌類1. 乙酸鎂甲醇液 ；2. 5%氫氧化鉀糖類鄰苯二甲酸

15、-苯胺強(qiáng)心苷1. 氨胺T-三氯乙酸； 2. Kedde試劑甾體1. 茴香醛硫酸液； 2. 三氯化銻冰醋酸酚類三氯化鐵水溶液； 2. 三氯化鐵-鐵氰化鉀溶液 3. 香草醛鹽酸液； 4. 快速藍(lán)鹽-B酸類1. 葡萄糖苯胺； 2. 溴甲酚綠乙醇液表24 常見化合物的薄層色譜顯色劑（3）注意的問題 吸附劑的用量。一般為樣品量的30-60倍，樣品極性小，難以分離者，吸附劑用量可適當(dāng)提高至樣品量的100-200倍。 盡可能選擇極性小的溶劑裝柱和溶解樣品，以利于樣品在吸附柱上形成狹窄的原始譜帶。 洗脫所用溶劑的極性宜逐步增加，跳躍不能太大。 實(shí)驗(yàn)室常用的混合溶劑如下所示： 吸附柱色譜常用的混合溶劑（極性遞增

16、）己烷-苯，苯-乙醚，石油醚-乙酸乙酯，氯仿-乙醚，氯仿-乙酸乙酯，氯仿-甲醇，丙酮-水，甲醇-水（3）注意的問題 為避免發(fā)生化學(xué)吸附，酸性物質(zhì)宜用硅膠作吸附劑、堿性物質(zhì)則宜用氧化鋁作吸附劑進(jìn)行分離。 通常在分離酸性（或堿性）物質(zhì)時(shí)，洗脫溶劑中分別加入適量醋酸（氨、吡啶、二乙胺），可收到防止脫尾，促進(jìn)分離的效果。 吸附柱色譜也可用加壓方式進(jìn)行。 溶劑系統(tǒng)也可通過TLC進(jìn)行篩選，一般TLC展開時(shí)使組分Rf值達(dá)到0.2-0.3的溶劑系統(tǒng)可選用為柱色譜分離該相應(yīng)組分的最佳溶劑系統(tǒng)。5. 聚酰胺吸附色譜法 聚酰胺吸附屬于氫鍵吸附，特別適合分離酚類、醌類、黃酮類化合物。 一般認(rèn)為通過分子中的酰胺羰基CO

17、與酚類、黃酮類化合物的酚羥基Ar-OH，或酰胺鍵上的游離氨基NH2與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附。 至于吸附強(qiáng)弱則取決于各種化合物與之形成氫鍵締合的能力。 聚酰胺的吸附能力在水中規(guī)律：1. 形成氫鍵的基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)。OHHOOHOHOHOH 2. 成鍵位置對(duì)吸附力也有影響。易形成分子內(nèi)氫鍵者， 其在聚酰胺上的吸附相應(yīng)減弱。 OHOHOHOHOHCOOHHOOH OOH3.分子中芳香化程度高者，則吸附性增強(qiáng)；反之，則減弱。 OHOH 一般情況下，各種溶劑在聚酰胺柱上的洗脫能力由弱至強(qiáng)，可大致排列成下列順序： 水甲醇丙酮?dú)溲趸c水溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液。 聚

18、酰胺對(duì)一般酚類、黃酮類化合物的吸附是可逆的，適合于該類化合物的制備分離； 對(duì)生物堿、萜類、甾體、糖類、aa等其他極性與非極性化合物的分離也有著廣泛的用途； 對(duì)鞣質(zhì)的吸附特強(qiáng)，近乎不可逆，故用于植物粗提物的脫鞣質(zhì)處理特別適宜。 6.大孔吸附樹脂色譜 大孔吸附樹脂是一種不含交換基團(tuán)的、具有大孔結(jié)構(gòu)的高分子吸附劑，也是一中親脂性物質(zhì)。 原理： 大孔吸附樹脂為吸附和篩選原理相結(jié)合的分離材料。它的吸附性是由于范德華引力或生成氫鍵的結(jié)果。篩選原理是由于其本身多孔性結(jié)構(gòu)所決定。由于吸附和篩選原理，有機(jī)化合物根據(jù)吸附力的不同及分子量的大小，在大孔吸附脂上經(jīng)一定的溶劑洗脫而分開。6.大孔吸附樹脂色譜 大孔吸附樹

