浙江大學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)甲維生素C的定量測定二氯酚靛酚滴定法

1、維生素C的定量測定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）1、維生素C簡介維生素C是人類營養(yǎng)中最重要的維生素之一，食物中如缺乏，將會導(dǎo)致壞血病，因此又稱為抗壞血酸。植物的綠色部分及許多水果（如橙子、橘子、蘋果、草莓、山楂、鮮棗、獼猴桃等）、蔬菜（黃瓜、洋白菜、西紅柿、豆芽菜、辣椒等）中維生素C的含量尤為豐富。維生素C為一種稍有酸味的糖類白色晶體，易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑。在酸性溶液中比在中性及堿性溶液中穩(wěn)定，易被熱、光及某些金屬離子（Cu2+ 、Fe2+等破壞。1維生素C的定量測定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）維生素C具有很強(qiáng)的還原性，參與體內(nèi)多種氧化還原反應(yīng)，是一些氧化還原酶的輔酶。金屬銅和酶（抗壞血

2、酸氧化酶）可催化維生素C氧化為脫氫型（氧化型）。還原型和氧化型都具有活力。2、維生素C的測定原理 根據(jù)維生素C的還原性可測定其含量，常用2，6-二氯酚靛酚測定法。還原性抗壞血酸能還原染料2，6二氯酚靛酚，本身則氧化為脫氫型。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈紅色，還原后變?yōu)闊o色。2維生素C的定量測定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）因此，當(dāng)用此染料滴定含有維生素C的酸性溶液時，維生素C尚未全部被氧化前，則滴下的染料立即被還原成無色。一旦溶液中的維生素C已全部被氧化時，則滴下的染料立即使溶液變成粉紅色。所以，當(dāng)溶液從無色轉(zhuǎn)變成微紅色時即表示溶液中的維生素C剛剛?cè)勘谎趸?，此時即為滴定終點(diǎn)。如無其它雜

3、質(zhì)干擾，樣品提取液所還原的標(biāo)準(zhǔn)染料量與樣品中所含的還原性抗血酸量成正比。300 O CHO CHO C H CHO CH CH2OHO還原型抗壞血酸 O C O C O C H CHO CH CH2OHO氧化型抗壞血酸ClNClOOHClNClOO-ClNClHOOHH還原型2，6-二氯酚靛酚（無色）氧化型2，6-二氯酚靛酚（粉紅色）（藍(lán)色）H+ OH-+（被還原的標(biāo)準(zhǔn)染料量與樣品中所含的還原型抗壞血酸量成正比）4維生素C的定量測定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）滴定終點(diǎn)：當(dāng)溶液從無色轉(zhuǎn)變成微紅色（15s內(nèi)不消退）時即表示溶液中的維生素C剛剛?cè)勘谎趸?，此時即為滴定終點(diǎn)。2，6-二氯酚靛酚滴定法

4、的特點(diǎn)：簡便，快速，比較準(zhǔn)確，適用于許多不同類型樣品的分析。缺點(diǎn)是不能直接測定樣品中的氧化型抗壞血酸，并且，易受其它還原物質(zhì)的干擾，如果樣品中含有色素類物質(zhì)，還會給滴定終點(diǎn)的觀察造成困難。3、材料與試劑 、實(shí)驗(yàn)材料 5維生素C的定量測定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）橘子、青椒等。、試驗(yàn)試劑標(biāo)準(zhǔn)抗壞血酸溶液和2，6-二氯酚靛酚溶液配制時的注意事項(xiàng)參P162。4、操作方法操作步驟及注意事項(xiàng)參P162-P163。5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及處理準(zhǔn)確紀(jì)錄所稱青椒的克數(shù)；仔細(xì)觀察滴定終點(diǎn)，準(zhǔn)確記錄滴定所用 2，6-二氯酚靛酚的毫升數(shù)，代入下列公式計(jì)算維生素C的含量：6維生素C的定量測定 （2，6-二氯酚靛酚滴定法）VA：滴定樣品所耗用的染料的平均體積（ml）V：滴定空白對照所耗用的染料的平均體積（ml）C：樣品提取液的總體積（ml）D：滴定時所取的樣品提取液體積（ml）T：ml染料能氧化