臨床免疫學(xué)檢查

1、第七章臨床免疫學(xué)吉林大學(xué)第一醫(yī)院檢驗科黃晶第三節(jié)病毒性肝炎血清標志物檢查 甲肝病毒(HAV) 乙肝病毒(HBV) 丙肝病毒(HCV) 丁肝病毒(HDV) 戊肝病毒(HEV) 庚肝病毒(HGV) 輸血傳播病毒（TTV) 病毒性肝炎標志物：肝炎病毒本身、組成該病毒的成份及抗病毒的抗體等總稱。 一、HAV標志物檢測甲型肝炎病毒標志物: 甲肝抗體(抗-HAV)參考值：陰性【臨床意義】抗-HAV IgM陽性表示近期感染過HAV,抗-HAV IgG陽性表示曾經(jīng)感染過HAV,見于甲肝恢復(fù)期二、HBV標志物檢測大球形顆粒管形顆粒小球形顆粒pre-s1pre-s2SPpre-cCHBV DNA 3.2 kbpr

2、e-S1 pre-S1蛋白pre-S2 pre-S2蛋白S HBsAgpre-C HBeAgC HBcAgP DNAPDane顆粒（完整的病毒）形態(tài)HBsAgHBcAgHBV DNADNAP（外膜蛋白）（核衣殼蛋白） 二、HBV標志物檢測 （1）乙肝三對半： HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb HBcAg PreS（2） HBVDNA測定PCR法 參考值：陰性【臨床意義】1)急性HBV感染可靠的診斷指標2）HBVDNA與血清學(xué)結(jié)果的評價HBsAg +HBsAb +HBeAg +HBeAb、HBcAb +HBV-DNA + - + + 【臨床意義】3）抗病毒療效觀察4）篩

3、查獻血隊員5）檢測疫苗安全性HbsAg HbsAb HbeAg HbeAb HbcAb 臨床意義 + - + - - 活躍期，傳染性強 + - - - + 攜帶者/感染早期 + - - + + 趨向恢復(fù)/傳染性弱 - + - - + 既往感染/恢復(fù)期 - - - + + 感染恢復(fù)期 - - - - + 窗口期/既往感染 - + - - - 感染恢復(fù)期/疫苗 - + - + + 感染恢復(fù)期/潛在感 染后有免疫力 + + - + + HBsAg變異三 HCV標志物檢測 【方法】ELISA、RIA、HCVRNA【參考值】陰性【臨床意義】1.抗HCV陽性-HCV感染標志 2.抗HCV-IgM陽性急性丙

4、肝3.抗HCV-IgG陽性慢性丙肝4.HCVRNA陽性病毒復(fù)制活躍有關(guān)抗-HCV免疫測定試劑的陽性判斷標準試劑名稱可判為陽性的S/COOrtho HCV version 3.0ELISA3.8Ortho Vitros anti-HCV assay8.0Abbott HC有關(guān)抗-HCV免疫測定試劑的陽性判斷標準V EIA 2.03.8Abbott Axsym antibody to HCV10.0Abbott Architect anti-HCV5.0抗HCV篩查及確認試驗結(jié)果的解釋篩查試驗結(jié)果確認試驗結(jié)果結(jié)果報告解釋陰性不需檢測抗HCV陰性未感染HCV,除非懷疑是最近感染陽性且S/CO高未檢測

5、抗HCV陽性提示既往或現(xiàn)癥HCV感染但尚有5%的標本可能為假陽性陽性陽性抗HCV陽性既往或現(xiàn)癥HCV感染陽性不確定抗HCV不確定不能確定抗HCV及HCV感染狀態(tài)陽性RIBA 陰性HCV RNA陰性抗HCV 陰性HCV RNA陰性未感染HCV,篩查結(jié)果可能為假陽性 四 HDV標志物檢測 HDAg、抗-HDVIgG和IgM檢測 【參考值】陰性 【臨床意義】 1.抗-HDVIgM急性感染 2.抗-HDVIgG慢性感染 五 HEV標志物檢測戊型肝炎病毒標志物:戊肝抗體(抗-HEV)【參考值】陰性【臨床意義】1.抗-HEVIgM陽性表示近期感染HEV2.抗-HAVIgG陽性表示戊型肝炎恢復(fù)期六 HGV標