19、脂多為白色的球狀顆粒，粒度多為2060目。 分為非極性和極性兩大類。 目前常用的為苯乙烯型和丙烯腈型，在樹脂合成時(shí)根據(jù)需要引入極性基團(tuán)則成為極性樹脂從而增強(qiáng)吸附能力。 理化性質(zhì)穩(wěn)定，不溶于酸、堿及有機(jī)溶劑。 對(duì)有機(jī)物的選擇性較好，不受無機(jī)鹽類及強(qiáng)離子低分子化合物存在的影響。6.大孔吸附樹脂色譜 中藥分離提取操作的基本程序： 中藥提取液通過大孔樹脂吸附上有效成分的樹脂洗脫洗脫液回收溶液藥液干燥半成品。 洗脫液： 可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。應(yīng)用： 現(xiàn)已被廣泛應(yīng)用于苷與糖類的分離，生物堿的精制，多糖、黃酮、三萜類化合物的分離等。 7. 高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC） HPLC是

20、在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上引入氣相色譜的塔板理論，并采用了高壓輸液泵高壓輸液泵、高效固定相高效固定相和高靈敏度的檢測(cè)器高靈敏度的檢測(cè)器，具有分析速度快、分離效率高和操作自動(dòng)化特點(diǎn)的一種色譜技術(shù)。常用的HPLC檢測(cè)器：紫外-可見分光檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器第三節(jié) 天然產(chǎn)物的分離和精制 一、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離二、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 不同進(jìn)行分離 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離六、其他分離方法 四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離 1. 凝膠過濾法 2. 透析法 3. 超濾1. 凝膠過濾法 1）原理： 凝膠過濾法也叫凝膠滲透色譜法 (G

21、el Permeation Chromatography，簡稱GPC法)，分子篩過濾、排阻色譜。 其原理主要是利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠分子篩的作用，根據(jù)被分離物分子大小不同而分離。待分離系統(tǒng)中小分子物質(zhì)直徑比凝膠孔徑小，可滲入凝膠微孔中，產(chǎn)生阻滯作用大、流程長、移動(dòng)速度慢，最后流出，而大分子由于阻滯作用小，流程短，移動(dòng)速度快，先流出。 凝膠色譜分離原理圖2）該法應(yīng)用的凝膠： 交聯(lián)葡聚糖凝膠(Sephadex) 以葡聚糖凝膠為原料，交聯(lián)劑為環(huán)氧氯丙烷，在堿性條件下制成三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。 目前市售SephadexG10至G200共有8種。 G表示凝膠保水值，單位為ml/g干膠，G后面的數(shù)字代表凝膠吸

22、水量的10倍。 G-25表示每克干膠膨脹時(shí)吸水2.5ml，G-200表示每克干膠膨脹時(shí)吸水20ml。 羥丙基葡聚糖凝膠（Sephadex LH-20） Sephadex G-25中的OH經(jīng)OCH2CH2CH2OH 取代后得到的產(chǎn)物。 與Sephadex G比較，Sephadex LH-20分子中 -OH總數(shù)沒有改變，但碳原子所占比例卻相對(duì)增加了。 因此與Sephadex G 僅有親水性不同，它不僅可在水中應(yīng)用，也可以在極性有機(jī)溶劑或它們與水組成的混合溶劑中膨潤使用。 交聯(lián)瓊脂糖凝膠 瓊脂糖是從天然瓊脂中分離制備的鏈狀多糖，結(jié)構(gòu)單元為交替排列的D-半乳糖和3，6-脫水-L-半乳糖。瓊脂糖鏈間以氫

23、鍵相互連接形成瓊脂糖束，經(jīng)凝聚處理后構(gòu)成瓊脂糖凝膠。 瓊脂糖的商品名因生產(chǎn)廠家不同而異。 瑞典的商品名為Sepharose；美國的為Bio-Gel A；英國的為Segavac；丹麥的為Gelarose 。 交聯(lián)瓊脂糖凝膠 除Segavac外，都是懸浮于10-3mol/l EDTA和0.02%NaN3（疊氮化鈉）溶液中以濕態(tài)形式出售。 Sepharose有三種型號(hào)：Sepharose 2B、4B和6B。 數(shù)字表示凝膠中干膠的百分含量。從2B到6B，瓊脂糖濃度逐漸增加，篩孔逐漸減小，機(jī)械強(qiáng)度依次增大。 聚丙烯酰胺凝膠 聚丙烯酰胺凝膠是全合成的凝膠。 商品名Bio-Gel P-。 P-后的數(shù)字乘以1

