有效磷的測定

1、土壤有效磷的測定（0.5molL-iNaHCO3浸提一鉬銻抗比色法）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐寥乐杏行Я椎暮?，隨土壤類型、氣候、施肥水平、灌溉、耕作栽培措施 等條件的不同而異。通過土壤有效磷的測定，有助于了解近期內(nèi)土壤供應(yīng)磷的情 況，為合理施用磷肥及提高磷肥利用率提供依據(jù)。土壤速效磷的測定中，浸提劑的選擇主要是根據(jù)土壤的類型和性質(zhì)測定。浸 提劑是否適用，必須通過田間試驗(yàn)來驗(yàn)證。浸提劑的種類很多，近20年各國漸 趨于使用少數(shù)幾種浸提劑，以利于測定結(jié)果的比較和交流。我國目前使用最廣學(xué) 的浸提劑是0.5molL-iNaHCO3溶液（Olsen法），測定結(jié)果與作物反應(yīng)有良好的相 關(guān)性注1，適用于石灰性土壤、中性

2、土壤及酸性水稻土。此外還使用 0.03molL-iNH4F-0.025molL-iHCl溶液（Bray I法）為浸提劑，適用于酸性土壤和 中性土壤。同一土壤用不同的方法測得的有效磷含量可以有很大差異，即使用同一浸提 劑，而浸提時(shí)的土液比、溫度、時(shí)間、振蕩方式和強(qiáng)度等條件的變化，對測定結(jié) 果也會(huì)產(chǎn)生很大的影響。所以有效磷含量只是一個(gè)相對的指標(biāo)。只有用同一方法， 在嚴(yán)格控制的相同條件下，測得的結(jié)果才有相對比較的意義。在報(bào)告有效磷測定 的結(jié)果時(shí)，必須同時(shí)說明所使用的測定方法。二、實(shí)驗(yàn)原理石灰性土壤中磷主要以Ca-P （磷酸鈣鹽）的形態(tài)存在。中性土壤Ca-P、Al-P （磷酸鋁鹽）、Fe-P （磷酸鐵

3、鹽）都占有一定的比例。0.5molL-1NaHCO3、（pH8.5） 可以抑制Ca2+的活笥，使某些活性更大的與Ca結(jié)合的P浸提出來；同時(shí)，也可 使比較活性的Fe-P和Al-P起水解作用而被浸出。浸出液中磷的濃度很低，須用 靈敏的鉗藍(lán)比色法測定，其原理詳見土壤全磷的測定章節(jié)。當(dāng)土樣含有機(jī)質(zhì)較多時(shí)，會(huì)使浸出液顏色變深而影響吸光度，或在顯色出現(xiàn) 渾濁而干擾測定，此時(shí)可在浸提排蕩后過濾前，向土壤懸液中加入活性碳脫色， 或在分光光度計(jì)800nm波長處測定以消除干擾。三、試劑配制（1）0.5molL-iNaHCO3（pH8.5）浸提劑 42.0gNaHCO3 （化學(xué)純）溶于約 800ml水中，稀釋至1L

4、,用濃NaOH調(diào)節(jié)至pH8.5 （用pH計(jì)測定），貯于聚乙 稀瓶或玻璃瓶中，用塞塞緊。該溶液久置因失去CO2而使pH升高，所以如貯存 期超過20天，在使用前必須檢查并校準(zhǔn)pH值。（2） 無磷的活性碳粉和濾紙須做空白試驗(yàn)，證明無磷存在。如含磷較多， 須先用2molL-1HCl浸泡過液，用水沖洗多次后再用0.5molL-1NaHCO3浸泡過液， 在布氏漏斗上抽濾，用水沖洗幾次，最后用蒸餾水淋洗三次，烘干備用。如含磷 較少，則直接用0.5molL-1 NaHCO3處理。（3）鉬銻抗試劑 10.0g鉬酸銨（NH4）6Mo7O244H2O（分析純）溶于 300ml約60C的水中，冷卻。另取181ml濃H

5、2SO4 （分析純）慢慢注入約800ml 水中，攪勻，冷卻。然后將稀H2SO4液入鉬酸銨溶液中，隨時(shí)攪勻，再加入100ml 0.3% （m/v）酒石酸氧銻鉀K（SbO） C4H4O61H2O溶液；最后用水稀釋至2升，盛r2于棕色瓶中，此為鉬銻貯備液。臨用前（當(dāng)天）稱取0.50g抗壞血酸（分析純）溶于100ml鉬銻貯備液中， 此為鉬銻抗試劑，在室溫下有效期為24h，在28C冰箱中可貯存7天。（4） 磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液（Cp = 100mgL-1） 稱取105C烘干2h的KH2PO4 （分 析純）0.4394g溶于200ml水中，加入5ml濃H2SO4 （分析純）轉(zhuǎn)入1L容量瓶 中，用水定容，該貯備液可