6、志物監(jiān)測七 TTV標志物監(jiān)測 六、病毒性肝炎血清標志物間的的選擇和應(yīng)用 5種不同病毒性肝炎的特征HepatitisAHepatitisBHepatitisCHepatitisDHepatitisE核酸RNADNARNARNARNA傳播途徑消化道血液、母嬰血液血液消化道攜帶者無有有有無肝癌無有有？無血清學(xué)標志物抗HAV抗體三對半兩對半抗HCV抗體抗HDV抗體抗HEV抗體HAVRNAHBV-DNAHCV-RNA 第一節(jié)體液免疫檢查 一、免疫球蛋白檢測（immunoglobin，Ig）1. IgG IgA IgM IgE 【參考值】（免疫比濁法） IgG 7.6-16.6g/L IgA 0.7-3.

7、5 g/L IgM 0.48-2.12 g/L IgE 0.1-0.9 mg/L【臨床意義】 IgG IgA IgM IgE 疾病 慢性感染、慢性肝炎、自身免疫病 N N N IgG型MM、高丙種球蛋白血癥 N N N IgA型MM N N N 巨球蛋白血癥 N N N IgE型MM、過敏疾病、寄生蟲感染 低丙種球蛋白血癥、免疫缺陷病、 腎病、應(yīng)用免疫抑制劑2. IgG 亞型 IgG1 IgG2 IgG3 IgG4二血清M蛋白的檢測 M蛋白是一種單克隆B細胞異常增殖產(chǎn)生的具有相同結(jié)構(gòu)和電泳遷移率的免疫球蛋白分子或其片段?！九R床意義】M蛋白陽性提示單克隆免疫球蛋白增殖病。 見于：(1)MM：以I

8、gG型常見，其次為IgA,IgD和IgE 罕見，50%MM尿中可檢測BJP。 (2)巨球蛋白血癥：血液存在大量的單克隆 IgM。80%為輕鏈，20%為輕鏈 (3) 重鏈病、惡性淋巴瘤。三、補體檢測（complementry，C）1、總補體溶血活性測定(total hemolytic complement activity,CH50) 【原理】 致敏的SRBC+待測血清Ag-Ab 激活C 溶RBC 【參考值】 50-100KU/L2.補體C3、 C 4 測定【方法】 免疫比濁法【參考值】 C3 0.82-1.7g/L C 4 0.15-0.49g/L【臨床意義】（1）補體多見于急性感染、傳染病、

9、腫瘤、排斥反應(yīng)。（2）補體a 先天性缺陷b 后天性缺陷 合成：肝病、營養(yǎng)不良（合成原料不足） 消耗：腎小球腎炎、SLE、大失血第二節(jié)細胞免疫檢測 一淋巴細胞表面標志（一）T淋巴細胞表面標志 1.玫瑰花結(jié)形成實驗【參考值 】 57-71%2.免疫熒光法 【原理】流式細胞術(shù)【參考值】 CD4/CD8 0.9-2.0 【臨床意義】1. T細胞總數(shù)的變化（CD3） CD3見于： 免疫缺陷病 自身免疫病 病毒感染 惡性腫瘤 應(yīng)用免疫抑制劑2.T細胞亞群的變化CD4見于： 免疫缺陷病 病毒感染 惡性腫瘤 應(yīng)用免疫抑制劑3.CD3CD4CD8，同時伴CD2 CD5 CD7，應(yīng)考慮急性T淋巴細胞白血病。CD8