24、 000，表示該種凝膠可應(yīng)用于分離蛋白質(zhì)的最高分子質(zhì)量。 P后面的數(shù)字越大，越適合于大分子的分離。 2. 透析法 透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜，而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì)，達(dá)到分離的方法。 例如分離和純化皂甙、蛋白質(zhì)、多肽、多糖等物質(zhì)時(shí)，可用透析法以除去無機(jī)鹽、單糖、雙糖等雜質(zhì)。 透析膜有動(dòng)物性膜、火棉膠膜、羊皮紙膜（硫酸紙膜）、蛋白質(zhì)膠膜、玻璃紙膜等。 透析袋3. 超濾法 1) 原理 超濾是一種以壓力為驅(qū)動(dòng)力，利用超濾膜的篩分作用，根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的不同來進(jìn)行分離的膜技術(shù)。 超濾膜的孔徑通常在1300nm之間，選用不同孔徑的超濾膜，可以將相對(duì)分子質(zhì)量在幾百到幾十萬之間的物

25、質(zhì)進(jìn)行分離。 待分離組分的大小一般要相差10倍以上。3. 超濾法 2) 超濾膜的選擇 截留分子量的選擇 膜的孔徑或截留分子量的選擇雖然主要是根據(jù)被分被分離物的相對(duì)分子質(zhì)量離物的相對(duì)分子質(zhì)量。 超濾膜的選擇 膜表面是液體和膜相互作用的界面，溶質(zhì)和膜之間有靜電相互作用或電荷轉(zhuǎn)移反應(yīng)，膜表面的極性、溶液的pH值等均會(huì)影響膜的分離效率。 最好采用抗污性較好的膜材料，如聚丙烯腈、磺化聚砜膜等。3. 超濾法 3） 超濾法的特點(diǎn)： 選擇性高，分離效率高。 減少工序，縮短生產(chǎn)周期（不需加熱濃縮），節(jié) 約原料，降低成本。 物質(zhì)不發(fā)生相變，常溫操作， 有效成分不被破 壞，能保持原配方的成分。 去雜質(zhì)效果好。 除菌

26、效果好。 超濾后可得到無菌澄清的藥液，代替加熱滅菌。超濾柱提純大分子物質(zhì)示意圖壓力：6.91046.9105Pa第三節(jié) 天然產(chǎn)物的分離和精制 一、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離二、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 不同進(jìn)行分離 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離六、其他分離方法 五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分離 離子交換法 1. 原理： 以離子交換劑作為固定相，以水或含水溶劑作為流動(dòng)相。當(dāng)流動(dòng)相流過交換柱時(shí)，溶液中的中性分子及與離子交換劑不能發(fā)生交換的離子將通過柱子從柱底流出，而可發(fā)生交換的離子則與交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換并吸附到柱上，然后改變條件

27、，用適當(dāng)溶劑將其從柱上洗脫下來，即可實(shí)現(xiàn)物質(zhì)分離。離子交換法 2. 結(jié)構(gòu)與性質(zhì) 根據(jù)離子交換劑所含功能團(tuán)的酸堿性，可分為陽離子交換劑和陰離子交換劑兩大類；根據(jù)交換劑的基質(zhì)性質(zhì)，可分為離子交換樹脂、離子交換纖維素、離子交換凝膠三種。 離子交換劑含有解離性離子交換基團(tuán)（功能基團(tuán)）的高分子物質(zhì)，由兩部分組成：一部分是大分子聚合物基質(zhì)主體結(jié)構(gòu)，另一部分是具有荷電活性的功能基團(tuán)。 ClXNRRXClNR-R:HMSORMHSO-R:33-3-3陰陰離離子子交交換換陽陽離離子子交交換換 離子交換樹脂中的主體結(jié)構(gòu)樹脂是人工合成的疏水性物質(zhì)，如聚苯乙烯、聚苯酚磺酸、聚丙烯酸等。 1）類型： A陽離子交換樹脂這