6、長期保存。（5）磷標(biāo)準(zhǔn)工作液（Cp = 5mgL-1）將一定量的磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液用 0.5molL-1NaHCO3溶液準(zhǔn)確稀釋20倍，該標(biāo)準(zhǔn)工作液不宜久存。四、操作步驟1、將實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備好的風(fēng)干后的土壤樣品放入研缽中研磨，將研碎的土壤樣 品用帶有篩底和篩蓋的2mm篩孔的篩子過篩。未通過篩子的土粒，再次研磨過 篩，直至所有土壤樣品全部過篩，只剩下礫石為止。將剩余的礫石挑揀并入礫石 中處理，切勿碾碎。用天平分別稱取過篩后的土樣2g置于4個(gè)干燥的50ml塑料 瓶中，加入0.5molL-1NaHCO3）浸提劑40ml，加1勺無磷活性碳，于往復(fù)振蕩機(jī) 上振蕩301min，立即用無磷干濾紙過濾到干燥的50ml塑

7、料瓶中。2、在浸提土樣的當(dāng)天，吸取濾出液10.00ml放入干燥的50ml塑料瓶中，加 蒸餾水至30ml左右，加入5.00ml鉬銻抗顯色劑，慢慢搖動(dòng)，使CO2逸出。再加 入10.00ml水，充分搖勻，逐盡CO2定容至50ml。在室溫高于15C處放置30min 后，用1cm光徑比色杯在700nm波長處測讀吸光度，以空白溶液（10.00ml 0.5molL-iNaHCO3溶液代替土壤濾出液，同上處理）為參比液，調(diào)節(jié)分光光度計(jì) 的零點(diǎn)。3、校準(zhǔn)曲線：在測定土樣的同時(shí)，準(zhǔn)確吸取磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液0、2、4、6、 8ml，分別放入50ml容量瓶中，并用0.5molL-1NaHCO3溶液10ml,加水至30ml

8、， 加鉬銻抗試劑5ml，定容至50ml,混勻顯色，同待測液一樣進(jìn)行比色，繪成標(biāo)準(zhǔn) 曲線，最后溶液中磷濃度為0、0.2、0.4、0.6、0.8 mgL-1P。五、數(shù)據(jù)收集及處理（1）磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相關(guān)數(shù)據(jù)表（杯差：0.005）磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液體積（mL）02468溶液中磷濃度（mgL-1P）00.20.40.60.8減去杯差后的吸光度A00.0710.1940.2930.387到相對應(yīng)的磷濃度Cp分別為0、0.067、0.079、0.091、0.085 mgL-1。再根據(jù)下面的公式可以計(jì)算樣品中土壤有效磷：土壤有效磷（P）, mgkg-i =顯色液Cp *顯色液體積*分取倍數(shù)/土壤質(zhì)量式中：Cp從

9、校準(zhǔn)曲求得土壤濾出液中磷的濃度，mgL-iP顯色液體積50ml代入相關(guān)數(shù)據(jù)到以上公式可得：土壤有效磷=Cp * 50*（40/10）/2= Cp*100因此將從校準(zhǔn)曲求得土壤濾出液中磷的濃度Cp值0、0.067、0.079、0.091、0.085 mgL-i分別代入以上公式可得到土壤有效磷數(shù)據(jù)如以下表：（2）樣品溶液相關(guān)數(shù)據(jù)表（杯差：0.005）管號空白1234減去杯差后的吸光度A00.0230.0290.0350.032樣品中磷濃度（mgL-1）00.0670.0790.0910.085樣品中土壤有 效磷（mgkg-1）06.77.99.18.5最后算得樣品中土壤有效磷平均值為：（6.7+7

10、.9+9.1+8.5）/4=8.05 mgkg-1六、實(shí)驗(yàn)結(jié)論（1）已知用0.5molL-1NaHCO3浸提一鉬銻抗比色法測定結(jié)果的評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)如下：土壤有效 P（mgkg-1） 10土壤有效P供應(yīng)標(biāo)準(zhǔn) 低（缺磷）中（邊緣值）高（不缺磷）根據(jù)評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)可見樣品土壤有效磷含量為邊緣值，是處于缺磷和不缺磷之間，因 此為了達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，土壤有效P供應(yīng)還需要增加，有必要施加適量的磷肥。（2）誤差分析：從樣品中土壤有效磷的數(shù)據(jù)來看，可以發(fā)現(xiàn)，雖然土壤樣品是4個(gè)平行組， 可是最后測出來的樣品中土壤有效磷的數(shù)據(jù)在平均值上下波動(dòng)比較大，誤差也比 較大。而造成這樣的情況可能有：1、我們小組是分開行動(dòng)的，有一部分同學(xué)取風(fēng)干土樣加浸提劑和無磷活性碳， 有一部分同學(xué)去做磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。這樣的結(jié)果就是磷標(biāo)準(zhǔn)工作溶液定容后顯色 30多分鐘，才開始往振蕩好的樣品里加鉬銻抗顯色劑和定容。雖然最后磷標(biāo)準(zhǔn) 液和樣品是一起去測吸光度的，可是它們顯色的時(shí)間都是不一樣的，這樣會(huì)導(dǎo)致 一定的實(shí)驗(yàn)誤差。因此，應(yīng)該等樣品振蕩好之后再制作磷標(biāo)準(zhǔn)液，盡量保證磷標(biāo) 準(zhǔn)液和樣品顯色時(shí)間一樣長。2、在定容之前，我們都沒有認(rèn)真檢查容量瓶有沒有漏水。因此，在定容的時(shí)候， 我們在上下?lián)u動(dòng)容量瓶時(shí)有少量溶液流出，這也造成了一定的實(shí)驗(yàn)誤差。3、浸提時(shí)的土液比、溫度、