10、見于 自身免疫病CD4 /CD8 AIDS（二）B細胞分化抗原測定【參考值】 CD19陽性率 11.763.73%【臨床意義】 CD19 同時伴有SmIg、HLA表達見 于急性B淋巴細胞白血病。 CD19見于 無丙種球蛋白血癥 化療或應(yīng)用免疫抑制劑二淋巴細胞功能檢測（一）淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗原理:T細胞-ConA-或(PHA)-淋巴母細胞【參考值】 52-67% （形態(tài)法） SI 大于2 （H3摻入法或MTT法）【臨床意義】1.判定機體細胞免疫功能水平淋轉(zhuǎn)率見于 a細胞免疫缺陷 b細胞免疫功能：惡腫 免疫缺陷病 自身免疫病 病毒感染 應(yīng)用免疫抑制劑2.估計疾病療效及預(yù)后（二）NK細胞測定1乳酸脫氫

11、酶釋放法【參考值】細胞毒指數(shù)：27.5%-52.5%2. 51Cr釋放法【參考值】自然殺傷率：47.6%-76.8%【臨床意義】 1）NK細胞活性：病毒感染早期、抗移植排斥反應(yīng)、 應(yīng)用干擾素。 2）NK細胞活性：惡腫、免疫缺陷病、免疫抑制劑。 3）腫瘤療效觀察及預(yù)后評價。 4）免疫調(diào)節(jié)功能第四節(jié)感染免疫學(xué)檢測一細菌感染免疫檢測（一）抗鏈球菌溶血素O測定（anti-streptolysin，ASO）【臨床意義】 1.ASO升高見于： 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、腎小球腎炎、 感染性心內(nèi)膜炎、扁桃體炎 .判斷風(fēng)濕活動期指標之一。（二）肥達反應(yīng)( Widal reaction WR )【參考范圍】傷寒 O 80,

12、 H 160副傷寒 O 80, H 80【臨床意義】1.診斷傷寒、副傷寒2.早期使用抗生素、激素、免疫功能低下者WR可陰性 （三）結(jié)核桿菌抗體檢測【臨床意義】 結(jié)核分枝桿菌感 染輔助診斷實驗（四）C反應(yīng)蛋白（C reaction protein,CRP）【參考值】（ELISA） 0.42-5.2mg/L【臨床意義】鑒別細菌及病毒感染急性風(fēng)濕熱活動期創(chuàng)傷二病毒感染免疫檢測（一）漢坦病毒抗體測定 特異性IgM、IgG【臨床意義】 特異性IgM-腎綜合征出 血熱早期診斷（二）流行性乙型腦炎病毒抗體（三）人類輪狀病毒抗體（四）麻疹病毒抗體（五）柯薩奇病毒抗體（六) EB病毒抗體（七）梅毒螺旋體抗體檢測

13、定性試驗快速血漿反應(yīng)素試驗（rapid plasma reagin test，RPR）確診試驗梅毒螺旋體血清試驗（ treponemal pallidum hemagglutination test, TPHA）參考值 RPR、TPHA均陰性臨床意義1. RPR（+）TPHA（+）梅毒2. RPR（-）TPHA（+）感染過梅毒3. RPR（+）TPHA（-）進一步觀察TPHA （-）排除 TPHA（+）確診 4.RPR（+）可見于SLE、IM、TB、PSS（八）HIV抗體（human immunodeficient virus）篩選試驗 膠體金法、ELISA 確診試驗 WEST BLOT 、R