28、類交換樹脂基質(zhì)上共價(jià)結(jié)合的是帶負(fù)電荷帶負(fù)電荷的活性基團(tuán)，即反離子為陽離子，能與溶液中帶正電荷的物質(zhì)進(jìn)行交換。根據(jù)其活性基團(tuán)解離度的不同，可進(jìn)一步分成強(qiáng)酸型、弱酸型和中等酸型三類。 強(qiáng)酸型：R-SO3H 中等酸型：R-COOH、R-PO3H2 弱酸型：R-OH、R-SH（1）離子交換樹脂B、陰離子交換樹脂這類交換樹脂基質(zhì)上共價(jià)結(jié)合的是帶正電荷帶正電荷的活性基團(tuán)，即反離子為陰離子，能與溶液中帶負(fù)電荷的物質(zhì)進(jìn)行交換。強(qiáng)堿型：含有季胺基團(tuán)，通式為R-NRRROH中等堿型：主體結(jié)構(gòu)上既結(jié)合強(qiáng)堿性基團(tuán)又結(jié)合弱堿性基團(tuán)弱堿型：含有伯胺、仲胺或叔胺基團(tuán)，通式R-NH3OH、R-NH2ROH、R-NHRROH

29、2）性質(zhì) A顏色與形狀黑色、黃色和乳白色等。外形大部分呈珠狀，大小以目表示。 B交換容量離子交換樹脂與溶液中的離子或離子化合物進(jìn)行交換的能力，它取決于單位質(zhì)量（或體積）的樹脂中活性基團(tuán)的數(shù)目，單位為mmol/g（ml）樹脂。 3）應(yīng)用 A用于不同電荷離子的分離。 B用于相同電荷離子的分離。（2）離子交換纖維素 離子交換纖維素是由纖維素作主體結(jié)構(gòu)，纖維素上的OH基團(tuán)被功能團(tuán)取代而形成的，屬于親水型離子交換劑。 可分為陽離子型和陰離子型。 離子交換纖維素層析的原理和離子交換樹脂相似，在植物成分分析方面的區(qū)別在于：前者適用于蛋白質(zhì)、酶等活性大分子；后者適用于aa、肽、核苷酸、生物堿、甾醇、萜類、黃酮

30、等中小分子，以及大分子溶液中表面活性劑、尿素及兩性電解質(zhì)的去除。（3）離子交換凝膠 離子交換凝膠與離子交換纖維素相同，屬于親水型離子交換劑。 離子交換凝膠兼有分子篩和離子交換兩種功能，總交換量比離子交換纖維素大，因此，在某些情況下，分離能力超過了由單一樹脂或纖維素構(gòu)成的離子交換劑。 不足之處：當(dāng)洗脫溶液的pH值和離子強(qiáng)度改變時(shí)，大部分離子交換凝膠的基質(zhì)體積會(huì)發(fā)生較大的變化，造成柱體積壓緊、流速降低。第三節(jié) 天然產(chǎn)物的分離和精制 一、根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離二、根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配比 不同進(jìn)行分離 三、根據(jù)物質(zhì)的吸附性差別進(jìn)行分離四、根據(jù)物質(zhì)分子大小進(jìn)行分離五、根據(jù)物質(zhì)解離程度不同進(jìn)行分

31、離六、其他分離方法 主要用于生物大分子與固定相之間的特異親合力進(jìn)行選擇性分離及純化的方法。 分離原理：于載體表面先鍵合具有一般反應(yīng)性能的環(huán)氧或聯(lián)氨（稱為間隔臂），然后再連接上配基，如酶、抗原或激素。當(dāng)含有復(fù)雜混合試樣的流動(dòng)相流經(jīng)這種經(jīng)固定化的配基時(shí)，其中具有親合力特性的生物大分子與配基相互作用而被保留，無此作用的則被洗出；隨后，改變流動(dòng)相pH值或組成，再將被保留的大分子組分以純品的形式洗脫出來。1.親合色譜親和色譜示意圖2. 超臨界流體萃取法 超臨界流體萃取法是利用超臨界狀態(tài)下的流體為萃取劑，從液體或固體中萃取中藥材中的有效成分并進(jìn)行分離的方法。 CO2因其本身無毒、無腐蝕、臨界條件適中（7.

