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文檔簡介

1、PCRPCR產物的回收純化產物的回收純化. .實驗目的實驗目的 學習和掌握從瓊脂糖凝膠中純化回收學習和掌握從瓊脂糖凝膠中純化回收DNADNA片段的有片段的有關技術。關技術。背景知識背景知識vDNADNA片段的純化：主要目的是回收得到純的目的片段的純化：主要目的是回收得到純的目的DNADNA片段，去片段，去除影響除影響DNADNA連接酶活性的物質以及其它的連接酶活性的物質以及其它的DNADNA片段。片段。v純化純化DNADNA片段的方法有多種，如：電洗脫法、從低熔點或普片段的方法有多種，如：電洗脫法、從低熔點或普通瓊脂糖凝膠中回收、玻璃珠純化、柱層析以及硅膠吸附等通瓊脂糖凝膠中回收、玻璃珠純化、

2、柱層析以及硅膠吸附等方法。目前一些生物公司推出了直接從方法。目前一些生物公司推出了直接從 PCRPCR產物中或瓊脂糖產物中或瓊脂糖凝膠中回收凝膠中回收DNADNA片段的試劑盒，有效地加快了片段的試劑盒，有效地加快了DNADNA的純化的速的純化的速度。度。實驗材料實驗材料vPCRPCR產物產物(1.15kb(1.15kb，帶有，帶有BamBamHIHI、XhoXhoI I酶切位點酶切位點) )v酚；氯仿；無水乙醇；酚；氯仿；無水乙醇；70%70%乙醇；滅菌雙蒸水乙醇；滅菌雙蒸水vTAETAE緩沖液緩沖液(1(1) )v上樣液上樣液(10(10) )實驗儀器實驗儀器v1、瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)v2、紫

3、外觀察分析儀v3、離心機（Eppendoff）v4、單面刀片實驗步驟實驗步驟v1、制備1%瓊脂糖凝膠，然后對目的DNA進行瓊脂糖凝膠電泳。v2、在紫外燈下切出含有目的DNA的瓊脂糖凝膠，用紙巾吸盡凝膠表面的液體。 此時應注意盡量切除不含目的此時應注意盡量切除不含目的DNADNA部分的凝膠，部分的凝膠，盡量減少凝膠體積，提高盡量減少凝膠體積，提高DNADNA回收率。回收率。 注：切膠時請注意不要將注：切膠時請注意不要將DNADNA長時間暴露于紫外長時間暴露于紫外燈下，以防止燈下，以防止DNADNA損傷損傷。v3、將切下的凝膠放入Eppendorf管中，移入100ulTE緩沖液，使其浸沒于TE緩沖液中v4、搗碎凝膠 ,-80 ,10min 。v5、加入等體積（各200L )酚氯仿，蓋緊，劇烈振搖。 10000rpm 4 離心5分鐘。v6在一新1.5mL 離心管中加入 2.5倍體積預冷 無水乙醇、1/10體積3M的醋酸鈉。將步驟5的上清小心加入本步驟離心管中。顛倒數(shù)次混勻。在 -80,靜置30min，12000rpm 4 離心15分鐘。v7棄上清，將離心管倒置于干凈吸水紙巾上5分鐘。室溫下吹風

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