14、T-PCR參考值 陰性臨床意義 診斷AIDS 流行病普查三TORCH感染免疫檢測toxoplasmosisother(viruses)rubella CytomegalovirusHerpes simplex viruses 第五節(jié)腫瘤標志物檢測定義： 腫瘤細胞合成、釋放或由機體對腫瘤細胞反產(chǎn)生的一類物質(zhì)應(yīng)用范圍一、臨床應(yīng)用 腫瘤患者的輔助診斷、療效判斷、病情檢測、預(yù)后評估、評價手術(shù)、放療、化療是否有效。反映手術(shù)是否根除，判斷腫瘤有無復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。二、腫瘤高危人群的定期篩查三、腫瘤分子流行病學(xué)調(diào)查及腫瘤標志物生物學(xué)研究。1.甲種胎兒球蛋白（alpha fetoprotein, APF) -巖藻糖

15、苷酶（alpha fucosidase,AFU)【參考范圍】 APF低于25g/L; AFU 3-11U/L【臨床意義】 原發(fā)性肝細胞癌 生殖腺胚胎癌，胃癌，胰腺癌 病毒性肝炎，肝硬化 婦女妊娠3個月后APF開始升高，7-8個月達到高峰,分娩后 3周恢復(fù)正常。2.癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)【參考范圍】 EIA 、RIA 參考值5g/L【臨床意義】(1)消化道惡性腫瘤：整個胃腸道惡性腫瘤均可增高(2)非消化道惡性腫瘤：如卵巢癌、乳腺癌、肺癌等也有不同程度升高。(3)非腫瘤性疾病增高：良性腫瘤、大量吸煙、妊娠也可增高(4)CEA與其它腫瘤標志物結(jié)合測定可

16、以提高對癌癥的檢出率3.前列腺特異性抗原 (Prostate specific antigen，PSA) 復(fù)合型PSA,游離型PSA(f-PSA),前列腺癌患者可見血清PSA濃度升高。4.鱗狀細胞癌抗原（squamous cell caocinoma,SCC) 鱗癌腫瘤標志物5.癌抗原125測定（cancer antigen125, CA-125） 卵巢癌患者血清中CA125水平明顯升高6.癌抗原15-3（cancer antigen15-3, CA15-3） 乳腺癌患者常有CA15-3升高7.糖鏈抗原19-9（CA19-9） 在消化道腺癌病人血清中的濃度可明顯升高，是胰腺癌和膽管癌的腫瘤標志

17、物。8.糖鏈抗原72-4（CA72-4） 胃癌檢測首選標志物9.神經(jīng)元特異性烯醇化(neuronspecificenolase，NSE) 小細胞肺癌、神經(jīng)母細胞瘤患者NSE水平明顯升高10.人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG) 葡萄胎、絨毛癌異常升高；睪丸母細胞瘤，精原細胞瘤升高首選標志物對應(yīng)疾病AFP/AFU 肝癌CEA 結(jié)腸癌PSA 前列腺癌SCC 鱗癌CA125 卵巢癌CA153 乳腺癌CA199 胰腺癌/膽管癌CA72-4 胃癌NSE 小細胞肺癌HCG 絨毛癌/精原細胞癌第七節(jié)自身免疫檢查自身免疫性疾?。?由于某些原因造成免疫系統(tǒng)對自身

18、成分的免疫耐受性減低或破壞，致使自身抗體損傷含有相應(yīng)自身抗原的組織器官而引起的疾病。AutoantibodiesSystemic autoantibodiesAnti-Nuclear Antibody (ANA) Anti-neutrophil Cytoplasmic Antibody (ANCA) Anti-Double Strand DNA (Anti-dsDNA) Anti-Sjgrens Syndrome A (Anti-SS-A) (Ro) Anti-Sjgrens Syndrome B (Anti-SS-B) (La) Rheumatoid Factor (RF) Anti-Jo-

19、1 Anti-Ribonucleic Protein (Anti-RNP) Anti-Smith (Anti-SM) Antiscleroderma Antibody (Anti-SCL-70) Cardiolipin autoantibodies Endomysial/Gliadin autoantibodiesOrgan specific autoantibodies Thyroid Antibodies Anti-Smooth Muscle Antibody (ASMA) Diabetes Autoantibodies Anti-Mitochondrial Antibody (AMA)