32、488Mpa，304.15K）的特點(diǎn)，成為超臨界流體萃取法最為常用的超臨界流體（SF）。 現(xiàn)已成功利用超臨界流體提取法提取到了青蒿素，延胡索乙素，薯蕷皂苷、玫瑰精油、卵磷脂等。第四節(jié) 天然產(chǎn)物化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)鑒定 一、化合物的純度測(cè)定 1. 檢查樣品有無均勻一致的晶形，有無明確尖銳的熔點(diǎn)等； 2. 薄層層析TLC（熒光、顯色劑）。一般，只有當(dāng)樣品在三種展開系統(tǒng)中均呈現(xiàn)單一斑點(diǎn)時(shí)方可確認(rèn)其為單一化合物，個(gè)別情況下，甚至須采用正、反相層析兩種方式加以確認(rèn)。 3. 氣相色譜GC和HPLC是一種很好的檢測(cè)方法，省時(shí)、靈敏度高。二、結(jié)構(gòu)研究的主要程序1. 已知化合物鑒定的一般程序1）測(cè)定樣品的熔點(diǎn)，與已知

33、品的文獻(xiàn)值對(duì)照，比較 是否一致或相近2）測(cè)定樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的混熔點(diǎn)，所測(cè)熔點(diǎn)值不下降3）將樣品與標(biāo)準(zhǔn)品共薄層色譜或紙色譜，比較其Rf值是否一致4）測(cè)定樣品的紅外光譜圖，與標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜或標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行比較，是否完全一致。二、結(jié)構(gòu)研究的主要程序 2. 未知化合物結(jié)構(gòu)研究 1）方法注意樣品在提取、分離過程中的行為。測(cè)定有關(guān)理化性質(zhì)，如不同pH值、不同溶劑中的溶解度及層析行為、灼燒實(shí)驗(yàn)、化學(xué)定性反應(yīng)等。結(jié)合文獻(xiàn)調(diào)研。二、結(jié)構(gòu)研究的主要程序 2. 未知化合物結(jié)構(gòu)研究 2）程序： 進(jìn)行檢識(shí)反應(yīng)，初步推斷化合物的類型 化合物分子式的測(cè)定a、元素分析結(jié)合分子量測(cè)定 b、同位素峰法c、高分辨質(zhì)譜 計(jì)算不飽和度

34、r+db，推測(cè)可能存在的基團(tuán) 測(cè)定有關(guān)光譜，如IR，UV，1H-NMR，13C-NMR來確定其結(jié)構(gòu) 結(jié)構(gòu)驗(yàn)證： a. 根據(jù)初步推斷的結(jié)果與已知化合物進(jìn)行比對(duì)； b. 測(cè)定NOE譜或二維核磁共振譜； c.進(jìn)行X-ray d. 人工合成。三、 結(jié)構(gòu)研究中采用的主要方法 1. 確定分子式、計(jì)算不飽和度1）元素定量分析 + 分子量測(cè)定 一般在進(jìn)行元素定量分析前應(yīng)先進(jìn)行元素定性分析，找出分子中存在哪幾種原子。進(jìn)行元素定量分析，找出各種原子的相對(duì)數(shù)目，即決定經(jīng)驗(yàn)式（實(shí)驗(yàn)式）。 測(cè)定分子量，確定各種原子的確實(shí)數(shù)目，給出分子式。 例如：從刺果甘草根中分得的某白色針晶，該物質(zhì)只含有C、H、O三種元素，元素定量分

35、析得到以下結(jié)果C：79.35%，H：10.21%，EI-MS測(cè)定其分子離子峰（m/z）為456，試確定該化合物的分子式。 解： （1）從100中扣除C 、H后得O=10.44%； （2）C：H：O=79.35%/12.01：10.21%/1.008：10.44%/16.00 =10.16：15.58：1 按倍比定律，原子間的化合一定是整數(shù)的，所以最終確定為（C10H16O）n； （3）因?yàn)镋I-MS測(cè)定其分子離子峰（m/z）為456， C10H16O 的分子量為152，所以n=456/152=3； （4）該化合物最終確定為C30H48O3。2）同位素峰度比法 已知組成有機(jī)化合物的主要元素（F、

36、P、I除外）均由相對(duì)峰度比一定的同位素所組成，且重元素一般比輕元素重1-2個(gè)質(zhì)量單位。 故由重元素組成的分子也將較輕元素組成的正常分子重1-2個(gè)質(zhì)量單位。所以，在大多數(shù)有機(jī)化合物的MS圖上，除分子離子峰M+外，常能看到M+1，M+2的同位素峰。 對(duì)一定的化合物來說，其M、 M+1及M+2峰的相對(duì)強(qiáng)度始終為一定值（含Cl、Br除外）。3）高分辨質(zhì)譜（HR-MS）法 高分辨質(zhì)譜（HR-MS）可將物質(zhì)的質(zhì)量精確測(cè)定到小數(shù)點(diǎn)后第3位。 例如： C8H12N4 、C10H12N2O、C10H12O2、C10H16N2四種化合物，它們的相對(duì)分子質(zhì)量雖都是164，但精確質(zhì)量并不相同，在HR-MS上可以很容易

