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文檔簡介

1、PCR檢測外源基因的整合 RT-PCR檢測外源基因的表達PCR檢測外源基因的整合（1）PCR的基本原理 （2）檢測外源基因的整合 （3）PCR檢測的優(yōu)缺點 PCR的基本原理聚合酶鏈式反應(yīng)簡稱PCR（英文全稱：Polymerase Chain Reaction）其基本原理是：DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、

2、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制 。檢測外源基因的整合 在轉(zhuǎn)基因個體的檢測中，通過設(shè)計外源基因兩端的特異引物，采用PCR技術(shù)就可以使外源基因片段得以大量的擴增，然后通過瓊脂糖凝膠電泳檢測特異性擴增帶的有無，從而判斷外源基因是否整合到受體植物的基因組中。PCR檢測所用儀器PCR 儀RT-PCR檢測外源基因的表達（1）RT-PCR的基本原理 （2）RT-PCR技術(shù)的相關(guān)試劑RT-PCR的基本原理RT-PCR又名逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription PCR ）原理是：提取組織或細胞中的RNA，或以轉(zhuǎn)基因個體總RNA或mRNA作為模板鏈，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cRNA。一方面，以cRNA為模板鏈進行PCR擴增，而獲得目的基因。另一方面，以能否獲得特異性的cDNA擴增條帶實現(xiàn)基因表達的檢測。RT-PCR技術(shù)相關(guān)試劑 oligo: 多聚體，相當于mRNA引物 AMV（M-MLV）：逆轉(zhuǎn)錄酶 dNTP：脫氧核苷酸 RNase：RNA酶抑

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