20、Liver-Kidney Microsomal autoantibodies 一自身抗體檢測 （一）抗核抗體檢測（ANA) 抗核抗體是以細胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱。應(yīng)用免疫熒光法檢測ANA時，可出現(xiàn)四種熒光圖譜：均質(zhì)型、邊緣型、顆粒型、核仁型。 抗原成分：核蛋白（SLE）抗原成分：（SLE、MCTD） 抗原成分：（SS） 抗原成分：(PBC)1.抗DNA抗體抗dsDNA抗體抗ssDNA抗體 參考值 陰性臨床意義1）抗DNA抗體陽性主要見于SLE活動期。2）SLE復(fù)發(fā)的先兆指標。3）抗DNA抗體陽性也可見于結(jié)締組織疾 病，但一般認為是SLE的重疊癥。 2.其他抗核抗體（1）抗Sm抗體、

21、抗RNP抗體【結(jié)果判定】 Hep-2細胞核漿呈粗顆粒型【臨床意義】 Sm抗體：SLE的標志性抗體30% 抗RNP抗體：混合性結(jié)締組織病95%（2）抗組蛋白抗體【結(jié)果判定】 Hep-2細胞核漿呈均質(zhì)性型【臨床意義】 SLE及藥物性SLE95%（3）抗SSA/Ro抗體 、抗SSB抗體【結(jié)果判定】 Hep-2細胞核漿呈細顆粒型【臨床意義】干燥綜合征40-95%新生兒狼瘡征（4）抗核點抗體【結(jié)果判定】 Hep-2細胞核漿呈特 異性顆粒型少點型：1-5個點狀顆粒多點型：5-20點狀顆粒著絲點型：46/92點狀顆?！九R床意義】少點型：SS SLE PBC多點型：PBC 30%著絲點型:局限型PSS 80-

22、95%(5)抗核膜抗體【結(jié)果判定】 Hep-2細胞核邊緣呈線形強著染【臨床意義】 自身免疫型肝炎30-40% 血細胞減少 血管炎（6）抗Scl-70抗體【結(jié)果判定】 Hep-2細胞核仁強熒光,核漿均 質(zhì)型【臨床意義】PSS 25-75%（7）抗PM-Sc1抗體【結(jié)果判定】Hep-2細胞核仁均質(zhì)型【臨床意義】DM、PM 8%(二）抗胞漿抗體檢測1.抗線粒體抗體( Anti-Mitochondrial Antibody，AMA)【結(jié)果判定】 Hep-2細胞漿呈均勻粗顆粒【臨床意義】 PBC 90% 2.抗肌動蛋白抗體【結(jié)果判定】 Hep-2細胞漿呈針狀纖維束【臨床意義】CAH40-90%3.抗Jo

23、-1抗體【結(jié)果判定】 Hep-2細胞漿呈細顆粒型【臨床意義】PM25-35%、間質(zhì)性肺纖維化（三）抗組織細胞抗體1.抗腎小球基底膜抗體(Glomerular basement membrane,GBM)【結(jié)果判定】 基底膜呈花瓣狀著染【臨床意義】抗腎小球基底膜抗體型腎小球腎炎（三）抗組織細胞抗體2.抗胃壁細胞抗體3.抗甲狀腺抗體4.抗平滑肌抗體5.抗胰島細胞抗體（三）抗組織細胞抗體6.肝臟相關(guān)自身抗體（1）ANA、抗平滑肌抗體（2）抗肝腎微粒體抗體（LKM)（3）抗肝細胞胞漿抗原1型抗 體(LC-1)（4）抗可溶性肝抗原抗體(SLA) 和抗肝胰抗體（LP)（三）抗組織細胞抗體7.抗精子抗體8.抗子宮內(nèi)膜抗體9.抗心肌抗體（四）其他自身抗體檢測1.類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF）【臨床意義】 RF陽性見于 1.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 其它自