37、地進(jìn)行分別。 C8H12N4 164.1063 C10H12N2O 164.0950 C10H12O2 164.0837 C10H16N2 164.1315 4）計(jì)算不飽和度 r+db=IV- I/2 + III/2 + 1 I 為一價(jià)原子（如H、D、X）的數(shù)目； III 為三價(jià)原子（如N、P）的數(shù)目； IV為四價(jià)原子（如C、Si）的數(shù)目。 O、S等二價(jià)原子與不飽和度計(jì)算無關(guān)，故不予考慮。2. 紫外可見吸收光譜（UV-VIS） 200400nm為紫外譜區(qū)，400700nm為可見譜區(qū) 。 （1）UV中常用的光譜術(shù)語： max和min表示樣品分子的最大和最小吸收波長， max摩爾吸收系數(shù)； 發(fā)色團(tuán)

38、：指能吸收光子能量并產(chǎn)生躍遷的不飽和共價(jià)鍵基團(tuán)，這些基團(tuán)一般帶有電子，如：C=C、C=O、C=N、N=N、N=O等； 助色團(tuán)：指在200nm以上沒有吸收，但與發(fā)色團(tuán)相連后可使發(fā)色團(tuán)的最大吸收峰向長波長方向移動(dòng)，吸收強(qiáng)度也有所增加的基團(tuán)，一般為帶有n電子的原子或官能團(tuán)，如OH、NH2、Cl、SH等；紅移：使吸收峰向長波長方向移動(dòng)的現(xiàn)象；藍(lán)移：使吸收峰向短波長方向移動(dòng)的現(xiàn)象；增色效應(yīng)：使吸收強(qiáng)度增加的效應(yīng)；減色效應(yīng)：使吸收強(qiáng)度減弱的效應(yīng)。 一般采用紫外分光光度計(jì)。（2）UV吸收特征與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系1）無共軛體系的簡單分子 飽和碳?xì)浠衔铮哼@類化合物分子中只有電子，在 近紫外區(qū)無吸收。 帶雜原子的飽

39、和分子，僅少數(shù)化合物的吸收帶落在近紫外區(qū) 具孤立發(fā)色團(tuán)分子：孤立發(fā)色團(tuán)均含有雙鍵，若再有n電子（如羰基）時(shí)，則會(huì)發(fā)生躍遷，從而產(chǎn)生一系列孤立發(fā)色團(tuán)的特征吸收帶。 與助色團(tuán)相連的不飽和鍵：當(dāng)助色團(tuán)與不飽和鍵相連時(shí)，由于雜原子，如N、O、Br等上的孤對(duì)電子可與不飽和鍵中的電子云發(fā)生p-共軛，所以吸收帶紅移，同時(shí)吸收強(qiáng)度也增加。（2）UV吸收特征與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系 2) 共軛分子 丙烯和胡蘿卜素分子都含有碳碳雙鍵，但前者無色，后者則為桔黃色。why？原來，隨著共軛烯鍵的增加，電子不僅可在孤立雙鍵之間活動(dòng)，而且可在不同共軛程度的多烯范圍內(nèi)活動(dòng)，這也是多烯類化合物常出現(xiàn)一系列吸收峰的原因所在。 由于紫外光

40、譜的吸收波長呈現(xiàn)比較強(qiáng)的規(guī)律性，故共軛多烯的紫外吸收可從理論上進(jìn)行預(yù)測(cè)，如Woodward-fieser規(guī)則、Fieser-Kuhn規(guī)則等。（3）紫外光譜的應(yīng)用 1）成分的鑒定骨架類型的判斷 兩個(gè)指標(biāo)max及max a若在200-400nm之間無吸收，則說明該分子為飽和化合物或僅帶有孤立C=C的非共軛分子。 b若在270-350nm之間有弱吸收（=10-100），且在200nm以上無其他吸收，表明該化合物可發(fā)生n-*躍遷。據(jù)此可推測(cè)分子中有-C=O、-C=C-O、-C=N-、-C=C-N等帶有孤對(duì)電子的未共軛的發(fā)色團(tuán)。A. 骨架類型的判斷c若紫外圖譜上有許多峰，且某些峰甚至出現(xiàn)在可見光區(qū)，則該

41、化合物可能具有長鏈共軛系統(tǒng)或稠環(huán)芳烴。d若波長吸收峰在250nm以上，max在1000-10000之間，則化合物一般含有芳香系統(tǒng)。e若波長吸收峰的強(qiáng)度max在10000-20000之間，標(biāo)明分子中具有、-不飽和酮或共軛烯烴。B. 異構(gòu)體的判斷 a酮式和醇式的判斷 如：苯甲酰丙酮有兩個(gè)異構(gòu)體，它們的紫外吸收完全不同OOOHO max 247nm max 310nmb. 順式和反式的區(qū)別 2）樣品中雜質(zhì)的檢查 紫外光譜可用來測(cè)定試樣中具有紫外吸收的微量雜質(zhì)。紫外分析也是藥檢部門的常用方法之一。 例如，腎上腺素中常?；煊衅浜铣稍夏I上腺酮，此雜質(zhì)的含量過高會(huì)影響腎上腺素的療效，藥檢機(jī)關(guān)就是采用紫外光

42、譜來檢測(cè)腎上腺酮的含量的。3）在定量分析中的應(yīng)用 利用紫外光譜進(jìn)行定量分析的前提是樣品必須在紫外-可見光區(qū)有明顯的吸收，其原理基于朗伯-比爾定律，即樣品在某波長處的吸收強(qiáng)度與所測(cè)樣品的濃度成正比A=cl 。3. 紅外光譜 (IR) 分子中價(jià)鍵的伸縮及彎曲振動(dòng)將在光的紅外區(qū)域，即4000-625cm-1處引起吸收。測(cè)得的吸收?qǐng)D譜叫紅外光譜IR (Infrared Absorption Spectroscopy)。 特征譜帶區(qū)指紋區(qū)發(fā)生在40001500cm-1的吸收峰比較稀疏，容易辨認(rèn)，且由化合物中主要官能團(tuán)產(chǎn)生的吸收。 發(fā)生在1500600cm-1的吸收峰。比較密集，猶如人的指紋，故稱指紋區(qū)。

43、 特征區(qū)和指紋區(qū)細(xì)分為八個(gè)重要區(qū)段 （cm-1） 37503000 OH，NH； 33003000 C-H的不飽和鍵伸縮振動(dòng)，CH（CC-C，C= C-H，Ar-H）；30002700 C-H的飽和鍵伸縮振動(dòng)，CH (-CH3， -CH2, CH，H-C=O) ；25002000 叁鍵和累積雙鍵的伸縮振動(dòng)區(qū)，CC，CN，-CC-C-；19001650 C=O（酸、醛、酮、酯、酸酐、酰胺）；16801500 C=C，C=N（脂酚、芳香、16001500比較強(qiáng)的苯環(huán)骨架振動(dòng)）；14751300 C-H（面內(nèi)）；1000650 C=C-H，Ar-H（面外），C-H的彎曲振動(dòng)。 IR應(yīng)用1）定性分析已

44、知物標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法和標(biāo)準(zhǔn)圖譜查對(duì)法 2）定量分析符合朗伯特-比爾定律 3）結(jié)構(gòu)測(cè)定主要用于判斷分子中官能團(tuán)的存在及其所處狀態(tài) 4. 質(zhì)譜（MS） 質(zhì)譜可用于確定分子量、求算分子式和提供其他結(jié)構(gòu)信息。 常用的質(zhì)譜是電子轟擊質(zhì)譜EI-MS、電噴霧質(zhì)譜ESI-MS、快速原子轟擊質(zhì)譜FAB-MS，另外還有化學(xué)電離質(zhì)譜CI-MS、場致電離FI-MS、場解析電離FD-MS等。 （1）正電荷的表示法 質(zhì)譜的裂解規(guī)律： 中性分子的電子數(shù)為偶數(shù)，失去一個(gè)電子后形成的離子的電子數(shù)必為奇數(shù)，帶奇數(shù)電子的離子用“+”表示。 此外，電荷的位置要盡量標(biāo)識(shí)清楚。 一般的，有機(jī)物失去電子從易到難的順序?yàn)椋弘s原子上的孤對(duì)電子共軛

45、電子電子電子。因此，電荷的位置多在雜原子或不飽和鍵上。（2）常見的裂解方式1）簡單裂解簡單裂解 只涉及到一個(gè)共價(jià)鍵的斷裂，根據(jù)斷裂鍵與官能團(tuán)的相對(duì)位置，簡單裂解又可分為-裂解、-裂解和-裂解等。 -裂解指具有正電荷的官能團(tuán)的原子和-碳原子之間的斷裂，如：OO+CH3+-裂解指-與-碳原子之間的裂解+RH2C CH2OHR CH2+H2C OH2）重排裂解 RDA裂解為一些不飽和環(huán)狀化合物的一類重要的裂解反應(yīng)，其裂解過程是Diels-Alder成環(huán)反應(yīng)的逆反應(yīng)。逆Diels-AlderDiels-Alder+二烯碎片單烯碎片5. 核磁共振（Nuclear Magnetic Resonance）

46、核磁共振是由于自旋核吸收一定能量從低能狀態(tài)躍遷到高能狀態(tài)引起的。核磁共振可提供核與核之間相對(duì)關(guān)系的信息，這些信息對(duì)化合物分子的結(jié)構(gòu)測(cè)定很有意義。1HNMR13C-MNR2D-NMR主要分類（1） 1HNMR 1H-NMR測(cè)定中通過化學(xué)位移、譜線的積分面積以及裂分情況（重峰數(shù)及偶合常數(shù)J）可以提供分子中H的類型、數(shù)目及相鄰原子或基團(tuán)的信息，對(duì)天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)測(cè)定具有十分重要的意義。1）化學(xué)位移（ppm） 化學(xué)位移值范圍一般為0-12ppm sp3雜化碳上的氫，即飽和烷烴中的氫的0-2之間，且大致按照環(huán)丙烷CH3CH2CH的順序依次增大。 sp2雜化碳上的氫指烯氫和苯環(huán)上的氫，烯氫的化學(xué)位移在4.5

47、-7.0之間，芳?xì)浼埃?不飽和羰基系統(tǒng)中位氫信號(hào)在6.0-8.5之間，醛基氫在9.0-10.0。sp雜化碳多指炔碳，有時(shí)也指疊烯碳，如丙二烯CH2=C=CH2。炔氫及炔鍵上甲基的化學(xué)位移一般都在1.7-2.3之間。 活潑氫，判斷某信號(hào)是否源于活潑氫時(shí)，最常用的方法就是在樣品管中加入一滴重水再記錄圖譜看該峰是否消失。R-OH（0.5-5），Ar-OH游離（4.0-8.0），Ar-OH分子內(nèi)締合（10.0-15.0）。2）偶合常數(shù)（J） 已知磁不等同的兩個(gè)或兩組1H核在一定距離內(nèi)會(huì)因相互自旋偶合干擾而使信號(hào)發(fā)生分裂，表現(xiàn)出不同分裂，如s（單峰）C-C，d（二重峰）C CH , t（三重峰）C-CH

48、2, q（四重峰）C-CH3 , m（多重峰）等。 遵循n+1 規(guī)則當(dāng)某核同時(shí)與n個(gè)鄰近的核偶合且偶合常數(shù)相等時(shí)，則該核的信號(hào)會(huì)裂分成n+1個(gè)小峰。 可用來判斷基團(tuán)之間的位置， 對(duì)芳環(huán)而言，鄰位偶合常數(shù)最大，一般為J=6.0-9.4Hz，間位偶合常數(shù)次之，一般為J=1.0-3.1Hz，對(duì)位偶合常數(shù)最小，一般為J=0-1.7Hz3) 積分面積（s） 1H-NMR上積分面積與分子中的總質(zhì)子數(shù)相當(dāng)，當(dāng)分子式已知時(shí)，就可以算出每個(gè)信號(hào)所相當(dāng)?shù)腍數(shù)。 測(cè)定樣品所用溶劑及所需要的條件測(cè)定樣品所用溶劑及所需要的條件： 對(duì)樣品有足夠的溶解度。 與樣品不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。 溶劑的吸收峰對(duì)樣品信號(hào)沒有干擾。 常用氘代溶劑有CDCl3、CD3OD 、DMSO、CD3COCD3、氘代吡啶等。1H-NMR3H339H2H1H至少19個(gè)HOOCH3OHH3COCH3OOCH3ONH21